棕榈酰化蛋白质组学分析揭示前列腺癌细胞中雄激素促进代谢相关蛋白棕榈酰化修饰

目的 筛选棕榈酰化修饰水平受雄激素诱导的蛋白,探索前列腺癌去雄激素治疗外其他潜在的治疗靶点.方法: 以LNCaP细胞为研究对象,雄激素(Methyltrienolone,R1881,5 nmol/L)或DMSO(dimethyl sulfoxide)处理LNCaP细胞24 h,同时利用人工合成的炔基棕榈酸Alk-C16 (100 μmol/L)对细胞进行代谢标记,收集细胞,裂解,提取总蛋白,加入标记有叠氮化物的琼脂糖珠 (1 mmol/L), 室温反应1 h,利用叠氮化物与Alk-C16末端炔基发生点击化学反应形成的共价键将棕榈酰化修饰蛋白富集在琼脂糖珠上,进行蛋白质谱非标记定量分析(label-free quantitation, LFQ), 比较R1881处理和非处理细胞蛋白棕榈酰化修饰变化情况,筛选棕榈酰化修饰水平受雄激素诱导的蛋白.结果: 实验共鉴定出907个潜在的棕榈酰化修饰蛋白(mascot score> 2, P<0.05), 其中有430个蛋白LFQ值至少有2次不为0.在这430个蛋白中有92个蛋白R1881处理与非处理样品LFQ比值大于 1.5(P<0.05), 说明雄激素能够显著促进该蛋白棕榈酰化修饰.利用Cytoscape软件对92个蛋白进行功能富集分类,发现已知功能蛋白可分为代谢相关,蛋白折叠相关和翻译起始相关3类,其中,代谢相关蛋白包括脂代谢(6个),糖代谢(7个)和呼吸电子传递链(8个)3部分,另外还有少量氨基酸代谢(2个)和其他代谢相关蛋白(2个).参与呼吸电子传递链的细胞色素b-c1复合体亚基2 (cytochrome b-cl complex subunit2, UQCRC2) 雄激素R1881处理和未处理样品LFQ比值最高(>3,P<0.05),说明该蛋白棕榈酰化修饰受雄激素诱导最为明显.LFQ比值最高为UQCRC2,其次为脂代谢相关的长链特异性酰基辅酶A脱氢酶(very long-chain specific acyl-CoA dehydrogenase, ACADVL)和糖代谢相关的6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydrogenase, PGD), 但其LFQ比值均未超过3.结论: 代谢尤其是呼吸电子传递链相关蛋白的棕榈酰化调控机制的研究可能将为前列腺癌的诊疗和靶向药的研发提供新的指导思路.     

角蛋白18与剪切因子PSF相互作用介导PSF的膜易位并维持髓系白血病细胞的化疗敏感性

目的 鉴定多嘧啶结合蛋白相关的剪切因子(polypyrimidine tract-binding protein-associated splicing factor, PSF)在髓系白血病细胞内的伴侣蛋白,探讨PSF在敏感HL60细胞和耐药的HL60/DOX细胞中易位细胞膜的模式和机制.方法: 通过脂质体瞬时转染PSF真核表达载体过表达PSF,进一步结合流式细胞术在转染后24 h,48 h,72 h检测PSF在细胞膜上的表达水平.构建链亲和素结合肽(streptavidin binding peptide,SBP)和PSF的融合表达载体,转染载体,过表达SBP-PSF融合蛋白.通过链亲和素磁珠共沉淀法和质谱分析,鉴定PSF在细胞内的伴侣蛋白.在慢病毒载体中插入角蛋白18 (cytokeratin 18,K18)干扰序列,转染293T细胞制备病毒液.用慢病毒感染HL60和HL60/DOX细胞,获得稳定干扰K18的细胞株.结合流式细胞术检测干扰K18的HL60和HL60/DOX细胞中细胞膜上PSF的表达水平,由此证实CK18在HL60和HL60/DOX细胞中协同转运PSF易位细胞膜机制的异同.结果: 瞬时过表达PSF后的24 h,48 h,72 h连续3 d检测细胞膜PSF表达水平,HL60敏感株细胞膜上PSF表达率分别为22.4%±3.5%, 37.9%±6.0%, 58.3%±8.8%;耐药株HL60/DOX细胞膜上PSF的表达率分别为4.7%±0.5%, 3.9%±0.6%, 2.9%±0.6%;各时间点下敏感株和耐药株的差异有统计学意义,P<0.01.免疫共沉淀和质谱证实K18为PSF在细胞内的伴侣蛋白.干扰K18的表达后,再次分析细胞膜PSF表达,发现PSF在敏感株细胞膜上的表达水平由原来的48.9%±5.4% 降至6.2%±1.0%;在耐药株细胞膜上的表达水平由9.11%±1.2%降至2.21%±0.51%.结论: K18是PSF在细胞内的伴侣蛋白,在敏感细胞中,K18与PSF相互作用可帮助PSF向细胞膜转运;而在耐药株中,由于该功能障碍导致PSF在胞内发生积累从而介导耐药性.     

体内性激素与鼻咽血管纤维瘤的临床研究

目的：探讨鼻咽血管纤维瘤与体内性激素的临床关系。方法：采集24例鼻咽血管纤维瘤患手术后外周静脉血标本（术前24例,术后20例）及24例健康男性青年作为对照组,用放射免疫测定法分别检测鼻咽血管纤维瘤患手术前后对照组血清性激素水平。结果：（1）鼻咽血管纤维瘤患手术前后血清性激素水平变化不大（P＞0．05）;（2）血清雌二醇,孕酮术前水平较正常对照组低（P＜0．05）,血清睾酮术前水平与正常对照组水平变化不大（P＞0．05）;（3）鼻咽血管纤维瘤患后术性激素水平与正常对照组水平变化不大（P＞0．05）。结论：鼻咽血管纤维瘤发病机制与体内性激素水平可能存在一定程度的相关关系。     

活血通脉片对实验性SD大鼠急性血瘀证血液流变性的影响

目的　研究中药复方制剂活血通脉片 (HXTMT)对SD大鼠急性血瘀证的影响 .方法　用 HXTMT混悬液给予SD大鼠灌胃 1wk,第 7日同时对大鼠皮下注射 2次 1g·L- 1 肾上腺素 0 .2 m L ,其间进行 1次寒冷刺激 (冰水 ,0℃ ) 5min,于第 8日晨复制成血瘀实验模型 ,并采血测定血液流变学各指标 .结果　 HXTMT能明显降低全血粘度 (ηb)、血浆粘度 (ηp)、纤维蛋白原 (Fib) (P<0 .0 1)及红细胞比容 (HCT) (P<0 .0 5 ) ;缩短红细胞电泳时间 (EET) (P<0 .0 5 ) ,提高红细胞电泳率 (EEM) (P<0 .0 1) ;亦能明显增强红细胞变形性 (DI)(P<0 .0 5 ) ,降低红细胞聚集指数 (AI) (P<0 .0 1) .结论　HXTMT具有改善血液流变性作用 ,能防治高粘血症和缺血性心脏病     

海上训练与跳伞训练军训伤的流行病学调查

目的　研究空军的跳伞训练和海军的海上训练期间军训伤的流行病学特征 ,制定初步的预防措施 .方法　采用就诊登记和回顾性调查的方法调查了军训伤的发生情况 .结果　空军某部新兵军训伤的发生率为 16 .3% ,海军某部新兵为18.7% ,海军老兵为 5 .5 % .空军新兵和海军新兵的发生率无显著性差异 ,海军新兵和老兵之间的发生率有显著性差异 (P<0 .0 1) .海军新兵的发生高峰为开训后第 2个月 ,海军老兵的发生高峰为开训后第 1个月 ,空军新兵开训后第 2个月发生率较低 ,其余月份均维持较高水平 .海军的受伤部位以小腿和踝关节为主 ,分别占 42 .9%和 17.9% ;空军的受伤部位以踝关节和腰部为主 ,分别占 2 6 .9%和 2 3.9% .海军和空军均以急性创伤性损伤为主要类型 ,且均以关节扭伤为主要伤型 .结论　不同于基础训练的训练内容 ,军训伤的发生情况亦不同 .根据特殊训练的特殊性 ,要制定不同的预防措施     

金属硫蛋白与镉中毒性肝肾损害的关系

目的观察亚慢性镉中毒性肝肾损害,并初步探讨金属硫蛋白（ＭＴ）与肝肾损害的关系。方法用Ｗｉｓｔａｒ大鼠腹腔注射０．５ｍｇ／ｋｇＣｄ２＋的ＣｄＣｌ２３次／周,共１０周,染毒后不同时期处死大鼠,观察肝肾功能变化。结果染毒６周后,大鼠出现了明显的肝肾损害,相应组织中Ｃｄ∶ＭＴ的摩尔数之比均超过７,且随染毒总剂量的增加,Ｃｄ∶ＭＴ值明显增加,病变程度加重。结论肝肾是亚慢性镉中毒的靶器官,非ＭＴ结合的镉可能是损害肝、肾的主要成分。     

外伤角膜瘢痕无晶状体眼戴角膜接触镜后的角膜地形图改变

目的 探讨外伤性角膜瘢痕无晶状体眼戴硬性透气性接触镜前,后角膜表面的改变。方法 对戴该镜者１７眼及对照组（不戴镜）１２眼,在戴镜前后进行角膜地形图检测。结果 戴镜后平均８．４月,角膜散光减少（Ｐ〈０．０１）,角膜表面变得比较规则（Ｐ〈０．０５）,角膜表面的屈光度有变得相对比较平均的趋势。结论 戴硬性透气性角膜接触镜能使角膜瘢痕所致角膜散光减少,角膜表面变得较为规则。     

sTRAIL基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

克隆TRAIL基因的95-281位(sTRAIL)，构建表达载体，建立原核表达体系，优化诱导表达的条件。分离人外周血淋巴细胞，提取总RNA，RT-PCR，克隆sTRAIL的cDNA，构建原核表达载体，优化IPIG诱导的条件。结果：(1)克隆了TRAIL基因95-281位的cDNA，DNA测序结果与报道的一致。(2)构建了sTRAIL基因的原核表达载体，酶切结果与预期的一致。(3)转化宿主菌，优化IPIG诱导条件，发现3mmol/L，诱导3～4h表达最好。sTRAIL基因的克隆及表达为下游中试发酵及纯化奠定了上游的基础，也为研究TRAIL抗肿瘤的机制提供了可能。     

正常儿童尿流率研究

尿流率测定是一种简单的非侵入性的检查方法,是尿流动力学检查中的一个最基本、最必不可少的组成部分。它可以客观地反映下尿路的排尿过程,包括排尿期膀胱、膀胱颈、尿道和尿道括约肌的功能以及它们相互之间的关系。因此,尿流率测定可作为对下尿路症状(lowerurinarytractsymptomsLUTS)患者进行一线筛选的有效检查手段[1-3]。作为泌尿外科的临床工作者,我们在进行尿流率检查时,首先必须知道尿流率各项参数的正常参考值,而由于科技的发展,研究的深入,尿流率检测仪器的精密度和准确度在近半个世纪来有了很大的发展,而且对数据进行统计分析的…     

基层医院胰腺损伤15例的手术治疗

目的 探讨基层医院如何提高诊治胰腺损伤的水平。方法 对1992年1月至2002年12月10年间本院收治的15例胰损伤的病人进行回顾性分析。结果 术前经B超诊断4例，单纯胰腺缝合、引流5例，远端胰及脾切除 近端胰空肠Roux—Y吻合术4例。胰近、远断端空肠双口Roux—Y吻合术5例，胰头十二指肠切除1例，治愈14例，术后死亡1例。结论 胰损伤临床表现隐匿，基层医院技术和设备条件相对较差，术中认直细致探查及合理的手术方式是提高胰损伤病人生存率的关键。