表达载体介导的反义RNA抑制人巨噬细胞移动抑制因子的表达

目的：研究表达载体介导的反义RNA对人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的抑制作用。 方法:用亚克隆技术构建可转录MIF反义RNA的真核表达载体pcDNA3-antiMIF。用lipofectamine2000分别将pcDNA3、pcDNA3-antiMIF转染可表达MIF的HEK293(293-MIF)细胞，用Real-time定量PCR鉴定MIF mRNA表达水平。将pcDNA3-antiMIF转化人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)，建立可表达MIF反义RNA的HUVECs(HUVECs-antiMIF)细胞。将MIF的真核表达载体pSecTag-MIF转染HUVECs-antiMIF，用Real-time定量PCR鉴定MIF mRNA的表达水平。 结果:正确构建了MIF反义RNA的表达载体pcDNA3-antiMIF。MIF 反义RNA对293-MIF细胞中MIF表达的抑制水平达32%（P<0.05）。建立稳定表达MIF反义RNA的HUVECs-antiMIF细胞株。HUVECs-antiMIF中MIF的表达受到抑制，表达水平降低40%（P<0.05）。 结论:表达载体介导的反义RNA能有效地抑制MIF的表达，建立了稳定表达MIF反义RNA的HUVECs。     

基于LEADTOOLS V14.5的医学数字图像与通讯图像阅读软件的设计

医学数字图像与通讯(DICOM)图像阅读软件是一个相对独立的软件,它既可以嵌入到医疗影像管理系统(PACS)的影像工作站中,用于DICOM图像的读写、显示和基本的图像处理,也可以单独安装于个人电脑上,方便医生随时随地浏览DICOM图像.LEADTOOLS V14.5是Leadtools公司最新开发的医学软件开发包,在它的基础上开发DICOM图像阅读软件,可以大大缩短开发时间,降低开发成本.我们将从设计原理、编程思路、具体实现等几个方面详细介绍如何应用VC++.NET和LEADTOOLS V14.5,设计DICOM 3.0标准下的DICOM图像阅读软件.     

携有胰岛素样生长因子1重组腺病毒对链脲佐菌素诱导胰岛β细胞损害的保护性研究

目的构建含有鼠胰岛素样生长因子-1(rIGF-1)重组腺病毒,研究rIGF-1在链脲佐菌素(STZ)诱导胰岛β细胞损害中的作用。方法构建重组腺病毒并感染RINm5F细胞,ELISA、Western blotting检测rIGF-1蛋白表达;STZ诱导细胞破坏,检测培养上清中NO水平,胰岛素释放试验进行功能测定,流式细胞检测细胞凋亡,四甲基偶氮唑盐法检测细胞存活率。结果成功构建含有rIGF-1基因重组腺病毒,病毒滴度为4.0×108pfu/ml,rIGF-1在细胞内外有效表达,并具有抑制STZ诱导胰岛β细胞凋亡和NO产生、保护细胞胰岛素分泌和促进细胞增殖的活性。结论胰岛β细胞局部表达IGF-1能够保护细胞功能,抑制NO产生,使胰岛β细胞免受诱导凋亡因子的损害,提高细胞存活率。STZ诱导胰岛β细胞凋亡可能与NO介导有关。     

腺病毒介导的p27mt基因转移对肝癌细胞生长的影响

目的 :研究突变型p2 7基因 (p2 7mt)对肝癌细胞生长的影响。方法 :采用重组腺病毒载体Ad p2 7mt将p2 7mt全长cDNA转入到肝癌细胞系SMMC 772 1中。3H TdR掺入法及软琼脂集落形成实验检测p2 7mt对肝癌细胞增殖的作用。结果 :转染p2 7mt基因的SMMC 772 1细胞在蛋白质水平有高水平的基因表达。其3H TdR掺入量及集落形成率明显低于对照组 (P <0 .0 5)。结论 :p2 7mt基因能抑制肝癌细胞增殖。p2 7mt可作为目的基因用于基因治疗。     

hEGF和hbFGF的C端(78-154aa)融合蛋白的表达、纯化及活性测定

目的:将人表皮生长因子(hEGF)与人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)的C端连接,构建出既可与肝素结合,又具有促进细胞生长活性的融合蛋白,并在大肠杆菌中高效表达。方法:将PCR扩增hEGF全基因与PCR扩增hbFGF5端的231bp的片段连接,克隆到表达载体pJN,构建出含融合基因的表达质粒pJRH。将pJRH转化BL21(DE3)表达菌株,获得融合蛋白的表达菌株pJRH(BL)。Westernblot检测表达产物免疫学活性。表达产物上肝素亲和柱和分子筛进行纯化。结果:融合蛋白表达产量为30%,融合蛋白不仅能与肝素结合,而且具有促细胞增殖的活性。Westernblot检测结果显示融合蛋白有EGF的免疫活性。融合蛋白的等电点为5.2。结论:本研究构建了一个hEGF和hbFGF的C端的融合蛋白,该蛋白基本保持了两者原有的生物活性。作为一个新的活性因子,本研究为探讨活性因子蛋白结构与功能的关系奠定基础。     

氧分压在体监测仪的研制

作者报道一种稳定性较高的氧分压在体监测，为医学研究、临床诊断提供一种新的可靠的测试方法及设备，具有较大的应用价值。     

小鼠抗人BART多克隆抗体的制备和鉴定

目的制备小鼠抗人源性BART的抗体。方法采用原核系统表达人全长BART,经纯化后免疫小鼠制备抗BART的抗体,以Western blot、免疫组化染色法检测抗体的效价和特异性。结果获得高效价的小鼠抗BART的抗体,该抗体能够识别大鼠脊髓组织中的BART分子。海马神经元和星形胶质细胞的免疫组化染色结果显示,BART分子在海马神经元、星形胶质细胞中广泛表达;在海马神经元中,BART与钙离子通道存在共定位现象。结论制备出能特异性识别天然BART分子的抗体,为检测BART分子并进一步研究其功能奠定了基础。     

122例急性戊型肝炎重叠感染患者的肝功能及临床特点分析

目的 比较分析单纯急性戊型肝炎与重叠感染患者的肝功能指标和临床特点.方法 以40例单纯急性戊型肝炎为对照,回顾性分析了122例重叠感染戊型肝炎患者的肝功能指标、临床资料.结果 单纯戊肝组、甲戊重叠感染组、乙戊重叠感染组,三组之间ALT、AST、TBIL、DBIL差异均无统计学意义(P0.05),急性戊肝组与乙戊重叠感染组,甲戊重叠感染组与乙戊重叠感染组的白蛋白、球蛋白有统计学差异(P<0.01);甲戊重叠感染、乙戊重叠感染与单纯戊肝相比较临床合并症多、并发症重.结论 戊型肝炎重叠感染,特别是乙戊重叠感染患者,要加强临床监测,提高早期预防并发症的意识,以降低病死率.     

山东沿海地区碘营养状况和HLA等位基因DQA1*0501、DQA1*0201对AITDs发病的影响

目的探讨山东沿海地区自身免疫性甲状腺病（AITDs）与HLA等位基因DQA1＊0501、DQA1＊0201及碘营养状况对AITDs发病的影响。方法HLA等位基因测定采用PCR-SSP技术，尿碘浓度测定采用砷铈催化分光光度法。结果①DQA1＊0501等位基因为AITDs易感基因（GD和HT的OR值=2．14、2．5）；而DQA1＊0201为女性AITDs保护基因（GD和HT的OR值=0．33、0．27）。②AITDs组尿碘浓度高于300μg／L患者分布频率均显著高于对照组（P〈0．05），且DQA1＊0501（＋）发生AITDs的OR值为2．7，DQA1＊0201（＋）的OR值为0．42；AITDs组碘正常组DQA1＊0501（＋）OR值为5．12，DQA1＊0201（＋）的OR值为0．21。③logistic回归分析发现尿碘浓度对数、DQA1＊0501为AITDs的易感因素，DQA1＊0201为保护因素。结论HLA-DQA1＊0501等位基因与该地区AITDs的发病易感性相关，而DQA1＊0201与女性患者的保护性相关。碘和HLA等位基因DQA1＊0501、DQA1＊0201共同影响GD、HT的发病。     

人KLK1和EGFP双顺反子重组腺病毒构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

目的：构建携EGFP为报告基因和人组织激肽释放酶1(hKLK1)基因双顺反子的重组腺病毒（Ad-hKLK1-IRES-EGFP）,并观察在自发性高血压大鼠（SHR）血管平滑肌细胞（VSMCs）中的表达变化。方法:通过双酶切质粒pBluescritII KS-hKLK1，将hKLK1基因定向克隆至带有IRES-EGFP的腺病毒穿梭质粒pDC316中，构建成重组穿梭质粒 ，将其与腺病毒骨架质粒BHGloxE1，3Cre共转染293A细胞，经包装并获得重组腺病毒，用PCR、酶切及测序方法对其进行鉴定，测定病毒滴度；用重组腺病毒感染VSMCs，用荧光显微镜下观察到的绿色荧光来测定感染率，用RT－PCR和Western blotting法测定hKLK1基因在VSMCs中的表达。结果:PCR、酶切和测序表明携EGFP的重组穿梭质粒pDC316-hKLK1-IRES-EGFP构建正确，并与骨架质粒在293A细胞中成功包装出重组腺病毒Ad-hKLK1-IRES-EGFP，其滴度为4.5×10¹¹/L。重组腺病毒感染VSMCs后，在荧光显微镜下观察到明亮绿色荧光蛋白表达，感染率高达90％以上，可检测到hKLK1基因的mRNA及蛋白表达，并与感染时间(1 d-7 d) 有显著依赖关系，峰值感染复数为100 MOI。结论:成功构建并包装了携EGFP和hKLK1基因的双顺反子重组腺病毒载体系统Ad-hKLK1-IRES-EGFP；感染VSMCs可检测到基因hKLK1和EGFP的独立共同高表达，该系统为一直观、安全、高效的基因转移系统。