重组人骨形态发生蛋白7的腺相关病毒载体的构建

目的构建重组人骨形态发生蛋白7(hBMP7)的腺相关病毒(AAV)载体。方法通过RT-PCR方法,从HEK293细胞中扩增hBMP7全长cDNA并亚克隆入通用型AAV载体质粒pSNAV。将pSNAV-hBMP7质粒DNA转染BHK-21细胞,筛选出携带hBMP7的AAV载体细胞株—BHK-21细胞。用能表达Rap和Cap的重组1型单纯疱疹病毒HSV1-rc/ΔUL2按MOI=0·1感染BHK-21载体细胞株后收获病毒液,通过氯仿—PEG/NaCl沉淀—氯仿抽提纯化病毒。结果所克隆的hBMP7全长cDNA经测序证实和已知hBMP7序列完全一致。通过用能表达Rap和Cap的重组1型单纯疱疹病毒HSV1-rc/ΔUL2感染携带hBMP7基因的AAV载体细胞株BHK-21细胞的方法获得了滴度为2×1012vg/ml、纯度达99%的重组人骨形态发生蛋白7的腺相关病毒载体(AAV-hBMP7)。结论RT-PCR方法从HEK293细胞中扩增克隆hBMP全长cDNA是一种有效可行的方法。成功地构建了高滴度、高纯度的AAV-hBMP7载体,为进一步体内及体外研究基因治疗促进骨愈合提供了有力的工具。     

对称性颅脑损伤的临床诊断与治疗(附123例报告)

目的提高治疗对称性颅脑损伤临床疗效。方法总结123例对称性颅脑损伤患者的临床资料,对其临床特点和治疗情况进行回顾性分析。结果预后良好64例(52.0%),中残25例(20.3%),重残8例(6.5%),植物生存4例(3.3%),死亡22例(17.9%)。结论对称性颅脑损伤是一种较为危重的特殊损伤类型,重视其临床特点,严密观察病情变化,正确把握治疗适应证,方可提高疗效。     

Post-injury regeneration in rat sciatic nerve facilitated by neurotrophic factors secreted by amniotic fluid mesenchymal stem cells.

Amniotic fluid mesenchymal stem cells have the ability to secrete neurotrophic factors that are able to promote neuron survival in vitro. The purpose of this study was to evaluate the effects of neurotrophic factors secreted by rat amniotic fluid mesenchymal stem cells on regeneration of sciatic nerve after crush injury. Fifty Sprague-Dawley rats weighing 250-300 g were used. The left sciatic nerve was crushed with a vessel clamp. Rat amniotic fluid mesenchymal stem cells embedded in fibrin glue were delivered to the injured nerve. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and immunocytochemistry were used to detect neurotrophic factors secreted by the amniotic fluid mesenchymal stem cells. Nerve regeneration was assessed by motor function, electrophysiology, histology, and immunocytochemistry studies. Positive CD29/44, and negative CD11b/45, as well as high levels of expression of brain-derived neurotrophic factor, glia cell line-derived neurotrophic factor, ciliary neurotrophic factor (CNTF), nerve growth factor, and neurotrophin-3 (NT-3) were demonstrated in amniotic fluid mesenchymal stem cells. Motor function recovery, the compound muscle action potential, and nerve conduction latency showed significant improvement in rats treated with amniotic fluid mesenchymal stem cells. ELISA measurement in retrieved nerves displayed statistically significant elevation of CNTF and NT-3. The immunocytochemical studies demonstrated positive staining for NT-3 and CNTF in transplanted cells. The histology and immunocytochemistry studies revealed less fibrosis and a high level of expression of S-100 and glial fibrillary acid protein at the crush site. Rat amniotic fluid mesenchymal stem cells may facilitate regeneration in the sciatic nerve after crush injury. The increased nerve regeneration found in this study may be due to the neurotrophic factors secreted by amniotic fluid mesenchymal stem cells.     

新基因Tctex5在雄鼠生殖细胞中的表达

目的探讨雄鼠生殖细胞中是否有Tctex5基因的表达。方法从三株体外培养的雄鼠生殖细胞CRL-1715、CRL-2053和CRL-2196细胞株中提取总RNA和蛋白，采用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白质水平分析基因产物的表达。结果Tctex5基因在CRL-1715、CRL-2053、CRL-2196三株细胞中都有高表达。结论Tctex5基因作为一个未知功能的基因，在雄鼠生殖细胞中有丰富的表达，可能参与了精子发生的功能调节，作为男性正常生育的。个新的标志物，它可能在精子发生中扮演了一个重要的角色，该基因在雄性生殖细胞中的发现可能会对男性不育的诊断与治疗提供新的途径。     

保留脊柱后方韧带复合体腰椎管扩大术的基础研究与临床应用

目的评价保留脊柱后方韧带复合体腰椎管扩大术临床疗效及生物力学特征。方法取8个新鲜腰骶椎标本，根据处理方法，分为3组。A组：8个完整腰骶椎标本进行生物力学测定；B组：A组测试后，切除L3-5 3个全椎板，保留后方韧带复合体，即为保留脊柱后方韧带复合体的腰椎管扩大术（改良术式）；C组：B组测试后，将保留的韧带复合体切除，即为传统术式。3组均行轴向压缩实验、三点弯曲实验及扭转实验。2000年6月-2006年6月，收治309例腰椎管狭窄症患者，行保留脊柱后方韧带复合体腰椎管扩大术。其中男152例，女157例；年龄20～80岁，平均57．2岁。病程3个月～41年。单纯腰椎管狭窄症55例；腰椎管狭窄合并腰椎间盘突出症254例，其中合并L4、5椎间盘突出105例，L4～S1椎间盘突出56例，L5、S1椎间盘突出86例，L2、3高位腰椎间盘突出7例。术后采用JOA下腰痛手术疗效评分标准、患者手术满意度及影像学观察进行疗效评定。结果轴向压缩实验：前屈时，A、B组应变、应力、轴向位移均小于C组（P〈0．01）；轴向刚度大于C组（P〈0．01）。后伸时，A、B、C3组间上述指标差异无统计学意义（P〉0．05）。三点弯曲实验：在相同弯矩下，挠度、倾角、弯曲刚度A、C组及B、C组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01），A、B组间差异无统计学意义（P〉0．05）。扭转实验：相同扭角条件，B组承载的扭矩大于C组（P〈0．01）；相同扭矩条件，B组扭角小于c组（P〈0．01），B组扭转刚度大于C组（P〈0．01）。临床应用结果：术中神经根牵拉伤7例；术后脑脊液漏5例，伤口感染4例，经处理后痊愈。309例均获随访，随访时间1～7年。根据JOA下腰痛评分标准，JOA评分平均改善率为86．0％；其中优163例，良112例，可34例，优良率89％。X线片未见椎体不稳。患者手术满意度为87％。结论保留脊柱后方韧带复合体腰椎管扩大术有利于保持脊柱的力学稳定性，疗效佳。     

GMP认证中值得商榷的八个问题

本文对目前GMP技术改造中有关特殊情况下的洁净级别、洁净区地面处理、防止空气倒流措施、非无菌药品直接接触药品的塑料包装清洗灭菌、洁净区空间消毒等八个问题进行讨论，并提出了作者的观点。     

间歇性雄激素阻断治疗晚期前列腺癌效果观察

目的 评价间歇性雄激素阻断治疗晚期前列腺癌的可行性及优点.方法 选取晚期前列腺癌患者59例,随机分为2组.给予间歇性雄激素阻断治疗30例(A组),给予持续雄激素阻断治疗29例(B组),观察两组患者的疾病进展及治疗期间副反应的发生情况,比较两种方法的治疗效果.结果 A组患者平均随访26个月,B组患者平均随访27个月,两组患者疾病进展情况未见明显差异.A组患者副反应低于B组患者且能在治疗间歇期得到缓解.结论 间歇性雄激素阻断治疗方法可行,能够减少患者治疗的副反应,提高患者生活质量.     

失血性休克对肠上皮细胞线粒体编码的细胞色素氧化酶mRNA表达变化的研究

目的　观察大鼠失血性休克后肠上皮细胞线粒体编码基因细胞色素氧化酶亚基 (COXⅠ、COXⅡ、COXⅢ )mRNA的表达变化。方法　采用失血性休克模型 ,分离肠上皮细胞后进行RNA的提取 ,应用RT PCR检测COXⅠ、COXⅡ、COXⅢmRNA的表达变化。结果　大鼠失血性休克 1h ,COXⅠ、COXⅡ基因表达开始增强 ,2h表达最强 ,以后随着休克时间延长 ,表达又逐渐减弱 ,失血性休克晚期 5h表达显著低于正常对照组 (P <0 .0 1)。结论　失血性休克可引起大鼠肠上皮细胞线粒体编码基因COXⅠ、COXⅡmRNA的明显改变。     

腹部外科患者并存肺功能异常的围手术期处理

手术后肺部并发症(postoperative pulmonary complications ,PPC)的发生率近年来虽有所减少,但其发生率仍高达30%[1].早在上世纪60年代,Wightman[2]即指出有基础肺功能异常患者发生PPC的危险性显著增高.虽然有学者得出不同的结论,认为肺功能异常组和肺功能正常组术后发生肺部并发症的发生率无差异[3].但更多的研究则同意Wightman的观点,认为PPC与基础肺功能异常有关[4-5].     

间隙连接蛋白家族新成员Cx36

Cx36是哺乳动物间隙连接蛋白(connexin,Cx)家族γ亚类的第一个成员,它参与形成间隙连接,介导相邻细胞间的物质和信息的直接交换。间隙连接是神经系统构成电突触的结构基础,参与调控神经冲动信息的传递和复杂神经网络的整合,而Cx36是唯一一个在神经系统中优先表达的Cx,因此成为电生理研究领域的热点。就Cx36的发现过程、结构和定位进行了总结,并着重介绍它在神经系统中的功能和调节机制。