有孔牛羊膜联合重组牛碱性成纤维细胞生长因子覆盖Ⅱ度烧伤创面:与无孔牛羊膜及凡士林纱布的比较

目的:观察有孔牛羊膜联合运用重组牛碱性成纤维细胞生长因子覆盖烧伤创面的临床效果.方法:选择以Ⅱ度烧伤创面为主的中小面积热力烧伤患者43例,试验创面面积为1%～2%,采用同体对照设计方法,将每例患者相同性质的创面等分为3份,分别应用有孔牛羊膜(治疗组),牛羊膜(对照组1),凡士林油纱布(对照组2)覆盖烧伤创面,3组均联合运用重组牛碱性成纤维细胞生长因子.结果:治疗组与对照组1(P<0.01)和对照组2(P<0.05)相比能明显缩短以深Ⅱ度烧伤创面为主的创面愈合时间,而在治疗以浅Ⅱ度烧伤创面为主的过程中,治疗组与对照组2相比能明显缩短的创面愈合时间(P<0.01),而与对照组1相比没有明显差别(P>0.05).治疗组换药次数少、疼痛轻.3组均未出现皮疹及其他不良反应.结论:有孔牛羊膜覆盖烧伤创面及联合运用牛碱性成纤维细胞生长因子能加速烧伤创面的愈合.     

人脐带间充质干细胞分离培养条件的优化及其生物学特性

背景:由于大量获取骨髓细胞存在困难,并且骨髓间充质干细胞随年龄的增加出现数量及分化潜能下降,因此需要寻找其他间充质干细胞来源.目的:优化人脐带间充质干细胞的分离培养条件,进一步明确其生物学特性.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-09/2008-03在中国医学科学院血液学研究所国家重点实验室完成.材料:17份脐带标本取自健康足月新生儿,由天津市中心妇产医院提供.方法:脐带采集后在6 h内分别用植块法、胶原酶消化法、胶原酶与胰酶联合消化法进行分离培养,于培养第14天计数集落数,超过50个细胞计为集落.当细胞达70%～80%融合时,胰蛋白酶-乙二胺四乙酸混合消化,以(2.5～5.0)×103/cm2密度传代培养.主要观察指标:比较不同培养方法所获贴璧细胞的形态学特征、细胞产率,应用流式细胞技术分析细胞增殖活性、免疫表型,特异性染色方法鉴定细胞的多向分化潜能.结果:植块法培养6～10 d可见成纤维样细胞从植块边缘爬出,形态与骨髓间充质干细胞相似,散在分布或形成小克隆,原代可获得(5.2±1.7)×105个贴壁细胞/0.5 cm脐带组织,至少可稳定传15代,平均每代扩增6.2倍,在原代细胞克隆数、细胞产率、传代时间及扩增倍数上与胶原酶消化法比较存在明显差异(P＜0.05);而胶原酶与胰酶联合消化法接种后未见明显贴擘细胞.人脐带间充质干细胞的倍增时间为45 h,72.09%细胞处于G0/G1期,不表达造血细胞及内皮细胞标记,高表达整合素和黏附分子CD44,CD90,CD95以及CD73,CD105,在特定诱导条件下,人脐带间充质干细胞能够向成骨及成脂肪细胞方向分化.结论:应用植块法可以从人脐带组织中简便高效地分离出一群具有高增殖活性及多向分化潜能的间充质干细胞,其免疫表型类似于骨髓间充质干细胞.     

低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)表面活性剂法检测试剂的研制

目的 研制低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）表面活性剂直接消除法测定试剂。方法低密度脂蛋白（LDL）与试剂Ⅰ中的表面活性剂Ⅰ形成稳定复合物，而非LDL中胆固醇被胆固醇酶、过氧化物酶消除，反应5min后，加入试剂Ⅰ，与表面活性剂Ⅱ和色原反应，LDL释放胆固醇并显色，LDL的浓度与呈色的深浅成正比。结果LDL-C检测试剂：在方法性能测定中，在2min的测定时间内，LDL-C浓度5．0mmol／L-27．0 mmol／L范围内，线性关系良好（r=0．9912），特异性良好，平均回收率为99．52％，LDL-C低、中、高值血清标本的批内和批间变异系数（CV）分别为2．6％-3．3％和3．5％-4．2％，乳糜微粒、胆红素和血红蛋白等于扰不明显；方法对比实验表明，其与PVS沉淀法、Friedewald公式法及其日本第一化学试剂相关良好，r值分别为0．967，0．9913，0．9779。结论 LDL-C检测试剂各项指标符合临床要求。     

β-catenin特异的shRNA干扰对K562细胞作用的初步研究

本研究在探讨β-联蛋白（β-catenin）序列特异的小发夹RNA（shRNA）干扰其表达后对K562细胞生长的影响。采用脂质体介导方法，将含编码β-联蛋白特异的shRNA的质粒转入K562细胞，经G418筛选提高细胞阳性率，用实时定量PCR和Western blot分别检测干扰后β-联蛋白转录水平及蛋白水平的表达变化，通过绘制生长曲线、MTT测定及集落培养等方法观察干扰后细胞生长能力的差别。结果发现：与对照组相比，转染后72小时干扰质粒可有效降低K562细胞β-联蛋白mRNA水平的表达（p〈0．05），但短期培养对蛋白水平的表达未发现明显影响。经G418长期筛选后，对照组可见细胞阳性率逐渐提高，并可筛选到几近100％阳性的细胞克隆，而干扰组细胞则逐渐死亡。在G418存在下，干扰组与对照组K562细胞短期增殖曲线及MTT结果显示两组间无明显差异，但集落培养发现，干扰组细胞无论集落形成率（P〈0．001）还是形成的集落大小均明显低于对照组，说明干扰质粒可影响细胞的集落形成能力。结论：β-联蛋白特异的shRNA干扰可以有效降低K562细胞中β-catenin基因的表达，降低细胞集落形成能力；K562细胞的生长依赖于β-联蛋白的存在，针对β-联蛋白的RNAi治疗或其它靶向治疗可能对CML治疗有效。     

根管封闭材料的生物学特点及其临床应用

致密的封填是根管治疗成功的关键之一,其主要目的是为减少经由口腔或根尖周围组织渗透进入根管系统的信道,以及将根管清创、修形过程中无法完全移除的刺激物封闭于根管系统内.影响根管封填材料封闭效能的最重要因素还是材料的理化性能,优良的技术配合理想的材料,才能成功地做好根管封填.根管充填材料的分类为以氧化锌丁香油为基质的根充填糊剂,以环氧树脂为基质的根充填糊剂及含有氢氧化钙混合物的根充填糊剂.根管治疗术常用药物有氢氧化钙糊剂,Vitapex糊剂,氧化锌丁香油酚糊剂类.根管封闭技术在热载体牙胶充填和激光根管充填方面已取得了一定进展.     

肾癌腔静脉癌栓20例诊治体会

目的提高肾肿瘤合并下腔静脉癌栓的诊治水平。方法收集我院自1996年1月至2006年2月收治的20例肾癌合并腔静脉癌栓患者临床资料并进行随访分析。结果术前影像学诊断均无区域淋巴结或远处转移，通过超声、CT或MRI明确有腔静脉癌栓，膈上型1例；膈下型19例，其中肾静脉型11例，肝下型5例，肝内型3例。19例患者手术成功，1例术中死亡。术后病理分期（Robson分期）ⅢA期19例，ⅢC期1例。术后病理透明细胞癌17例，孔头状腺癌2例，血管平滑肌瘤1例。18例获得术后随访4～70月，平均38个月，2例分别于术后18、23个月因癌死亡，16例无瘤生存。结论手术是肾癌合并腔静脉癌栓的有效治疗方法，提高手术技巧和围手术期处理可增加手术的安全性。     

过敏原检测的光化学灭活病毒液态质控物的制备及稳定性观察

目的制备过敏原检测光化学灭活病毒液体质控物。方法收集外观清晰、无溶血的标本每次测试完后剩余的新鲜血清,用复合保护剂及光化学灭活病毒法制备过敏原检测的液体质控物并观察其稳定性。结果用复合保护剂及光化学灭活病毒法制备过敏原检测的液体质控物与人血清的性状相近,不需复溶,储存时间长,在4~8℃及-20℃的条件下至少可达85周。结论该液体质控物不需复溶,且稳定时间长。     

周期性张应力诱导成纤维细胞凋亡中p38MAPK信号通路的作用

背景:当牙齿受异常咬合力时会导致牙体吸收、牙周组织的大量破坏.目的:研究牙周膜成纤维细胞在受到周期性张应力刺激后是否发生凋亡及p38MAPK信号通路是否参与该凋亡过程.方法:取4～7代成纤维细胞,同步化后随机分为对照组、加力组和SB203580组.加力组和SB203580组细胞加载力值为12%表面应变率,加力频率为6个循环/min,即5 s拉伸,5 s松弛.SB203580组细胞在加力前1 h加入终浓度为20 mmol/L的p38MAPK抑制剂SB203580.分别在加力6,12,24 h,取各组细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测细胞凋亡基因bax mRNA的表达.结果与结论:与对照组比较,加力后成纤维细胞凋亡率及bax mRNA表达增加(P < 0.05),且随着加力时间的延长而增强,12 h达高峰,之后逐渐下降.与加力组比较,SB203580组对应时间点细胞凋亡减少(P < 0.05),bax mRNA表达降低.说明细胞受到力学刺激会发生凋亡,而丝裂原活化蛋白激酶p38MAPK信号通路参与了该凋亡过程.     

骨形态发生蛋白9诱导骨骼肌源性干细胞的成骨分化

背景:已有实验报道部分骨形态发生蛋白能够诱导间充质干细胞等向成骨细胞的分化。目的:评估骨形态发生蛋白9定向诱导骨骼肌源性干细胞成骨分化的能力。方法:采用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶二步消化法提取兔骨骼肌源性干细胞,用重组腺病毒的方法将骨形态发生蛋白9导入细胞,通过碱性磷酸酶定量测定、钙盐沉积实验观察骨形态发生蛋白9对于骨骼肌源性干细胞成骨分化的定向诱导作用。结果与结论:成功分离培养兔骨骼肌源性干细胞,免疫细胞化学染色80%以上的细胞呈Sca-1阳性。骨形态发生蛋白9能诱导骨骼肌源性干细胞碱性磷酸酶的表达,且能够促进细胞的钙盐沉积。提示,骨形态发生蛋白9具有定向诱导骨骼肌源性干细胞分化成骨的能力。     

慢性淋巴细胞白血病患者免疫球蛋白重链片段及其突变状态的研究

目的 探讨我国慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者免疫球蛋白重链可变区基因(IgVH)突变状态、基因偏颇性及其预后价值.方法 应用多重PCR法检测CLL患者表达型IgVH片段使用情况及突变状态,并与患者生存和预后进行相关性分析.结果 ①共检测初诊CLL患者85例,80例(94.1%)成功测序.②IgVH片段的使用存在明显的偏颇性,其中常见的为VH3家族(32例,40.0%)、VH4家族(24例,30.O%),而VH5、VH6和VH7家族少见.VH4-39是最常见的VH基因片段.而J4和D3分别是JH家族和DH家族中使用频率最高的片段.③IgVH突变型56例(70.0%),非突变型24例(30.O%).其中VH3家族突变率为90.7%(29例),VH4家族突变率为62.5%(15例).④突变组与未突变组患者无进展生存时间(82个月和17个月,P=0.000)和总生存时间(90个月和41个月,P=0.009)差异均有统计学意义.⑤CLL患者IgVH CDR3区序列具重现性,2例VH片段为VH1-69的患者其CDR3序列与文献报道序列有很高的同源性.VH片段为VH1-18、VH3-7、VH3-23的患者中分别有2例CDR3序列完全相同.结论 不同地区间CLL患者IgVH基因家族使用情况和突变状态存在一定差异,IgVH CDR3区序列具重现性,推测相对有限的抗原参与了CLL的发病.