栀子酸调节胆汁淤积大鼠SHP-LRH-1信号通路的实验研究

目的：研究栀子酸(geniposidic acid,GPA)对α-萘异硫氰酸酯(α-naphthyl isothiocyanate,ANIT)诱导胆汁淤积 大鼠胆汁酸代谢小分子异源二聚体伴侣受体(small heterodimer partner,SHP)与肝受体同源物1(liver receptor homologue 1,LRH-1)信号通路的调节。方法：将50只SD大鼠随机分为5组,分别为空白组、ANIT组、ANIT+GPA 100 mg/kg组 (AG100组)、ANIT+GPA 50 mg/kg组(AG50组)、ANIT+GPA 25 mg/kg组(AG25组),每组10只,连续给药10 d,空白组和 ANIT组用生理盐水灌胃,ANIT+GPA各组给予GPA,给药的第8天,除空白组外,其余各组用ANIT(65 mg/kg)灌胃1 次造模,继续给药至第10天,测血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)和总胆汁酸(total bile acids,TBA)的含量;分离并培养大鼠原代肝细胞(rat primary hepatocytes,RPH),将RPH分为空白组、40 μmol/L ANIT 组、40 μmol/L ANIT+GPA 4.00,1.00,0.25 mmol/L组(A4G,A1G和A0.25G组),real-time RT-PCR检测RPH中SHP和胆汁 酸合成关键酶胆固醇7α羟化酶(cytochrome P450 family 7 subfamily A member 1,CYP7a1) mRNA转录水平,蛋白印迹法检 测SHP和CYP7a1蛋白表达;沉默实验中,将RPH分为空白对照组、阴性转染组、siRNA-LRH-1组(ZR组)、siRNA-LRH- 1+GPA 4.00,1.00,0.25 mmol/L组(ZR4G、ZR1G、ZR0.25G组),检测SHP,CYP7a1和LRH-1蛋白和基因的表达;过表 达实验中,将RPH又分为空白对照组、阴性转染组(空白转染siRNA-阴性组)、LRH-1过表达组(LRH-1过表达质粒,OE 组)、LRH-1过表达质粒+GPA 4.00,1.00,0.25 mmol/L组(OE4G,OE1G,OE0.25G组),检测SHP,CYP7a1和LRH-1蛋 白和基因的表达。结果：在体实验中,与空白对照组比较,ANIT组的TC和TBA均显著升高(均P<0.01)、TG无差别; 与ANIT组比较,AG100组和AG50组的TC和TBA均显著降低(均P<0.01)。RPH实验中,与空白对照组比较,ANIT组中 SHP的蛋白和基因水平均显著降低(均P<0.01),CYP7a1的蛋白和基因水平均显著升高(均P<0.01);与ANIT组比较, A4G和A1G组的SHP基因和蛋白水平均显著升高(均P<0.01),A0.25G组SHP基因和蛋白水平均升高(P<0.05),A4G和A1G 组的CYP7a1基因和蛋白水平均显著降低(均P<0.01)。LRH-1沉默实验中,与阴性转染组比较,ZR组中CYP7a1和LRH-1 蛋白和基因均显著抑制(均P<0.01),SHP无变化;与ZR组比较,ZR4G,ZR1G和ZR0.25G组SHP基因和蛋白水平均显 著升高(均P<0.01),LRH-1和CYP7a1无显著变化。LRH-1过表达实验中,与阴性转染组比较,OE组的CYP7a1和LRH-1 蛋白和基因均显著抑制(均P<0.01),SHP无变化;与OE组比较,OE4G和OE1G组SHP基因和蛋白水平均显著升高(均 P<0.01),OE0.25G组SHP基因显著升高(P<0.05),LRH-1和CYP7a1无显著变化。结论：RPH中LRH-1的过表达能上调 CYP7a1的活性,GPA可以改善ANIT诱导的胆汁淤积大鼠的生物化学水平和肝脏病理,其机制可能与GPA激活大鼠 RPH中SHP造成LRH-1的消耗来降低CYP7a1的表达有关。     

JunD在浸润性乳腺癌分子亚型中的表达及意义

【目的】分析JunD在浸润性乳腺癌分子亚型及乳腺良性恶性病变中的表达差异及临床意义。【方法】采用免疫组织化学SP法检测JunD在160例浸润性乳腺癌组织、191例乳腺增生组织及20例正常乳腺组织中的表达情况,分析JunD在浸润性乳腺癌分子亚型及乳腺增生性病变中的的表达差异及临床意义。【结果】①与其他分子亚型相比较,JunD在浸润性乳腺癌TNBC亚型中的表达水平明显升高（P<0.05）,其他亚型之间两两比较差异无统计学意义（P>0.05）。②JunD在乳腺癌组织中的表达水平明显低于乳腺增生组织及正常乳腺组织（P<0.01）。③JunD在乳腺癌组织中的高表达率与低组织学分级相关（P<0.01）,与肿物直径大小、年龄、淋巴结转移、ER、PR及临床分期无关（P>0.05）。【结论】JunD在浸润性乳腺癌TNBC亚型中显著高表达,有可能为TBNC亚型乳腺癌患者个性化靶向治疗提供一定方向;JunD在乳腺癌组织中的表达水平明显低于乳腺增生组织及正常乳腺组织,有利于乳腺良恶性病变的鉴别诊断。     

白术挥发油对人类膀胱肿瘤细胞T24生物学行为的影响

目的 研究中药制剂白术挥发油(AMO)对人类膀胱癌细胞T24的抑制作用和诱导凋亡作用.方法 将不同质量浓度的AMO作用于人类膀胱癌细胞T24,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测其在体外对T24细胞生长的抑制作用和其有效的作用浓度;流式细胞术(FCM)分析其诱导T24细胞凋亡的机制;用荧光显微镜观察细胞凋亡形态;用透射电镜进一步观察T24细胞的凋亡形态.结果 MTT法测得AMO对T24细胞的IC50值为100 mg/L,质量浓度为50～200 mg/L的AMO具有诱导人类膀胱癌T24细胞凋亡的作用,且随着药物作用时间延长凋亡率逐渐增加.结论 AMO具有直接杀伤人类膀胱癌T24细胞和促进其凋亡的作用.     

FLT3突变急性淋巴细胞白血病的临床特征

目的：探讨急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）患者FLT3（Fms-like tyrosine kinase）基因内部串联重复（internal tandem duplication,ITD）与其ASP835（D835）突变（mutation in the tyrosine kinase domain,FLT3-TKD）的发生情况及临床意义。方法采用聚合酶链反应法（polymerase chain reaction, PCR）扩增产物,采用限制性酶切产物分析法分析初诊患者基因易突变区的突变情况。结果147例ALL患者中,11例（7.5%）存在FLT3突变。FLT3突变患者与无突变患者在年龄、性别、骨髓原始细胞计数和外周血原始细胞计数的比较均无统计学意义（均P＞0.05）。T细胞型ALL（T-ALL）患者中FLT3突变的发生率为17.2%,其他类型ALL患者中FLT3突变的发生率为5.1%,差异具有非常显著的统计学意义（P＜0.001）。结论 ALL患者存在FLT3突变,且T-ALL患者的FLT3突变率高于其他类型患者。     

易筋经功法结合关节腔灌注治疗早中期膝骨关节炎临床研究

目的:观察易筋经功法结合关节腔灌注治疗早中期膝骨关节炎的临床疗效。方法:选取早中期膝骨关节炎患者90例,随机分为2组各45例。对照组予单纯关节腔注射玻璃酸钠治疗;治疗组在对照组治疗方案的基础上加用易筋经功法治疗。易筋经功法练习每天1次,连续5天,练习5周;关节腔注射每周1次,连续5周。观察2组患者视觉模拟评分法(VAS)评分、生活质量、表面肌电信号指标等变化情况。结果:治疗后,2组疼痛VAS评分均降低,且治疗组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。在世界卫生组织生活质量测定简表(WHOQOL-BREF)评分上,2组生活质量主观感觉、健康状况主观感觉、生理领域、心理领域这4个维度评分均高于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05);2组社会关系领域、环境领域2个维度评分治疗前后比较,差异无统计学意义(P>0.05),且以上6个维度评分2组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。在表面肌电信号(SEMG)上,治疗组治疗前后比较,差异有统计学意义(P<0.05),对照组差异无统计学意义(P>0.05),2组间比较,差异有统计学意义(P<0...     

血管内皮生长因子与抑癌基因PTEN在肝细胞癌组织中表达及临床意义

目的:观察第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(phosphatase and tensinhomlog deleted on chromosome ten protein,PTEN)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)在肝细胞癌(hepatocellular carcino-ma,HCC)中表达及其关系,并探讨两者与HCC发生、发展及肿瘤侵袭性的关系。方法:采用免疫组织化学链霉素亲合素-生物素-过氧化物酶复合物(SP)法、半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测60例HCC及癌旁组织中PTEN与VEGF蛋白及mRNA表达和微血管密度(microvessel density,MVD),并进一步分析它们之间的相关性及其与肝癌组织临床病理分期、侵袭性的关系。结果:HCC中PTEN蛋白及mRNA表达阳性强度明显低于癌旁组织,而VEGF阳性表达强度明显高于癌旁组织,且两者间呈负相关(r=-0·613、-0·572,P=0·000、0·002);肝癌组织分化程度、侵袭性与PTEN表达呈负相关(P=0·02、0·000),而与VEGF和MVD表达呈正相关(P=0·000);MVD与PTEN表达呈负相关(r=-0·439,P=0·001),而与VEGF表达呈正相关(r=0·645,P=0·000)。结论:PTEN和VEGF表达水平一定程度上能反映HCC组织分化和侵袭性强弱;HCC中PTEN表达缺失可能引起VEGF表达增加,从而在肿瘤侵袭、转移中发挥一定作用。     

低体重儿危重先天性心脏病的早期体外循环手术治疗

目的 回顾性分析评价低体重儿危重先天性心脏病体外循环完全性根治手术治疗的效果.方法 2003年11月至2007年12 J=l,28例低出生体重儿因严重心功能不全或低氧血症在复旦大学附属儿科医院心外科早期行体外循环完全根治手术.男16例,女12例;平均孕期为34周(30～41周),其中14例为早产儿;平均出生体重2 010 g(1 370～2 500 g).手术时日龄平均27.46 d(1～61 d),手术时体质量平均2 391 g(1 500～2 500 g).先天性心脏病诊断包括:室间隔缺损(VSO)10例.完全性大动脉转佗(TGA)6例,完全性肺静脉异位引流(TAPVD)5例,室间隔完整的肺动脉闭锁(PA/IVS)2例,主动脉缩窄(CoA)2例,主动脉弓离断(IAA)1例,三房心1例,右肺动脉异常起源于主动脉1例.结果 术后早期死亡2例(2/28,7.14%).手术后机械通气6～165 h,(113.9±168.9)h,CICU滞留1～56 d,(14.4±12.5)d.平均随访16.87个月(2周至50月),1例晚期死亡,2例需再手术或介入治疗.随访12个月,不需再次手术率约为84.4%.结论 合并先天性心脏病的低体重儿,若临床心脏症状危重,药物无法控制,早期行体外循环心内根治手术可有较满意的效果,围术期注意加强重要脏器功能保护.     

实脾固肾化瘀方治疗慢性肾炎疗效观察

目的观察实脾固肾化瘀方治疗慢性肾炎的临床疗效。方法 60例慢性肾炎患者随机分为两组。治疗组32例采用实脾固肾化瘀方治疗,对照组28例给予蒙诺口服,疗程3个月。观察两组治疗前后证候积分、24h尿蛋白定量和肾功能变化。结果治疗后,治疗组部分证候积分明显降低（P〈0.01）,且治疗组低于对照组（P〈0.01）;治疗组24h尿蛋白定量明显降低（P〈0.05）;两组肾功能变化无统计学差异（P〉0.05）;治疗组的临床疗效优于对照组（P〈0.05）。结论实脾固肾化瘀方治疗慢性肾炎有较好的临床疗效。     

基于ISSR标记的麻花艽遗传多样性分析

目的探讨秦艽基原植物之一麻花艽Gentiana straminea的遗传多样性,并构建DNA指纹谱。方法在其自然分布区广泛取样,共涉及西藏、青海、甘肃及四川等地28个居群83份样本,应用ISSR分子标记技术,POPGEN软件分析遗传信息参数,NTSYS软件构建亲缘关系UPGMA聚类图。结果从100条引物中筛出7条多态性好、条带清晰的引物用于ISSR分析。共检测到95个条带,其中多态性条带88个,多态性条带百分率(PPL)为92.63%;麻花艽居群间的期望杂合度(H_e)为0.288 2,多样性信息指数(I_m)为0.437 1,种群间基因分化系数(G_(st))为0.678 3,基因流(N_m)为0.237 1,遗传距离为0.074 3~0.490 0。UPGMA树将麻花艽居群主要分为2大支。结论麻花艽种群遗传多样性水平较高,居群间遗传多样性水平高于居群内;其遗传变异主要存在于居群间;遗传特性与地理分布具有一定相关性。该工作可为麻花艽品种鉴定、物种就地保护、探讨环境等因素对于遗传分化的影响及药材道地性研究提供基础资料。     

HPLC-DAD法同时测定黄芪护肝丸中5种活性成分的含量

目的:建立高效液相色谱法同时测定黄芪护肝丸中芍药苷、橙皮苷、五味子醇甲、大黄素和大黄酚5种活性成分含量的方法。方法:采用ZORBAX SB-C18色谱柱;流动相:甲醇(A)-0.1%磷酸的水溶液(B),梯度洗脱;柱温:30℃;流速:1.0 m L·min-1;检测波长:芍药苷为230 nm,橙皮苷和五味子醇甲为217 nm,大黄素和大黄酚为254 nm。结果:芍药苷、橙皮苷、五味子醇甲、大黄素和大黄酚的线性范围分别为5.12~102(r=0.999 6)、10.4~207(r=0.999 8)、2.58~51.6(r=0.999 7)、3.22~64.4(r=0.999 8)、2.45~49.0μg·m L-1(r=0.999 8),平均加样回收率(n=6)分别为98.6%、99.2%、98.9%、98.3%、98.3%,RSD分别为1.1%、1.0%、1.3%、1.2%、1.2%。结论:本法专属性强,结果准确,重复性好,可用于黄芪护肝丸的质量控制。