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目的:在获得含编码变异链球菌表面蛋白PAcP和霍乱毒素B亚单位融合基因的转基因番茄原代种子的基础上,应用分子生物学技术检测外源基因在转基因植株中的表达,测定目的蛋白的含量。方法:PCR筛选含编码变异链球菌表面蛋白PAcP与霍乱毒素B亚单位融合基因的转基因番茄植株;提取番茄果实总蛋白,用BCA试剂盒测定番茄果实总蛋白含量;通过Western印迹检测外源蛋白的表达情况,并用ELISA法对外源目的蛋白含量进行测定。结果:PCR扩增分析可见1.6 kb特异性扩增条带,出现特异性条带的植株占总检测植株的55.6%;转基因番茄总蛋白含量为3.93 mg/mL,Western印迹结果显示,在PVDF膜上,约60 kD处出现特异性条带;ELISA测得表达的目的蛋白占番茄可溶性总蛋白的0.18%。结论:含编码变异链球菌表面蛋白PAcP和霍乱毒素B亚单位融合基因的转基因番茄子代植株能有效表达外源蛋白。 相似文献
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依据《天然药物化学》学科特点,本文从注重各章节的导入、加强科研与教学的结合、提高理论与实践的关联等方面总结了教学组在教学过程中的教学方法与体会,同时也体现了教学方法的特色之处及其实用性、直观性和探究性。 相似文献
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HPLC同时测定裸花紫珠中4种黄酮 总被引:3,自引:0,他引:3
目的: 建立同时测定裸花紫珠药材中木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、木犀草素、5,4’-二羟基-3,7,3’-三甲氧基黄酮和5-羟基-3,7,3’,4’-四甲氧基黄酮含量的反相高效液相色谱法。 方法: 采用HPLC,Venusil XBP-C18色 谱柱(4.6 mm×200 mm,5 μm),流动相甲醇-体积分数为0.1%磷酸水系统,梯度洗脱,流速1.0 mL·min﹣1,柱温室温,检测波长350 nm。 结果: 在上述色谱条件下测得木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、木犀草素、5,4’-二羟基-3,7,3’-三甲氧基黄酮和5-羟基-3,7,3’,4’-四甲氧基黄酮的质量浓度分别在0.000 8~0.016,0.001 6~0.032,0.004~0.08,0.002 4~0.048 g·L-1 时与色谱峰面积之间线性关系良好;平均回收率为98.5%(RSD 1.7%),98.6%(RSD 1.6%),98.6%(RSD 1.4%),98.6%(RSD 1.7%)。 结论: 该方法精密度高,重复性好,可用于裸花紫珠药材中木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、木犀草素、5,4’-二羟基-3,7,3’-三甲氧基黄酮和5-羟基-3,7,3’,4’-四甲氧基黄酮的含量测定。 相似文献
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目的:探讨深静脉血栓对非血栓段静脉内皮细胞的损伤作用。方法:90只SD大鼠随机分为血栓组、手术对照组和正常对照组。血栓组在左髂静脉以结扎法建立血栓模型;手术对照组开腹显露髂动静脉模拟同等程度创伤, 但不做静脉分离和结扎;正常组直接取材。取材标本是未形成血栓的上腔静脉和髂静脉及其酶解下的内皮细胞, 送电镜、流式细胞仪凋亡检查。结果:血栓组非血栓段内皮细胞形态与手术对照组均有明显改变;血栓组与手术对照比较, 1, 2, 4, 7 d 术后早期凋亡率差异均有统计学意义(均P<0.05, P<0.01)。手术对照组早、晚期调亡率与正常组比较, 也有显著差异, 但较血栓组程度低, 持续时间较短;手术对照组建模后4, 7d与正常组比较, 晚期凋亡率无统计学意义。结论:局部深静脉血栓可以导致其他远隔部位静脉内皮细胞损伤, 易发生早期凋亡。 相似文献
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目的: 观察含PAcA/CTB的转基因番茄可食用防龋疫苗的免疫原性及免疫反应性。方法: 将18只6~8周龄的雄性BALB/c小鼠,随机分为3组,每周分别灌胃含有PAcA/CTB嵌合蛋白的转基因番茄果汁(实验组)、非转基因番茄果汁(阴性对照组)、灭活全菌疫苗(阳性对照组)。于首次免疫前和免疫后第1、2、3、4周采集血液、唾液样品。ELISA检测其血清和唾液样本中的抗变异链球菌PAcA的IgG、IgA抗体效价。结果: 阳性对照组和实验组小鼠血液和唾液中特异性抗体从免疫后1周开始升高,初始免疫后第4周达高峰,分别与阴性对照组比较存在统计学差异(P<0.05或P<0.01)。免疫后第2、3、4周阳性对照组与实验组差异有统计学意义(P<0.05)。结论: 转基因番茄所表达的外源目的蛋白具有抗原性,能够诱导BALB/c小鼠产生免疫应答。 相似文献