变形链球菌荧光报告株的构建和鉴定

目的探讨变形链球菌(S.mutans)荧光素酶(luc)基因报告株构建方法,拟为探讨抗菌剂对多菌种生物膜中S.mutans的作用提供研究基础。方法将S.mutans UA159乳酸脱氢酶(ldh)基因及其上游部分约1100000片段克隆至自杀质粒pFW5-luc的多克隆位点,构建重组质粒,并经酶切和测序证实。采用自然转化的方法,实现重组自杀质粒和S.mutans UA159同源序列的单次交换。结果经过聚合酶链反应(PCR)和测序分析,筛选出具有报告活性的S.mutans ldh-luc基因荧光报告株。结论成功构建了S.mutans ldh-luc基因荧光报告株。     

变形链球菌ComCDE密度感应参与不同菌种的竞争

目的 研究口腔变形链球菌( S.mutans )ComCDE密度感应系统参与血链球菌(S.sanguinis)的相互竞争作用.方法 采用LIVE\DEAD BacLightTM荧光染色结合激光共聚焦显微镜,观察变形链球菌(简称变链菌)在CSP信号肽诱导下群体细菌自身死亡变化;通过荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定细菌素以及细菌素免疫蛋白相关基因表达变化,分析变链菌ComCDE系统参与菌群生存竞争的调控机制.结果 在细菌竞争中,变形链球菌△comC、△comD 、△comE突变株失去不同菌种间的竞争力,无法抑制相邻Ssanguinis的正常生长;只有野生株保持竞争力,抑制相邻S.sanguinis生长,形成缺陷菌环.CSP信号肽诱导下,变链菌群体死菌/活菌率增高58.1％(P＜0.05);细菌素及免疫蛋白相关SMU.151、SMU.423、SMU.1913c基因分别升高23.3倍(P=0.00)、15.9倍(P＜0.05)、19.3倍(P＜0.05).结论 变形链球菌ComCDE密度感应系统调控变链菌的变链素及免疫蛋白产生、参与不同菌种间竞争生存.     

骨髓基质细胞亚群中多能性相关因子的表达和作用

目的通过检测体外培养人骨髓基质细胞(BMSCs)各细胞亚群中多能性相关因子Sox2、c-Myc和hTert表达水平的影响,探讨BMSCs各细胞亚群多能性和重编程能力的差异。方法采用有限稀释法克隆化培养BMSCs,从快速生长克隆、慢速生长克隆和混合培养BMSCs中各选择3个样本,免疫荧光染色检测Sox2、c-Myc和hTert表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测Sox2、c-Myc和hTert mRNA表达,进行统计学分析。结果 Sox2在快速生长BMSCs细胞克隆为细胞核强表达,在其他各组为胞浆表达,Sox2 mRNA在快速生长细胞克隆表达显著高于其他各组(P<0.05)。c-Myc和hTert呈现相似的表达模式,在快速生长细胞克隆和混合培养BMSCs均为细胞核强表达,在慢速生长细胞克隆为胞浆表达,而三组间c-Myc和hTert mRNA表达水平均差异无统计学意义(P>0.05)。结论快速生长BMSCs细胞克隆中多能性相关因子Sox2表达高于慢速生长细胞克隆,提示细胞亚群的克隆形成能力可能与细胞多能性和重编程能力正相关,Sox2可能是细胞未分化性能的关键调控因子。c-Myc和hTert可能存在协同作用。     

饥饿状态粪肠球菌生物膜胞外多糖的合成能力

目的探讨饥饿环境对粪肠球菌生物膜胞外多糖合成能力的影响。方法体外培养饥饿状态粪肠球菌形成48h生物膜,凝集素标记结合倒置荧光显微镜观察胞外多糖分布情况,提取饥饿状态浮游粪肠球菌和对数期、稳定期、饥饿状态粪肠球菌48h生物膜胞外多糖,蒽酮法定量分析比较胞外多糖合成能力。结果饥饿状态粪肠球菌形成的48h生物膜内胞外多糖呈云絮状,与细菌分布区域不完全一致;生物膜细菌合成水溶性和水不溶性胞外多糖的能力均高于浮游细菌(P<0.05);其合成水溶性胞外多糖的能力与对数期和稳定期细菌无显著差别(P>0.05),合成水不溶性胞外多糖的能力高于后两者(P<0.05)。结论饥饿状态粪肠球菌合成生物膜胞外多糖的能力增强。     

不同设计形式铸造桩核修复重度缺损磨牙三维有限元分析

目的 通过三维有限元方法分析不同根桩数目铸造桩核修复重度缺损上颌第一磨牙后牙体组织应力分布.方法 以右上颌第一磨牙为标本,通过CT扫描获得图像信息,采用Mimics三维建模软件、FreeForm视觉设计系统建立健康上颌第一磨牙、单根铸造桩核、双根铸造桩核以及三根铸造桩核修复重度缺损上颌第一磨牙的三维有限元模型;利用Ansys有限元软件分析比较加载后牙体组织的Von Mises应力、拉应力和压应力峰值分布和变化.结果 随着根桩数目从单根桩增加到双根桩和三根桩,牙本质的Von Mises应力峰值和压应力峰值呈减小趋势,而拉应力峰值增大并集中在与核有夹角的腭根桩和远中颊根桩末端对应的根管牙本质.桩核修复后的磨牙牙体组织应力峰值均比健康第一磨牙小.结论 铸造桩核修复重度缺损上颌第一磨牙时,根桩数目和桩与核的夹角均影响牙体组织应力分布.     

iCIK过继性细胞治疗口腔鳞状细胞癌的回顾性研究

目的研究改良的细胞因子诱导杀伤细胞（iCIK）过继性治疗口腔鳞状细胞癌（OSCC）的疗效。方法回顾2008年7月至2013年4月60例OSCC患者,根据治疗方式分为iCIK组（手术治疗＋iCIK治疗）及对照组（手术治疗）,不良预后者术后行放疗或放化疗。统计两组的复发转移率、生存率、无病生存期及总生存期。分析iCIK组培养前后外周血单个核细胞（PBMC）及iCIK细胞的T细胞亚群比例及Th1细胞因子分泌水平。结果 iCIK组复发转移率低于对照组（16.67％vs 40.00％,χ2＝4.022, P＝0.045）,且无病生存期高于对照组（50.96±3.69 vs 38.15±4.90,χ2＝4.163,P＝0.041）。但两组的死亡率及总体生存期差异无统计学意义。 iCIK培养后T细胞及CTL细胞比例、IL-2及IFN-γ水平显著增高。不良反应发生率为1.17％,无严重不良反应。结论 iCIK辅助治疗可延长OSCC患者无病生存期,减少复发或转移的发生,但未改变最终的预后,长期疗效有待进一步观察。 iCIK高表达CD3＋CD8＋,分泌高浓度的Th1细胞因子,具有较强的细胞免疫及抗肿瘤能力,且治疗安全性良好。     

R-Endo镍钛系统在根管再治疗中的应用

目的评价R-Endo镍钛机用器械在离体牙根管再治疗中的应用性能。方法收集根尖孔发育完成的单根管恒牙,根据根管弯曲度分层随机分组。使用牙胶或RealSeal树脂充填,而后分别使用Gates-Glidden钻＋K锉、HERO 642镍钛机动和R-Endo镍钛机动再治疗。记录再治疗时间及从根尖孔推出的碎屑重量,并拍摄术后X线片,AutoCAD 2008软件分析残余充填材料与根管壁的面积比。结果 R-Endo镍钛系统再治疗时间较长（P＝0.003）;推出根尖孔碎屑量较Gates-Glidden钻＋K锉少（P＝0.001）,与HERO 642镍钛系统相比差异无统计学意义（P＝0.239）;根管内残余充填材料与根管壁的面积比低于其他两组,但差异无统计学意义（P＝0.157）。 RealSeal充填组再治疗时间（P＝0.001）和推出根尖孔碎屑（P＝0.028）均低于牙胶充填组,两者间差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论 R-Endo机动镍钛系统是根管再治疗的有效方法,其根管清理性能优于手动器械,对根尖周组织激惹度较传统手动器械小,但器械的安全性有待提高。     

根管树脂充填材料的研究进展

牙胶是根管充填的核心材料,已在临床上应用一个多世纪.然而牙胶本身不具有粘接性,充填后产生的微渗漏是导致根管治疗失败的主要原因.以树脂为基质的根管核心充填材料和封闭剂在物理化学性能及临床特性等方面优于牙胶充填材料和非树脂类封闭剂,因而有望成为牙胶替代材料(GPR)应用于临床.本文就GPR树脂材料的结构、特性及存在的问题作一综述.     

根管生物膜及其临床控制的研究进展

生物膜是细菌赖以生存的环境,膜结构可以抵御外界因素如抗菌剂的影响,对细菌有保护作用.牙髓感染性疾病中根管生物膜的形成与疾病的治疗和预后密切相关,有关根管生物膜的研究将有利于找出能更有效地治疗牙髓感染性疾病的新方法.     

变形链球菌表面蛋白多肽片段在转基因番茄中的表达

目的在获得含编码变形链球菌表面蛋白唾液粘附区片段基因的转基因番茄原代种子的基础上,应用分子生物学的方法检测外源基因在转基因植株中的表达。方法用CTAB法提取子代番茄总DNA,PCR筛选含变形链球菌PAc基因唾液粘附区片段的转基因番茄子代植株;用Trizol提取番茄总RNA,RT- PCR检测外源基因的转录情况;提取番茄果实总蛋白,用Bradford法测定番茄果实总蛋白含量;通过Western blot检测外源蛋白的表达情况,并用ELISA法对外源蛋白含量进行定量测定。结果获得植物细胞染色体上整合有外源基因并发生表达的转基因番茄子代植株;Western blot和ELISA分析表明含编码变形链球菌表面蛋白唾液粘附区片段基因的转基因番茄子代植株能有效表达外源蛋白,该蛋白含量占番茄可溶性总蛋白的1.2%。结论含编码变形链球菌表面蛋白唾液粘附区片段基因的转基因番茄子代植株能有效表达外源蛋白。