基于In-fusion技术的高通量HIV表型耐药检测系统的建立及应用研究

目的 构建基于In-fusion技术的高通量新型HIV表型耐药检测系统,用于临床表型耐药检测。方法 扩增LacZ基因,插入并替换原骨架质粒pLWJ-SV40-Luc中耐药检测片段构建新的骨架质粒pLWJ-SV40-Luc-LacZ,利用In-fusion定向克隆技术,将耐药检测片段插入到改造后的骨架质粒中构建耐药检测载体(RTV),并与膜蛋白表达质粒VSV-G共转染293T细胞产生HIV假病毒,在药物干预下,通过检测感染细胞中Luc+表达量来反应其对药物的敏感性。结果 成功引入蓝白斑筛选改造出新的骨架质粒pLWJ-SV40-Luc-LacZ。36例临床检测样本成功扩增出30例,利用In-fusion无缝连接技术成功构建26例RTV,其中21株产生的假病毒具有活性。药物敏感性实验结果显示所得的假病毒表型耐药检测结果与基因型耐药解释结果完全一致。结论 成功构建出基于In-fusion技术的高通量新型HIV表型耐药检测系统,可应用于临床耐药检测,以指导临床抗病毒治疗。     

影响绝经期妇女高血压治疗率和控制率的因素

目的：探讨影响绝经期妇女高血压治疗率和控制率的因素。方法：对四川省绵阳市科学城社区50～79岁绝经期妇女中高血压患，应用标准问卷询问高血压病史、治疗情况及家庭月经济收入，并测量其体重指数。用逐步回归法分析一个应变量与多个自变量之间的线性关系。结果：610例绝经期高血压病人的高血压治疗率为58．7％，高血压控制率为21．3％。家庭月收入对高血压治疗率起正面影响(b'=0.535)，年龄对高血压治疗率起负面影响(b’=0.446)。联合应用降压药对高血压控制率起正面影响(b’=0.703)，体重指数对高血压控制率起负面影响(b’=0.277)。结论：本社区50～79岁绝经期高血压妇女的高血压治疗率低可能与低经济收入和高龄有关，而正常体重和联合应用降压药可能有利于高血压的控制。     

醛固酮诱导大鼠相关器官组织钙调神经磷酸酶的活化

目的:阐明醛固酮对重要器官组织细胞内信号分子-钙调神经磷酸酶（CaN）的活化作用及其调控机制。方法:取雄性W istar大白鼠21只,分成醛固酮（A ld）组以A ld 18mg/d腹腔内注射4周,螺内酯组以A ld处理同时予螺内酯20 mg.kg-1.d-1灌胃4周及正常对照组。以放免法测得血A ld、血管紧张素II（AngII）和内皮素（ET）浓度;以硝酸盐法测定血NO浓度;以改良底物发色法测得心、脑、脾、肝、肺、肾和主动脉组织CaN活性。结果:醛固酮处理后,大鼠重要脏器的组织CaN活性均升高,分别为心147%、肺95%、脾65%和脑43%,与对照组比较,心、肺、脾和脑组织CaN活化达到统计学意义;血醛固酮浓度较对照组上升了1.62倍;血NO3-浓度明显下降;血中A ld/NO3-上升了2.95倍,ET/NO3-和AngII/NO3-分别上升了0.32倍和0.25倍。以螺内酯干预后,心、肺、脾、脑、肝组织CaN活化程度明显减轻;对大鼠血醛固酮浓度无显著影响,但血AngⅡ浓度下降、NO3-浓度明显升高;A ld/NO3-、ET/NO3-、AngII/NO3-均明显下降。结论:外源性醛固酮可明显升高血中A ld/NO3-浓度比,并显著活化心、肺、脾、脑组织CaN。螺内酯则可全面维护内皮活性因子稳态,下调血A ld/NO3-、AngII/NO3-和ET/NO3-比值,减轻组织CaN的活化效应。     

普伐他汀早期应用对急性冠状动脉综合征血管炎症反应及内皮功能的影响

目的观察普伐他汀在急性冠状动脉综合征患者早期(发病48h以内)应用对患者血浆一氧化氮、内皮素及C反应蛋白的影响。方法60例急性冠状动脉综合征患者随机分为两组。普伐他汀组30例,常规治疗组(未服用他汀类调脂药物)30例,疗程2周,分别于治疗前后测定血浆一氧化氮、内皮素及C反应蛋白水平。结果普伐他汀组血浆C反应蛋白(32.7±10.8μg/L)及内皮素(50.3±17.2μg/L)水平明显下降、血浆一氧化氮(50.3±10.2μmol/L)水平明显上升,与常规治疗组血浆C反应蛋白(44.3±9.7μg/L)、内皮素(72.4±16.4μg/L)及血浆一氧化氮(42.8±8.7μmol/L)水平比较有显著性差异(P<0.01)。结论普伐他汀在急性冠状动脉综合征患者中早期应用能够抑制血管内皮的炎症反应,稳定粥样斑块,改善血管内皮功能,解除冠状动脉痉挛。     

糖尿病心肌病心肌细胞纤维化的病理改变

目的研究糖尿病(DM)大鼠不同病程心肌纤维化及其相关病理变化。方法选取18只DM心肌模型后大鼠随机分为DM大鼠1个月组(DM1组)、3个月组(DM3组)、6个月组(DM6组),每组6只。另选18只健康大鼠作为对照组。采用氯胺T法测定羟脯氨酸含量,为心肌胶原总含量。免疫组织化学染色测定心肌胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ和心肌细胞心肌型α肌动蛋白(α-actin)及转化生长因子β1(TGF-β1)平均积分吸光度(A)。光镜和透射电镜下观察心肌病理变化。结果DM6组心肌胶原总含量明显高于DM1组和DM3组(P<0.01)。与对照组比较,DM3组心肌胶原蛋白Ⅰ表达伴随TGF-β1的表达开始明显增加(P<0.01)。心肌细胞心肌型α-actin表达较对照组明显减少(P<0.01)。各组大鼠心肌横切面可见粗大胶原纤维相互连接成网状,排列紊乱,分布不匀。α-actin表达明显减少,有糖原沉积现象。结论胶原蛋白Ⅰ呈现持续性增加是DM大鼠心肌纤维化的主要原因。TGF-β1参与了心肌纤维化发生的早期过程。糖原沉积和心肌细胞心肌型α-actin表达减少是DM心肌病的病理基础。     

胆红素代谢紊乱

胆红素代谢紊乱的临床主要表现为黄疸，也是高胆红素血症的表征，同时为肝病最常见的症状之一，黄疸鉴别诊断在临床日常诊疗工作中占极其重要的地位。     

肝细胞损伤的分子生物学机制

随着医学研究的不断进展,我们对各种肝脏疾病的病因有了更加深入的了解,对疾病的治疗也渐渐从对症治疗转移到病因治疗,但是,在强调病因学治疗的同时,不应忽略对肝细胞的保护,因为肝细胞损伤是各型肝病共同的病理基础,是各种原因引起肝脏疾病的共同的表现.     

凝胶迁移阻滞法分析人类端粒酶的DNA结合特性

目的 采用凝胶迁移阻滞法分析研究人类端粒酶DNA结合特性。方法 以地高辛标记的人端粒序列寡核苷酸与人端粒酶提取物进行结合反应，以未参与结合反应的单纯标记寡核苷酸作为参照。实验所设的3组样品中，第一组和第二组标记寡核苷酸加端粒酶，第一组显示一条阻滞性条带，第二组显示两条条带，前方的一条与第一组条带平行，为单纯探针条带，后方的一条迁移率被阻滞，应为探针与纯化的蛋白复合体相结合的结果；第三组为标记寡核苷酸加端粒酶阴性洗涤液，只显示单一探针条带。结果 只有人端粒序列寡核苷酸与人端粒酶提取物结合反应管显示特异的凝胶迁移阻滞性电泳条带。结论 人端粒酶具有和端粒DNA片段结合的特性。     

广西人体重要寄生虫病现状调查

目的了解广西人体重要寄生虫病的流行现状和流行因素。方法按照全国人体重要寄生虫病现状调查的抽样方法进行抽样;粪便虫卵检查采用改良加藤厚涂片法、蛲虫卵检查采用透明胶纸拭肛法,血清学检查采用ELISA方法,并进行绦/囊虫病问卷调查。结果土源性线虫（钩、蛔、鞭、蛲）、华支睾吸虫总感染率为44.23%,检出7种虫种;其中,钩虫、蛔虫、鞭虫、蛲虫、华支睾吸虫感染率分别为18.52%、23.25%、11.37%、19.85%和3.71%。桂东、桂南地区总感染率较高（59.72%、47.98%）;学生总感染率（45.69%）较其他职业人群高;瑶族人群总感染率（76.77%）较其他民族高。≤15岁组人群蛔虫感染率较高,钩虫感染率随年龄的增加而增加,鞭虫感染者主要为5～15岁儿童。绦虫病主要集中在桂北和桂中的少数民族地区,以融水县绦虫感染率最高（8.46%）。结论广西人群土源性线虫感染率与12年前比较有较大幅度下降,但仍然处于较高水平,桂东、桂南地区感染率较高;食源性寄生虫感染呈上升趋势。     

周期型马来丝虫副肌球蛋白基因真核表达重组质粒构建

【提要】 提取周期型马来丝虫总RNA。跟据已知的马来丝虫副肌球蛋白（BmPmy）基因序列，设计合成引物，并引入HindⅢ和BamHⅠ酶切位点，应用RT?鄄PCR技术，扩增BmPmy基因片段，克隆至载体pGEM?鄄T中，经PCR和双酶切鉴定后，亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1（+），成功构建了真核表达载体pcDNA3.1（+）-BmPmy，并转染COS-7细胞后进行RT-PCR分析。转染的COS-7细胞高水平表达周期型马来丝虫副肌球蛋白mRNA，结果与预期相符。