组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA阻断MAPK信号通路并诱导HL-60细胞凋亡

本研究旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂-SAHA（suberoylanilide hydroxamicacid）诱导人急性髓性白血病细胞株HL-60凋亡的分子机制。采用MTT法,瑞氏-姬姆萨染色和Hoechst33342/PI荧光染色方法,检测SAHA对HL-60细胞生长的抑制作用及细胞的形态变化;通过流式细胞术、Western-blot方法测定HL-60细胞的周期变化以及多种信号蛋白的表达。结果表明：SAHA可以呈剂量时间依赖性抑制HL-60细胞的生长;经2μmol/L SAHA处理12-48小时,HL-60细胞显示细胞周期被阻滞于G0/G1期;经Hoechst33342荧光染色后细胞核出现明显的凋亡小体结构;Western blot检测证实,SAHA作用HL-60细胞后caspase3被激活,其底物蛋白聚ADP核糖聚合酶[po-ly（ADP-ribose）polymerase,PARP]发生剪切,细胞发生凋亡;对细胞凋亡相关信号转导通路P44/42 MAPK及PI3K/Akt检测结果表明,涉及MAPK信号通路的Raf及ERK激酶磷酸化受到明显抑制,而Akt及其下游mTOR激酶的活性没有明显改变。结论：SAHA对HL-60细胞的杀伤作用主要是通过诱导细胞凋亡实现,与细胞增殖相关的P44/42 MAPK信号通路被阻断是细胞凋亡发生的机制之一。     

急性缺血性脑卒中病人早期实施综合性康复护理效果的研究

[目的]探讨早期综合性康复护理对急性缺血性脑卒中病人日常生活能力和神经功能恢复的影响。[方法]将64例首次发病的急性缺血性脑卒中病人随机分为两组，两组病人均给予神经内科常规治疗和护理，实验组病人另外进行早期综合性康复护理并持续至出院后12周。两组于入院当时、出院时、出院后6周、出院后12周用日常生活能力评估量表（RNADL）和简易智能量表（MMSE）进行效果评价。[结果]实验组病人RNADL、MMSE评分出院时即有提高，出院后12周有明显提高；出院时、出院6周、出院12周RNAPL、MMSE评分两组比较均有统计学意义（P〈0．05）。[结论]早期综合性康复护理可有效提高急性缺血性脑卒中病人的日常生活能力，并改善其神经功能。     

热休克蛋白90抑制剂17-AAG诱导K562细胞凋亡作用的研究

目的研究热休克蛋白90(Hsp90)抑制剂17-AAG诱导人白血病细胞系K562细胞凋亡及其分子机制。方法用17-AAG处理K562细胞,用四氮唑盐还原法(MTT法)检测17-AAG对K562细胞增殖抑制的剂量-时间-效应关系,瑞特-姬姆萨染色观察细胞形态学变化,Hoechst 33342荧光染色观察凋亡细胞核的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化,Western blot检测相关蛋白分子的变化。结果17-AAG呈时间和剂量依赖性抑制K562细胞,5μmol／L 17-AAG作用24 h,K562细胞增殖抑制率接近50％,阻断细胞周期于G0／G1期。5μmol／L 17-AAG作用12 h G0／G1期细胞占47．22％;24 h占71．62％,并出现明显的凋亡峰。17-AAG可有效清除Hsp90底物蛋白,阻断Raf／Mek- Erk及PI3K／Akt信号通路。结论17-AAG通过抑制K562细胞中Hsp90的分子伴侣功能,清除其底物蛋白Bcr-Abl、Raf-1、Akt、Cdk4、XIAP、survivin等,导致细胞内与增殖和抗凋亡相关的Raf/Mek-Erk、PI3K／Akt信号通路被阻断,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

FGF2对BMP-Smads信号转导通路的负调节机制初步研究

目的 :利用小鼠前成骨细胞系MC3T3 E1初探FGF2对BMPS Smads信号转导通路的调节机制。方法 :构建含 5个串联的来源于Smad6启动子的R Smads结合序列 (GC2 )的荧光素酶报告基因质粒 ( 5GC2 Lux)。以该质粒探讨FGF2对BMP组成活化型受体I(caALK 2 )激活的Smad5转录调控能力的影响。外源转染去除Smad5分子中MEK ERK通路磷酸化位点的突变体 ,探讨FGF2伙化的MEK ERK对BMPS Smads通路的调节作用。结果 :所构建报告基因质粒能够特异反映Smads的转录激活能力的变化。FGF2能够显著下调BMP组成活化型受体(caALK2 )激活的Smad5转录调控能力。外源转染Smad5突变分子仅能部分逆转FGF2对Smads通路的负调节效应。结论 :FGF2参与调节BMPs活化的信号通路可能不仅限于通过活化MEK ERK信号转导通路来下调Smads转录调控活性     

不同转移潜能癌细胞亚系分离鉴定和细胞克隆模型建立及在转移机理研究中的应用

不同转移潜能癌细胞亚系分离鉴定和细胞克隆模型建立及在转移机理研究中的应用高进，刘玉琴，韩立群，于晓，赵雪梅等（中国医学科学院，中国协和医科大学基础医学研究所，北京１００００５）本研究包括对３个转移性癌细胞，系即动物癌细胞系ＭＦＣ、ＬＡ７９５和人癌细胞...     

俞同芳治疗温病的经验

上海已故名医俞同芳先生(1898～1969),精研医理,勤求古训,博采众长,学前贤师古而不泥古,治今病颇能灵活通变,擅长内、妇、儿科,尤擅治温病,积有五十年之经验。曰:温邪为病,变化最速,毫厘之失,祸即旋踵,把握病机,才能应变裕如。故投剂以轻灵建功,效颇卓捷。综观俞师治温经验,可归纳为:透泄以祛邪,护津以顾本,熄风开窍以防变。兹分别介绍如下:一、透泄以祛邪透者,引邪外出之谓。俞师曰:“透不独专于发汗,实启门驱贼之计也。”透能开通闭郁,宣畅气血,达到祛邪目的。温邪最易耗津劫液,祛之不速,留则生变,不论新感伏邪,总以透达为要。邪在表,辛凉     

人多药耐药基因-1及二氢叶酸还原酶基因共转导小鼠造血细胞

耐药基因转导骨髓细胞对化疗病人造血系统的保护作用已受到人们的重视.本研究利用多药耐药基因-1(mdr-1)及二氢叶酸还原酶(dhfr)双基因转染小鼠骨髓细胞,观察造血细胞对两种耐药谱化疗药物的抵抗能力.结果表明,所用逆转录病毒载体转染率达到15%左右,转基因骨髓细胞CFU-GM对taxo1及MTX的耐药能力明显增强,说明外源基因在造血祖细胞中的正确表达;转基因骨髓细胞回输给同系小鼠7个月后,FCM技术仍可检测到外周血白细胞gp170的表达,且其基因组DNA中可检测到mdr-1及dhfr基因特异序列,表明两种基因可能已稳定整合至造血干/祖细胞中.上述结果为以骨髓细胞为靶体的耐药基因治疗提供了有用的实验室资料.     

结、直肠癌组织中Survivin和CD105的表达及意义

应用免疫组织化学方法检测Survivin及CD105标记的微血管密度在结、直肠癌及正常组织中的表达.发现Survivin及CD105的表达与结、直肠癌浸润深度、Dukes分期及有无淋巴结转移密切相关.Survivin可能参与结、直肠癌的血管生成,Surivivin及CD105的表达与结、直肠癌患者的预后有一定关系.     

心肌肌钙蛋白I磷酸化及降解与肥厚型心肌病

目的：观察心肌肌钙蛋白I在肥厚型心肌病小鼠心肌组织中的磷酸化与降解作用。 方法：实验于2005-03／2006-01在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所及南京医科大学动物中心SPF级动物房进行。取4周龄BALB／c雌鼠12只，随机分为模型组6只，正常对照组6只，适应性饲养1周后模型组小鼠转染带有EGFP报告基因的CTnIArg146Trp突变基因。饲养至20周龄时二维超声心动图检测证实模型组小鼠室间隔肥厚，断颈处死两组小鼠后，称取小鼠心脏质量（湿），心尖部心肌组织光镜病理学检查，小鼠心肌组织进行Western Blotting检测重组蛋白、肌钙蛋白I的磷酸化及降解表达，GAPDH作为内参半定量。结果：12只小鼠进入结果分析。①模型组小鼠心脏明显增大，心脏质量（湿）／体质量比显著高于正常对照组（P〈0．01）；模型组小鼠心肌细胞肥大、排列紊乱、间质血管增生、少量炎性细胞浸润；两组血清肌钙蛋白I水平均正常（P〉0．05）。②模型组小鼠心肌组织用抗EGFP单克隆抗体在帆55000，24000检测到突变CTnI—EGFP及其降解片断表达。③模型组在M55000，30000，28000分别检测到磷酸化突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白I及其降解片断表达，正常对照组在Mr30000见磷酸化肌钙蛋白I表达，模型组内源性磷酸化肌钙蛋白I表达明显高于对照组（1．18&;#177;0．15，0．97&;#177;0．15,P〈0．05）。④去磷酸化抗肌钙蛋白I单克隆抗体在肛55000，28000，检测到去磷酸化突变肌钙蛋白I-EGFP、内源性肌钙蛋白I降解片断表达，正常对照组未见去磷酸化肌钙蛋白I表达；用针对不同位点的抗肌钙蛋白I单克隆抗体3E3，2I-14，8I-7，MF4分别在M55000，30000，28000检测到突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白I及其降解片断表达，正常对照组在帆30000，见肌钙蛋白I表达，未见降解片断。 结论：Adc CTnI Arg146Trp—EGFP突变基因在小鼠体内成功转染心肌组织并有明显表达及降解片断出现，小鼠心脏呈现明显室间隔肥厚；小鼠内源性肌钙蛋白-I磷酸化表达增强、降解与心肌肥厚的发生、发展及心肌功能的改变可能有关，但两者之间因果关系及确切机制还有待于进一步研究。