日本血吸虫新基因——蛋白酶体激活因子PA28亚单位的发现与克隆

目的将用EST策略及同源性搜索发现的日本血吸虫新基因——蛋白酶体激活因子PA28亚单位（proteasome activatorPA28 subunit,PA28）cDNA克隆到表达质粒pET32a（+）上,为下一步对该基因进行功能研究做准备。方法将插入于pTrip1Ex2质粒上的cDNA进行测序,测序结果经BLASTx程序搜索,发现该插入cDNA序列所编码的蛋白与小鼠肌肉内的PA28亚基蛋白高度同源。根据表达质粒pET32a（+）上的克隆位点及该cDNA序列设计PCR引物,将PCR产物纯化后连接到pMD 18-T载体上,将重组T载体经EcoRI/XhoI双酶切后切下的SjPA28基因导入原核可溶性表达质粒pET32a（+）中。结果所发现的cDNA所编码的蛋白与小鼠肌肉内的PA28亚基蛋白的同一性达41％,PCR产物的片段长度与预期大小一致,重组T载体及表达质粒经EcoRI/XhoI双酶切后证明具有与目标片段长度相符的插入片段。结论本研究所发现的cDNA所编码的蛋白与小鼠肌肉内的PA28亚基蛋白高度同源,并且已成功地构建出重组表达质粒pET32a（+）-SjPA28。     

血管内皮生长因子与男性生殖系统的血管生成

血管内皮生长因子 (VEGF)是最重要的血管生成促进因子 ,其主要功能有诱导血管通透性增加 ,促进血管内皮细胞迁移 ,刺激内皮细胞增殖进而促进血管生成。本文就VEGF在男性前列腺、睾丸、附睾的定位、表达调控 ,以及其变化所导致的血管生成的改变与男性生殖系统某些疾病的关系作一简要综述     

离体和在体消毒方法相关性的初步研究

目的:探索建立以猪皮和仿真皮作为载体代替人手的离体消毒模拟现场试验方法。方法:以金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌,大肠埃希菌,粘质沙雷氏菌为试验菌,参照《消毒技术规范》方法,采用消毒剂对皮肤消毒模拟现场试验方法进行试验研究。结果:离体模型中,仿真皮消毒模拟现场试验结果和皮肤消毒模拟现场试验结果的细菌杀灭对数值均大于3.0,猪皮消毒模拟现场试验结果的细菌杀灭对数值均大于2.0,离体仿真皮消毒模拟现场试验结果与人手消毒模拟现场试验的结果一致,离体猪皮消毒模拟现场试验细菌减少率相对较低,但与在体试验结果有较好的相关性。结论:离体仿真皮消毒模拟试验与在体皮肤试验结果相近,同时仿真皮之间结果重复性良好,操作简单可控,省时,对防止交叉感染有重要意义,在消毒产品的效果评估中可以替代在体皮肤模拟现场试验。     

一种新的检测鸡胚尿囊膜血管生成的方法

目的：建立一种利用高铁氰化钾法检测鸡胚尿囊膜（CAM）血管生成的方法.方法：分离发育期鸡胚尿囊膜并将其匀浆,加入高铁氰化钾溶液,用紫外分光光度计测量A值,通过标准品计算样品中血红蛋白的含量.结果：采用该方法测定了发育7及9d的鸡胚尿囊膜血红蛋白含量,以及中等强度静磁场对不同发育阶段新生血管的抑制效应,而且与体视显微镜结果一致.结论：高铁氰化钾法是一种实用的可定量检测鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的实验方法.     

显性负性突变型TGF-βⅠ型受体腺病毒的构建和功能验证

目的：构建制备显性负性突变型转化生长因子（TGF-β）Ⅰ型受体腺病毒,并验证其对于相应配体功能的抑制效应．方法：利用分子克隆技术构建和重组腺病毒技术,构建制备显性负性突变型TGF-β Ⅰ型受体腺病毒,并用其感染C3HIO细胞,采用荧光显微镜观察和RT-PCR证明显性负性突变型TGF-β Ⅰ型受体腺病毒在C3H10细胞中的表达．采用碱性磷酸酶（ALP）定量和荧光素酶报告基因实验,分析显性负性突变型TGF-β Ⅰ型受体腺病毒对骨形成蛋白2（BMP2）,TGF-β Ⅰ功能的影响,证明其抑制相应配体功能的有效性．结果：构建和制备了显性负性突变型TGF-β Ⅰ型受体腺病毒,其可以感染C3H10细胞并在C3H10细胞中表达相应的显性负性TGF-β Ⅰ型受体;特定的显性负性突变型TGF-β Ⅰ型受体腺病毒可分别抑制由BMP2诱导的ALP活性及由TGF-β Ⅰ诱导的荧光素酶活性．结论：成功构建制备的7种显性负性突变型TGF-β Ⅰ型受体腺病毒具有抑制相应配体功能的特性,为分析TGF-β Ⅰ型受体功能及靶向TGF-β 信号通路的基因治疗提供了有用的工具．