PTEN-PI3K/AKT信号传导途径对胃癌细胞株MKN28凋亡的影响

目的 探讨PTEN-PI3 K/AKT信号传导途径对胃癌细胞株MKN28凋亡的调控作用及其机制.方法 构建PTEN真核表达载体,转染至胃癌细胞株MKN28中(转染组);同样方法转染空载体和等量的PBS分别作为阴性对照组和空白对照组,检测对胃癌细胞株MKN28凋亡的影响及对PI3K、AKT、Caspase-3、Caspase-9的影响.MTT检测细胞生长曲线,TUNEL染色法检测细胞凋亡,Western blot检测蛋白的表达.PI3K抑制剂LY294002处理未转染PTEN的胃癌细胞株MKN28(处理组);对照组加入等量的PBS,抑制PI3K活性后检测细胞凋亡蛋白及凋亡相关蛋白的表达.组间比较采用t检验,时间依赖性检验采用相关分析方法.结果 成功构建PTEN真核表达质粒并转染至胃癌细胞株MKN28中,获得稳定过表达PTEN的细胞模型.MTT检测发现转染组胃癌细胞株MKN28生长明显受到抑制,且呈时间依赖性(r =0.938,P＜0.05).转染组平均凋亡率达到27.86％ ±4.78％,明显高于阴性对照组的0.01％±0.01％(t=9.527,P＜0.05).转染PTEN后,转染组PI3K蛋白表达量为0.25±0.03,明显低于空白对照组的0.93 ±0.16及阴性对照组的0.96±0.15(t=7.235,8.883,P＜0.05).转染组活化的AKT (P-AKT)蛋白表达量为0.21±0.03,明显低于空白对照组的0.93 ±0.13及阴性对照组的0.91±0.12(t =9.347,9.802,P＜0.05).而转染组凋亡相关蛋白Caspase-3及Caspase-9表达量分别为0.86±0.11和0.87±0.12,明显高于阴性对照组的0.16±0.03和0.18 ±0.04及空白对照组的0.15±0.02和0.16 ±0.03(t=10.634,10.999,9.448,9.942,P＜0.05).抑制PI3K活性后,处理组细胞凋亡率为28.60％ ±4.50％,明显高于对照组的0.12％±0.06％(t=10.961,P＜0.05).Western blot检测发现处理组PI3K和P-AKT的蛋白表达量分别为0.18 ±0.02和0.11 ±0.01,明显低于对照组的0.93 ±0.14和0.90 ±0.12(t =9.186,11.363,P＜0.05);同时处理组PTEN的蛋白相对表达量为1.15 ±0.15,明显高于对照组的0.21±0.08(t =9.577,P＜0.05).处理组的凋亡相关蛋白Caspase-3及Caspase-9相对表达量分别为0.86 ±0.12和0.88 ±0.11,明显高于对照组的0.25±0.02和0.21±0.03(t =8.685,10.178,P＜0.05).结论 高表达PTEN可以抑制PI3K/AKT途径,促进胃癌细胞凋亡;抑制PI3K途径可以促进PTEN的表达,两者之间相互作用,共同调控着胃癌细胞的凋亡.     

血管内皮生长因子在电烧伤大鼠血清及创面组织中的表达变化

目的 观察电烧伤大鼠血清和创面组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化,探讨其在电烧伤病变中的作用机制. 方法 按随机数字表法将64只SD大鼠分为正常对照组(8只)和电烧伤组(56只).于伤后6h和1、3、7、14、21、28 d,每时相点处死8只电烧伤组大鼠,留取创面肌肉组织和血清样本.HE染色观察创面组织病理学改变,双抗体夹心ELISA法检测血清VEGF含量,蛋白质印迹法检测创面VEGF蛋白的表达量,免疫组织化学法检测创面VEGF的表达定位,计算微血管密度(MVD)值.对MVD值与VEGF表达强度行相关性分析.取未经任何处理的正常对照组大鼠腿部腹侧肌肉组织及血清进行上述指标检测.对数据进行单因素方差分析与Spearman等级相关分析,两两比较LSD-t检验. 结果 (1)电烧伤组大鼠伤后6h及1d,创面组织肌纤维断裂,大量炎性细胞浸润,组织水肿明显;伤后3d有新生血管生成;7d时肉芽组织及新生血管数量明显增多.(2)电烧伤组大鼠伤后6h及1、14 d,血清VEGF含量分别为(43±11)、(44±11)、(74±27) pg/mL,明显高于正常对照组的(15±9)pg/mL(t值为4.001～5.724,P值均小于0.01).(3)与正常对照组肌肉组织VEGF蛋白表达量(0.21±0.09)比较,电烧伤组各时相点大鼠创面组织VEGF蛋白表达量均升高,伤后7d达峰值,为0.63±0.13(t =4.965,P＜0.05).(4)电烧伤组早期炎性细胞VEGF表达强阳性,后期以新生血管内皮细胞阳性表达为主.(5)电烧伤组伤后3、7、14、21、28 d,创面组织MVD值和VEGF表达强度呈显著正相关(rs=0.834,P＜0.01). 结论 电烧伤后不同阶段,VEGF在大鼠创面组织及血清中的表达各不相同,其改变与伤后体液渗出及创面愈合过程密切相关.     

微孔引流在皮瓣法腋臭切除术预防瘢痕中的作用

目的:探讨微孔引流在皮瓣法腋臭切除术中预防瘢痕发生的作用。方法:76例腋臭患者采用皮瓣法腋臭切除术,去除大汗腺及毛囊后在皮瓣上用尖刀片沿皮纹戳数个长约3mm的微孔进行引流,缝合切口后用弹力绷带包扎压迫手术区敷料。术后第3天及第7天换药,10天拆线并观察皮瓣成活情况,术后3～6月进行随访。结果:76例患者术后均无血肿及感染发生,切口甲级愈合。随访全部患者腋部辛辣汗臭均消失、出汗减少,社交正常。除5例腋窝瘢痕宽约1～3mm外,其余患者瘢痕不明显,皮肤颜色及皮肤质地均正常,腋毛基本消失。结论:微孔引流在保证腋臭手术疗效的同时能显著降低腋部瘢痕的发生。     

大口黑鲈POU1F1启动子区域SNPs对生长的影响

采用基因组步移技术克隆了大口黑妒垂体特异性转录因子POUlFl启动子序列,该序列全长1629by,预测存在4个八聚体转录因子1(Oct-1)结合位点和TATA框等基本转录元件,1个Homeobox转录因子结合位点和2个cAMP反应元件结合蛋白(CREB)结合位点.采用直接测序法研究发现,大口黑鲈POUlFl启动子序列的-18和-183两个位点存在SNPs,该两个突变位点只检测到A、B两种单倍型.对养殖群体进行不同单倍型的基因频率和生长关联分析,结果表明,单倍型A的等位基因频率为0.246,单倍型B的等位基因频率为0.754;群体关联分析表明,基因型为AA型和AB型的个体在体质量、体长、全长、体高和体宽等方面明显高于BB型个体,但基因型为AB型和AA型的个体之间在体质量方面没有明显差异.该研究结果为下一步进行分子标记辅助选择提供了基础.     

非恶性食管-气管/支气管瘘的外科治疗

目的探讨非恶性食管-气管/支气管瘘的临床特点和处理方法。方法回顾性分析2002年1月至2011年10月北京协和医院收治12例非恶性食管-气管/支气管瘘患者的临床资料,其中男6例,女6例;平均年龄49.8(32～72)岁。食管气管瘘7例,食管支气管瘘1例,食管癌术后胸胃支气管瘘2例,食管憩室支气管瘘2例。右侧开胸入路9例,左侧开胸3例。行食管瘘、气管瘘修补7例;食管瘘、支气管瘘修补1例;胸胃瘘、支气管瘘修补术2例;食管下段、左肺下叶切除,食管胃弓下吻合术1例;左肺下叶切除,食管憩室瘘修补术1例。结果全部患者均顺利恢复,无手术合并症或死亡,7～10 d恢复经口进食。术后3个月～1年内复查纤维支气管镜及上消化道造影,无气管支气管狭窄,无食管狭窄,不必采用支架或扩张治疗。术后随诊3个月～10年,均恢复良好。结论食管-气管/支气管瘘排除恶性病因,明确瘘口位置,术前给予充分营养支持,手术Ⅰ期修补瘘口,可以获得良好的治疗效果。     

腹腔镜辅助胃癌根治术后肝功能变化及其影响因素

目的评估腹腔镜辅助胃癌根治术后患者肝功能变化并分析其有关影响因素。方法收集2008年6月至2010年6月期间在解放军总医院行胃癌根治术及结肠癌根治术病例的临床资料,分为开腹胃癌根治术组(OG组,n=43)、腹腔镜辅助胃癌根治术组(LAG组,n=35)以及腹腔镜辅助结肠癌根治术组(LAC组,n=23),比较各组患者术前及术后第1、3、5和7天血清AST、ALT、TB和ALP水平变化并分析其相关的影响因素。结果 LAG组和OG组患者术后5 d内血清AST和ALT水平均较术前明显增高(P<0.05),LAC组患者术后未观察到肝功能的变化(P>0.05);除术后第1天LAG组血清AST和ALT水平显著高于OG组(P=0.035和P=0.041)和术后第3天LAG组血清ALT水平显著低于OG组(P=0.048)外,2组在其余时间点血清AST和ALT水平的差异无统计学意义(P>0.05);LAG组患者术后5 d内血清AST和ALT水平均较LAC组为高(P<0.05)。LAG组和OG组患者术前及术后血清TB和ALP水平无明显变化(P>0.05)。胃癌患者术后血清ALT水平升高与体重指数(P=0.038)、手术时间(P=0.011)、术中肝损伤(P=0.035)以及入肝血流的异常阻断(P=0.048)有关,而与手术方式无关(OG比LAG,P>0.05)。结论胃癌根治术后患者均有一过性肝功能损害,而造成腹腔镜辅助胃癌根治术后患者肝功能异常的原因可能与术中对肝脏的牵拉和损伤以及对入肝血流的异常阻断有关,而非CO2气腹的影响。对于无严重肝功能损害或其他重要脏器疾患的患者来说,腹腔镜辅助胃癌根治术是安全、可行的。     

Effect of estrogen on regression of vascular calcification in rats

Objective To investigate the effect of estrogen on regression of vascular calcification in rats induced by vitamin D3 plus nicotine. Methods Ninety?six female SD rats were divided randomly into control group (n=24) and calcification group (n=72). Vascular calcification of 72 rats was induced by vitamin D3 and nicotine (VDN). On the day 1, the VDN group rats were injected with vitamin D3(300 000 U/kg, i.m), and were intragastric administrated with nicotine (25 mg/kg), after 9 hours, another dosage of nicotine was given again. After 4 weeks, the VDN group rats were subdivided randomly into 4 groups: VDN group(n=16), Sham operation group (n=16), ovariotomy group (n=16), estrogen group(after ovariotomy, 17β ?estrogen was subcutaneously injected, 50 μg•kg-1•d-1, n=16). Results After 4 weeks,the VDN group showed obvious vascular calcification, and calcium content of the vessel wall was significantly higher than that of control group (P<0.01). Extensive calcification was witnessed on the aortic tunica media of the VDN group. After 12 and 8 weeks, the calcium content of the vessel wall in each subdivided groups was significantly lower than that at 4 weeks point(P<0.01), and the lowest calcinm content was in estrogen group, meanwhile the reduction of previously accumulated arterial calcium precipitate in each group was different. Conclusions It is a reversible process that vascular calcification induced by vitamin D plus nicotine in rats. Estrogen can promote the regression of vascular calcification.     

应用前侧皮瓣的半骨盆截肢术

 目的 探讨应用前方带股血管蒂的股四头肌肌皮瓣覆盖臀后部创面的半骨盆截肢术(前侧皮瓣半骨盆截肢术)的手术适应证、手术方法、患者预后和并发症情况。方法 自2009年4月至2010年10月,北京积水潭医院骨肿瘤科对10例患者采用前侧皮瓣半骨盆截肢术,男9例,女1例;年龄30~62岁,平均45岁。软骨肉瘤7例、上皮样肉瘤1例、多形性脂肪肉瘤1例、梭形细胞肉瘤1例。结果 9例患者获得随访,随访时间12~30个月,平均21.5个月。术后仅1例出现轻度皮缘坏死,无伤口感染者。局部复发3例(33.3%),2例软骨肉瘤、1例上皮样肉瘤。死亡3例(33.3%),包括复发的2例、另1例软组织脂肪肉瘤患者因肺转移死亡;1例复发患者带瘤存活;2例患者肺转移带瘤存活;余3例未见复发和转移。结论 前侧皮瓣半骨盆截肢术适用于：(1)臀后部软组织肿块侵及皮肤皮下或反应区到达皮下;(2)骨盆恶性肿瘤复发需行半骨盆截肢,原手术切口污染臀部软组织,无法使用常规后侧皮瓣;(3)臀部皮肤软组织因放疗等原因影响后侧皮瓣血运。此手术的必要条件是髂外血管到股血管通畅良好,可顺利游离且不在肿瘤反应区内。适应证明确的情况下,前侧皮瓣覆盖较常规后侧半骨盆截肢更便于操作和覆盖,便于获得更好的外科边界,术后并发症少。     

罗哌卡因复合右美托咪定肋间神经阻滞用于胸腔镜术后镇痛的效果

目的 探讨罗哌卡因复合右美托咪定行肋间神经阻滞对胸腔镜手术患者术后的镇痛效果.方法 拟行胸腔镜手术患者50例,随机均分为两组:右美托咪定组(DEX组),右美托咪定1μg/kg+0.375％罗哌卡因至30 ml;对照组(C组),0.375％罗哌卡因30 ml.观察两组患者术后4、8、12、24和48 h静息状态和躯体活动(如咳嗽)时的疼痛VAS评分及Ramsay镇静评分,并观察两组患者术后镇痛维持时间及术后不良反应发生情况.结果 术后4、8、12 h DEX组静息状态、躯体活动时的VAS评分均明显低于C组(P＜0.01),术后4、8、12 h Ramsay镇静评分DEX组明显高于C组(P＜0.05).DEX组术后镇痛维持时间明显长于C组(P＜0.01),两组均无肋间神经阻滞的相关并发症.结论 1μg/kg右美托咪定可显著增强0.375％罗哌卡因肋间神经阻滞效果,延长胸腔镜术后镇痛时效.     

锁定钢板治疗不同Neer分型肱骨近端骨折的疗效及生物力学恢复情况的评价

背景　肱骨近端骨折分为不稳定骨折与稳定骨折,目前随着社会科技的进步与发展,针对不同Neer分型肱骨近端骨折患者选择手术或保守治疗仍存在争议,而锁定钢板治疗相较于传统治疗方案具有成角固定、肩袖损伤程度小以及可尽早康复锻炼等优势。目的　探讨不同Neer分型肱骨近端骨折经锁定钢板治疗后的疗效并评价其生物力学恢复情况。方法　选取2012年7月—2018年5月在南方医科大学顺德医院就诊并接受治疗的肱骨近端骨折患者49例,经X线确诊,其中NeerⅡ型16例、NeerⅢ型16例、NeerⅣ型17例。记录患者手术时间、术中出血量、骨折愈合时间以及术后并发症等情况;术后6个月采用Constant-Murley肩关节功能评分评估患者肩关节功能,采用Neer肩关节功能评分法评价患肢功能。结果　患者手术均顺利完成,不同Neer分型肱骨近端骨折患者手术时间、术后并发症发生率比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;不同Neer分型肱骨近端骨折患者术中出血量、骨折愈合时间比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。术后6个月不同Neer分型肱骨近端骨折患者Constant-Murley肩关节功能评分比较,差异有统计学意义（P<0.05）;其中NeerⅢ型肱骨近端骨折患者Constant-Murley肩关节功能评分低于NeerⅡ型,NeerⅣ型肱骨近端骨折患者Constant-Murley肩关节功能评分低于NeerⅡ型和NeerⅢ型（P<0.05）。不同Neer分型肱骨近端骨折患者Neer肩关节功能评分比较,差异无统计学意义（P>0.05）。Pearson相关性分析显示,Neer分型与术中出血量、骨折愈合时间呈正相关（r=0.894,P<0.001;r=0.783,P<0.001）;与术后Neer肩关节功能评分呈负相关（r=-0.431,P<0.001）。结论　肱骨近端锁定钢板在治疗NeerⅡ型、Ⅲ型、Ⅳ型肱骨近端骨折时均具有较好的临床疗效及安全性,临床上治疗建议考虑锁定钢板治疗,但损伤基础直接影响了患者的术中出血量、术后骨折愈合时间及Constant-Murley肩关节功能评分情况,术后的治疗及康复需根据损伤基础,提高肩关节优良率。