重组人乳头瘤病毒6型病毒样颗粒的免疫原性分析

目的　研究重组人乳头瘤病毒 6型 (humanpapillomavirustype 6 ,HPV 6 )病毒样颗粒(virus likeparticle ,VLP)的免疫原性。方法　重组杆状病毒在昆虫细胞中表达制备的HPV 6L1VLP(L1 VLP)和HPV 6L1+L2VLP(L1+2 VLP)经鉴定后 ,用于免疫BALB/c小鼠 ,对诱导的体液免疫和细胞免疫反应进行了检测。结果　电镜观察显示L1 VLP和L1+2 VLP二者形态上无明显差异 ,为圆形颗粒 ,直径约 5 0nm ,SDS PAGE和Westernblot分析表明 ,L1+2 VLP中L1和L2蛋白摩尔比例为 4∶1。用ELISA法测定免疫小鼠血清抗体滴度 ,加佐剂L1 VLP免疫组和加佐剂L1+2 VLP免疫组血清针对HPV 6L1VLP的滴度在 1∶10 0 0 0以上 ,高于未加佐剂组免疫血清滴度 (1∶2 0 0 0 ) ,L1+2 VLP免疫诱导出了特异于L2抗原的抗体。血清抗体主要识别HPV 6构象依赖性抗原表位 ,与HPV 11抗原显示出一定的交叉反应 ,而与HPV 16无明显交叉反应。免疫小鼠脾淋巴细胞体外经HPV 6L1VLP再激活后出现了特异性增殖反应 ,3H TdR掺入值与未免疫组之间差异有显著性 (P <0 .0 1) ,L1 VLP和L1+2 VLP两组间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,L1 VLP和L1+2 VLP免疫组刺激指数 (SI)分别为 6 .4和 6 .2 ,阴性对照组SI为 1.1。HPV 6L1VLP再刺激特异地诱导免疫组脾淋巴细胞IL 2和IL 10分     

恶性疟原虫FCC1/HN株环子孢子蛋白的原核表达、纯化及其对肝细胞靶向作用的观察

目的从恶性疟原虫FCC1／HN株基因组中扩增得到环子孢子蛋白(circumsporozoite protein,CSP)的全长编码基因,克隆至原核表达载体pET-32c中进行表达纯化,观察重组环子孢子蛋白对肝细胞的结合能力,探讨其作为原发性肝癌基因治疗的靶向分子的可行性。方法根据恶性疟原虫3D7株环子孢子蛋白的编码序列设计一对引物,利用聚合酶链反应(PCR)技术从恶性疟原虫FCC1／HN株基因组中扩增出CSP的全长编码基因,将其克隆到载体pGEM-T中,通过基因测序加以证实;进一步亚克隆至原核表达载体pET-32c中,在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,采用免疫印迹技术(WB)对纯化的融合蛋白进行免疫反应性检测;采用免疫组化(IHC)技术观察重组环子孢子蛋白对不同组织细胞的结合能力。结果从恶性疟原虫FCC1／HN株基因组中成功扩增到1263 bp的全长CSP基因,该基因在原核系统中经诱导表达出一相对分子质量(Mr)约62×103大小的融合蛋白,表达产物以包涵体的形式存在;通过Ni2+亲和柱纯化获得重组CSP融合蛋白;WB表明,重组CSP融合蛋白能被疟原虫阳性血清特异性识别;免疫组化结果显示重组CSP融合蛋白能够与肝癌和正常肝细胞特异性地结合,与其他组织来源的细胞则未见反应。结论CSP是疟原虫子孢子表面主要的蛋白,重组环子孢子蛋白作为原发性肝癌基因治疗的靶向分子具有一定的潜在应用价值。     

外源性五羟色胺大鼠肺出血模型及其与浓度关系

目的　通过外源性五羟色胺 (5 -HT)气管滴入建立新生大鼠肺出血模型及其与浓度关系 .方法　模型制作 :日龄 4～ 5天Wistar二级大鼠 5 0只 ,随机分为 4组 :生理盐水对照组 (A组 )及 3种不同浓度外源性 5 -HT实验组(B、C、D组 ) :经气管导管分别滴入生理盐水和不同浓度 5 -HT ,4小时后处死 ,观察肺大体及组织病理改变 ,将肺出血程度分为 5级 :Ⅰ正常 ;Ⅱ肺水肿 ;Ⅲ点状肺出血 ;Ⅳ局灶性肺出血 ;Ⅴ弥漫性肺出血 ,选择出制作肺出血模型的最佳的浓度 .结果　不同浓度 5 -HT气管内滴入均能引起不同程度肺出血 ,但随着浓度增加 ,B、C、D三组间的肺出血程度无差异 (p >0 .0 5 ) ,其中D组死亡率 30 % ,对照组及B组和C组均无死亡 ,死亡鼠肺为弥漫性出血 .结论　 5 -HT可致大鼠肺出血 ,以 1× 10 -5mol/ml浓度为宜 ,随着 5 -HT浓度增加 ,大鼠死亡率增加 ,但肺出血发生率无差异     

冠状动脉血管直径测量方法的研究

心脏是人体生命活动的重要器官，能否正常工作主要是由心血管系和心传导系决定。冠状动脉是给心脏供血的唯一途径，心肌能否得到足够的营养、保持连续有节奏地运动，完全取决于冠状动脉是否能不断地供给其营养。冠状动脉直径的测量以及血管直径参数对于反映心脏功能和疾病的诊断具有重要意义。文中提出一种新型的、简便的血管直径测量方法，利用计算得到的血管直径，我们就可以判别心血管狭窄位置。     

困难气管内插管的预测和处理

目的 探讨对困难气管内插管的预测及处理方法。方法 随机选取各类需行气管内插管麻醉下择期手术患者50例,术前测量IG、Slux,TM,HENE,HFNF、气道分类及声门分级等各项指标,并分析它们在气管插管难度之间的关系。结果 50例患者中,气道分类Ⅳ类者7例,声门分级Ⅲ级者17例,Ⅳ级者1例。17例声门Ⅲ级者以EtCO2引导下口腔盲插法插管成功,1例声门Ⅳ级者以气囊充气鼻腔盲控气管内插管法插管成功。结论 术前评价气管插管难易程度应综合考察各项测量指标,这些指标中又以声门分级最为可靠。     

道诺霉素抑制视网膜色素上皮细胞炎前因子的表达

目的　观察道诺霉素对视网膜色素上皮细胞细胞(RPE)炎前因子表达的影响 .方法　培养的人 RPE经 IL- 1β(10μg· L- 1 )刺激以及不同浓度的道诺霉素作用后 ,用EL ISA、免疫组化和原位杂交等方法 ,检测培养的人 RPE炎前因子 m RNA和蛋白质的表达 .结果　 EL ISA显示对照组培养 RPE在 IL- 1β刺激 8h后 ,上清中 IL- 6与 IL- 8分别为2 0 0 0 pg· m L- 1· 10 - 6 cells和 5 0 0 0 pg· m L- 1· 10 - 6 cells.使用 10 0 μg·L- 1 道诺霉素作用于培养的 RPE后 IL- 6与 IL-8分别为 180 pg· m L- 1 · 10 - 6 cells (P <0 .0 1)和 32 0pg· m L- 1· 10 - 6 cells(P<0 .0 1) .免疫组化和原位杂交亦显示不同浓度道诺霉素可以不同程度地抑制 RPE内炎前因子蛋白质与 m RNA的表达 .结论　道诺霉素能有效地抑制 IL -1β诱导的培养的 RPE IL - 6和 IL - 8的表达     

Ets－1在颌骨软骨肉瘤和骨软骨瘤中的表达及意义

目的：分析Ｅｔｓ－１在颌骨软骨肉瘤和骨软骨瘤中的表达及意义。方法：利用免疫组化法检测Ｅｔｓ－１在２０例颌骨软骨肉瘤和８例骨软骨瘤中的表达。结果：６０％（１２／２０）的软骨肉瘤中Ｅｔｓ－１呈阳性表达,Ⅱ、Ⅲ级患者的阳性表达率明显高于Ｉ级（Ｐ＜０．０５）;复发组的阳性表达率明显高于原发组（Ｐ＜０．０５）;Ｅｔｓ－１在骨软骨瘤中的阳性表率为１２．５％（１／８）,与软骨肉瘤有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结     

升麻地上部分化学成分研究升麻地上部分化学成分研究

目的 为开发中药升麻(Cimicifuga foetida L.)的地上部分资源,从中寻找新的天然活性成分。方法 利用多种色谱技术进行分离纯化,根据理化性质和现代波谱技术并辅以化学方法进行结构鉴定。结果 从升麻地上部分80%乙醇提取物的乙酸乙酯部分分得5个9,19-环菠萝蜜烷型三萜皂苷和1个甾醇苷。分别鉴定为:西麻苷I(1),西麻苷II(2),升麻醇半乳糖苷(3),12β-羟基升麻醇木糖苷(4),12β-羟基升麻醇阿拉伯糖苷(5),胡萝卜苷(6)。结论 1和2为新化合物,4及5为首次从该植物中分得。     

端粒酶检测对良恶性腹腔积液鉴别诊断价值的探讨

目的 检测腹腔积液脱落细胞端粒酶活性，探讨端粒酶对良恶性腹腔积液的鉴别诊断价值。方法 运用半定量TRAP-银染法，检测38例恶性腹腔积液和20例良性腹腔积液(对照组)脱落细胞端粒酶活性。结果 肝硬化、结核性腹膜炎腹腔积液脱落细胞检测未发现端粒酶活性，而38例癌性腹腔积液36例(94．7％)端粒酶阳性。所有细胞学检查阳性的恶性腹腔积液端粒酶均为阳性，而3例恶性腹腔积液者，细胞学检查阴性但端粒酶阳性，当复查细胞学检查时，其中1例发现了癌细胞。结论 癌性腹腔积液端粒酶阳性。端粒酶活性的检测对良、恶性腹腔积液有重要鉴别诊断价值，尤其对细胞学检查阴性的病例。     

端粒酶抑制剂对小鼠胃癌放疗的增敏作用研究

目的：探讨端粒酶抑制剂对动物在体肿瘤的治疗作用及对放射治疗的增敏价值。方法：将SGC-7901胃癌细胞接种BALB/c小鼠，采用端粒酶抑制剂AZT联合放疗治疗小鼠胃癌，观察其对肿瘤体积和肿瘤端粒酶活性的影响。结果：未治疗组小鼠肿瘤体积增加了2.5倍，而AZT组、放疗组及AZT联合放疗组肿瘤体积分别缩小了26.3%、36.8%及70.5%。肿瘤端粒酶活性检测，未治疗组、AZT、放疗均能使肿瘤体积缩小并降低前几天粒酶活性分别为100、55.2、24.5及12.1。结论：AZT放疗均能使肿瘤体积缩小并降低端粒酶活性，且AZT能增加肿瘤的放射敏感性。