食管癌细胞来源的外泌体对肿瘤细胞迁移及侵袭能力的影响及机制研究

目的 探讨食管癌KYSE410细胞来源的外泌体对肿瘤细胞迁移及侵袭能力的影响及其机制.方法 超速离心法分离食管癌KYSE410细胞培养上清中的外泌体;采用透射电镜及Western blotting观察所获得的外泌体的形态及其标志物;共聚焦显微镜观察KYSE410、KYSE510和YES2细胞摄取荧光染料标记的KYSE410外泌体;采用Transwell小室实验分析3种食管癌细胞的迁移及侵袭能力以及KYSE410外泌体对3种食管癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blotting检测Wnt/β-catenin和PI3K/Akt信号通路相关蛋白的变化.结果 透射电镜下观察KYSE410外泌体具有膜结构,直径分布在30～100nm;3种食管癌细胞的迁移及侵袭能力从大到小依次为KYSE410、KYSE510、YES2;KYSE410外泌体能够促进KYSE410、KYSE510、YES2细胞迁移及侵袭能力并增强3种食管癌细胞中β-catenin和p-Akt的表达.结论 来源于高迁移及侵袭能力的食管癌KYSE410细胞的外泌体能够促进自身和低迁移及侵袭能力的食管癌KYSE510、YES2细胞的迁移和侵袭,并且可能通过激活Wnt/β-catenin和PI3K/Akt信号通路发挥上述作用.     

激光捕获显微切割联合SELDI蛋白质芯片筛选肺腺癌早期诊断标志蛋白

目的 探讨应用激光显微切割(LCM)联合表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱蛋白质芯片(SEL,DI-TOF-MS)及模式识别分类技术-支持向量机(SVM)筛选肺腺癌标志蛋白的可行性.方法 将6例新鲜肺腺癌组织标本及其配对的4例正常肺组织制备8μm厚度冰冻切片,改良HE染色;用LCM技术选择性获取同质腺癌细胞和配对正常肺组织细胞.应用PBSⅡ+型SELDI-TOF-MS分析仪(IMAC芯片)分析腺癌及其配对正常细胞的蛋白质表达谱,比对差异点;应用SVM筛选并验证候选标志蛋白的判别效能.结果 平均每个LCM帽子的激光点数约4000 shots,获得了同质性>95%的肿瘤细胞和正常细胞.比较腺癌和配对正常细胞之间的SELDI谱图,共筛选出84个蛋白峰.将差异最明显的10个蛋白峰作为候选标志蛋白.和正常组织相比,6种蛋白在腺癌中呈低表达,4种蛋白在腺癌中呈高表达.差异有统计学意义(P<0.05).初步筛选出3191 m/z蛋白峰作为腺癌诊断标志蛋白.结论 LCM联合SEIDI蛋白质芯片技术有可能筛选出敏感性高、特异性强的肺腺癌标志蛋白;该技术将为肺腺癌早期诊断研究提供新的强有力的工具.     

高糖作用的肾小球系膜细胞SnoN/Ski蛋白表达及泛素化降解

目的: 观察高糖作用的大鼠肾小球系膜细胞内核转录共抑制因子SnoN/Ski及泛素连接酶Arkadia的表达变化,初步探讨SnoN/Ski泛素化降解在糖尿病肾病中的作用。方法: 将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分别设正常对照组 、高糖甲组(培养基含20 mmol/L葡萄糖)、高糖乙组(培养基含30 mmol/L葡萄糖)、高糖+MG132组(30 mmol/L葡萄糖培养基中预先加入0.5 μmol/L特异性泛素蛋白酶体抑制剂MG132)和甘露醇组。用蛋白免疫印迹技术和免疫荧光染色-激光共聚焦显微镜检测各组细胞SnoN/Ski及Arkadia蛋白的表达。结果: (1)正常系膜细胞中SnoN/Ski蛋白大量表达,Arkadia蛋白表达较弱。(2)高糖作用后SnoN/Ski蛋白表达减弱,Arkadia蛋白表达增强(P<0.05)。(3)与高糖组比较,高糖加入MG132后SnoN/Ski蛋白表达增加,Arkadia蛋白表达减弱(P<0.01)。(4)甘露醇组与正常组比较SnoN/Ski及Arkadia蛋白表达均无明显差异(P>0.05)。结论: (1)高糖可通过泛素蛋白酶体途径降解SnoN/Ski蛋白致其低表达。(2)E3连接酶Arkadia参与了高糖诱导的SnoN/Ski的泛素化降解 。     

miR-451对胶质瘤细胞株A172生物学特征的影响

目的 研究miR-451对胶质瘤细胞株A172生物学特征的影响.方法 合成寡核苷酸miR-451拟似物(miR-451 mimics)转染胶质瘤细胞以上调miR-451的表达,real-time PCR检测转染后miR-451的表达,Western印迹法检测目标蛋白表达,应用流式细胞术、MTT法评价细胞生长和增殖的生物学特征变化.结果 转染miR-451 mimics后,real-time PCR检测提示miR-451表达升高,Western blot结果显示癌基因C-myc表达下降＞63.6%,细胞周期正向调节因子CDK2、CDK4、Cyclin D1和Cyclin E表达下降;细胞周期分析表明miR-451 mimics组进入G0/G1期的细胞数较对照组增多达17.4%,出现G0/G1期阻滞;MTT法分析显示miR-451 mimics组细胞生长受抑.结论 miR-451可以抑制人脑胶质瘤细胞生长和增殖能力,具有抑瘤作用.     

益肾解毒通络方治疗慢性肾炎导致的慢性肾功能衰竭失代偿期30例疗效观察

[目的]观察益肾解毒通络方治疗慢性肾炎导致的慢性肾功能衰竭失代偿期的疗效。[方法]将60例患者随机分为两组,治疗组30例,口服益肾解毒通络方治疗,对照组30例,在常规治疗的基础上联合海昆肾喜胶囊治疗。4周为1个疗程。[结果]2个疗程后,治疗组总有效率为83.33%,对照组为56.67%,两组比较治疗组优于对照组,P<0.05。治疗组治疗后肌酐、尿素氮的水平均明显下降,P<0.01,两组中医症状均有改善,治疗组明显优于对照组,P<0.05。[结论]益肾解毒通络方治疗慢性肾功能衰竭失代偿期,可明显降低患者肌酐及尿素氮水平,延缓肾衰进程。     

肿瘤相关微小RNA与凋亡

微小RNA(miRNA) 在转录后水平调控基因的表达.研究证实miRNA通过调控细胞的凋亡,在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的作用.肿瘤相关miRNA与凋亡的研究在未来的肿瘤诊疗中miRNA可能具有广阔的应用前景.     

朱丹溪耳鸣、耳聋证治思想探究

[目的]探讨朱丹溪对耳鸣、耳聋的辨治特色,以期为临床诊治本病提供有益思路。[方法]分析朱丹溪系列书籍中有关耳鸣、耳聋的相关条文,总结其从虚实两端、内外合邪、气血痰郁及内治外治等方面的辨治方法。[结果]朱丹溪强调"耳鸣、耳聋属火",认为本病证型包括虚火、实火虚实两端。以"气血痰郁"为纲辨治,认为少阳、厥阴气郁化火挟痰为本病实证最常见的发病因素;少阴元气、精血亏损、相火妄动为本病虚证最多见的致病因素;正虚邪壅为本病发病的基本病机,四时邪气乘虚而入或致七情郁结生痰化火,从而诱发或加重耳鸣耳聋。临证"脉症相参,详察病机",实证善用清、开、消、通、汗、补诸法助"行气活血解郁,清热祛痰通窍",虚证善于补中兼缓、兼升、兼降,"阴血亏虚,相火妄动,四物为本;元气亏虚,相火妄动,温存以养",并用"内治为主,兼容外治"等辨治方法。[结论]朱丹溪认为耳鸣、耳聋多为郁火挟痰之实证或气血不足、相火妄动之虚证,实证以行气活血解郁、清热祛痰通窍立法,虚证通过补血养阴或温补助阳之法以降虚火,其辨治思想具备临床价值。     

结肠黑变病156例回顾性分析

目的探讨结肠黑变病（MC）的发病特点及与结、直肠息肉的关系。方法回顾分析156例MC临床特点和结肠镜下表现。结果MC男性检出率0．46％,低于女性（0．66％）,男性平均年龄（65．53±13．08）岁大于女性（53．73±13．50）岁,2001年至2007年历年MC检出率呈下降趋势,80％患者有不同程度便秘和服用泻药史。131例（84．0％）患者表现为全结肠黑变,黑变部位无性别差异,43例（27．5％）患者伴发息肉,与同期息肉检出率差异无统计学意义（r=1．205,P=0．298）,Logistic回归分析表明MC伴发息肉与年龄相关,年龄越大,发生全结肠黏膜黑变及伴发息肉的可能性越大。结论MC以全结肠黑变为多,女性发病年龄早,检出率高;年龄越大,MC检出率越高,且伴发息肉可能性越大。     

早期结直肠癌患者凝血指标异常及其临床意义

  目的  探讨凝血指标在早期结直肠癌患者中的表达及其临床意义。  方法  本研究是病例对照研究，收集2010年1月1日至2018年12月31日在昆明医科大学第一附属医院经肠镜下取材病理检查证实为ECC的患者，比较早癌组和对照组在凝血相关指标之间的差异。  结果  早癌组与对照组在PT、PTR、FIB、TT、APTT、PLT、MPV上差异有统计学意义，与对照组比较，早癌组患者的PT、PTR、TT、APTT、MPV值均低，FIB、PLT值升高（均P < 0.05），FIB和MPV是ECC的独立危险因素。  结论  ECC患者存在凝血系统异常，似乎需要预防性抗血小板和抗凝治疗，但抗血小板治疗和抗凝治疗的时间以及用药的种类和方式还有待进一步研究。