重组逆转录病毒载体的包装及病毒滴度影响因素

目的:探讨产生重组逆转录病毒包装及其病毒滴度(以cfu表示)的影响因素.方法:用逆转录病毒载体pMNS-TK-M,以脂质体法转染包装细胞PA317细胞,挑选抗性集落(PA317/pMNS-TK-M)扩大培养后,进行PA317/pMNS-TK-M细胞接种密度、培养温度(37℃,32℃)、纯化方法等对其培养上清中重组病毒cfu影响的比较性研究.结果:包装细胞的密度是影响cfu的关键因素;降低培养温度需延长培养时间方可提高cfu滴度.结论:该实验结果为应用逆转录病毒载体进行的基因治疗实验研究提供重要的参考依据.     

电针内关对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞内钙离子浓度的调节

目的:与电针神门和合谷进行比较,以观察缺血再灌注损伤大鼠电针内关后心肌细胞内钙离子浓度的变化。方法:实验于2003-11/2004-02在湖南中医药大学针灸推拿系完成。选用雄性Wistar大鼠50只,体质量200～250g,购自河南医科大学实验动物中心,随机分为假手术组、模型组、内关组、神门组及合谷组,每组10只。采用经典的冠脉结扎法建立大鼠心肌缺血再灌注模型,双波长荧光分光光度计检测心肌细胞内钙离子浓度。结果:大鼠50只全部进入结果分析。大鼠缺血再灌注后心肌细胞内钙离子浓度增加,以模型组最高,明显高于假手术组(P<0.01)。经电针治疗各组细胞内钙离子浓度降低,神门组和内关组均明显低于模型组(P<0.05,0.01);而合谷组与模型组比较,差异不明显(P>0.05)。内关组细胞内钙离子浓度明显低于神门组和合谷组(P<0.01)。结论:①抑制心肌细胞内钙超载可能是电针内关对缺血再灌注损伤心肌保护的作用机制之一。②内关与神门疗效的差异性提示手厥阴心包经和心之间有相对特异性联系。     

聚肌胞对小鼠的急性毒性和蓄积毒性

目的:测定非病毒类干扰素诱导剂聚肌胞对昆明种小鼠的急性毒性和蓄积毒性。方法:实验于2006-04/05在南京农业大学药理与毒理教研室实验室完成。实材料:聚肌胞注射液(南京富纳生物技术有限公司),批号:060509-3,规格为3mg/mL。清洁级昆明种小鼠购自南京中医药大学实验动物中心(动物生产许可证号为SYXK(苏)2005-0009)。实验方法:①急性毒性实验:选取体质量18～22g的50只小鼠,按随机数字表法分为5组,每组10只,雌雄各半,用药前6h禁食不禁水。在预实验基础上确定各组小鼠聚肌胞注射液用药量,相邻的两组间剂量的比值r为1.2。5组小鼠具体用药剂量为36.17,43.40,52.08,62.50,75.00mg/kg。每只小鼠按0.25mL/10g体质量腹腔注射,不同剂量组按同体积不同浓度给药。②蓄积毒性实验:选取体质量15～18g小鼠60只,随机数字表法分为聚肌胞蓄积毒性实验组40只,对照组20只,各组小鼠雌雄均各半。采用剂量递增连续染毒法来评价聚肌胞的蓄积毒性,以LD50为基础选择剂量,起始剂量为0.1LD50,4d为1期,按1.5倍等比级数递增,分5期共20d。将药用生理盐水配成适合的浓度,每天按体质量1次性腹腔注射给药,每只小鼠给药体积均为0.25mL/10g,连续给药20d,对照组小鼠给予相同容积的生理盐水。实验期间观察小鼠一般表现并按时称体质量,记录小鼠死亡的情况并计算蓄积系数,观察各组小鼠对聚肌胞的耐受性。结果:110只小鼠均进入结果分析。①急性毒性实验:各组小鼠注射聚肌胞后均表现行动迟缓,精神沉郁,畏寒扎堆,被毛竖立,用药后3h呈现不同程度的腹泻,4h后相继出现死亡。小鼠的死亡多集中在用药后4～12h,用药后24h未死亡小鼠的精神、食欲都逐渐恢复,继续观察6d未见小鼠再有死亡。小鼠腹腔注射聚肌胞注射液的LD50为59.73mg/kg,LD5095%可信限为:29.49～120.97mg/kg。②蓄积毒性实验:实验组小鼠未发现有明显毒性反应,无小鼠死亡。实验组小鼠体质量与对照组相比差异不显著(P>0.05)。③耐受性实验:实验组小鼠死亡率明显低于对照组(0,20%,P<0.01)。结论:聚肌胞腹腔注射对小鼠毒性较大,但相对于临床应用剂量,聚肌胞注射液的使用仍较为安全;聚肌胞注射液对小鼠没有或仅有轻微的蓄积毒性,小鼠对本品可产生明显的耐受性。     

电针内关穴对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌能量代谢及组织形态学的影响

目的:观察电针内关穴后缺血再灌注损伤大鼠心肌能量代谢及组织形态学变化,探讨针刺对缺血再灌注损伤大鼠的心肌保护作用。方法:实验于2003-10/2004-02在湖南中医药大学、湘雅医学院完成。实验分组:将50只大鼠完全随机分为5组,每组10只。即假手术组、模型组、电针内关组、电针神门组、电针合谷组。实验干预:①假手术组:开胸、穿线、不结扎,观察实验过程120 min。②模型组:开胸、穿线20 min、结扎40 min,松扎再灌注60 min。③电针内关组:开胸、穿线,电针内关20 min后,结扎40 min,再灌注60 min,于再灌注开始时再次电针内关20 min。④电针神门组:处理同电针内关组,电针穴位为神门。⑤电针合谷组:处理同电针内关组,电针穴位为合谷。穴位定位与电针参数:穴位定位:内关穴位于大鼠腕横纹正中上5 mm处,神门穴位于大鼠腕横纹尺侧处,合谷穴位于大鼠第一、二掌骨之间中点处,针刺深度约5 mm,造模成功后分别针刺大鼠双侧上述3穴,直刺穿皮达筋间,捻转1 min后,接电子针疗仪,疏密波刺激(疏波30 Hz,密波100 Hz),以前肢出现轻微颤动为准,持续时间为20 min。实验结束后颈动脉取血5 mL,摘取心脏检测相关指标。实验评估:①应用高效液相色谱法测定三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、一磷酸腺苷和腺苷含量。②光学显微镜观察缺血再灌注损伤心肌病理形态学的变化。结果:50只大鼠均进入结果分析。①血清三磷酸腺苷含量:假手术组最高,模型组最低。电针内关组、电针神门组高于模型组[(0.33±0.14),(0.074±0.021),(0.045±0.015)mg/L,P<0.01,P<0.05],电针合谷组与模型组比较,差异无显著性(P>0.05)。②血清中二磷酸腺苷、一磷酸腺苷、腺苷含量:假手术组最低,模型组最高,电针内关组低于模型组[(0.110±0.065),(0.20±0.10)mg/L;(0.160±0.055),(0.28±0.11)mg/L;(0.045±0.015),(0.11±0.039)mg/L;P<0.05,P<0.01],电针神门组、电针合谷组与电针内关组比较,二磷酸腺苷含量差异不显著(P>0.05),一磷酸腺苷和腺苷差异非常显著(P<0.01)。③假手术组肌纤维整齐,肌丝及肌小节结构清晰可见,线粒体丰富,正常,未见水肿及空泡变;其次为电针内关组,可见肌纤维正常走向,少量线粒体空泡变,肌丝无明显坏死、溶解。模型组的心肌修复情况最差,表现为心肌肌丝溶解、坏死,肌丝走向紊乱,细胞核浓缩,染色质靠边,线粒体水肿,肌浆网扩张。电针神门组,可见部分标本心肌水肿,间质出血,其中1只可见心肌细胞部分坏死,炎性细胞浸润。电针合谷组,部分标本可见心肌水肿,间质出血,其中2只可见心肌坏死,炎性细胞浸润。结论:电针内关穴能明显改善缺血再灌注损伤大鼠心肌的能量代谢,促进心肌组织的修复。     

人参叶中的微量新皂甙

前报,从人参Panax ginseng C.A.Meyer叶中得到十二种人参皂甙,其中两种微量新皂甙分别为20(R)-人参皂甙-Rh_2,人参皂甙-Rh_。本文继续报道两个微量成分的分离和鉴定。20(R)-原人参二醇(Ⅰ),甲醇重结晶得无色针晶,mp243～245℃。Liebermann—     

辽东楤本化学成分的研究

从辽东楤本(Aralia elata)的根皮中分得8个化合物,利用理化和光谱方法鉴定分别为胡萝卜甙-6’-棕榈酸酯(6’-O-palmitoyl-β-sitosterol-3-O-β-D-glucoside,A₅)、罗盘草甙A(silphioside A,A₉)、楤木皂甙A甲酯(araloside A methyl ester,A₁₀)、竹节人参甙I_b(chikusetusaponin I_b,A₁₁)、楤木皂甙A(araloside A,A₁₂)、楤木皂甙C(araloside C,A₁₅、楤木皂甙G(araloside G,A₁₆)、无梗五加甙D(acanthoside D,B₁)。化合物A₅,A₉,A₁₁和B₁为首次从该植物中分得,A₁₀为新天然产物,A₁₆为新化合物命名为楤木皂甙G,归属了化合物A₉,A₁₅的¹³C-NMR化学位移。     

脉络宁对重型肝炎患者血小板活性的影响

目的：探讨脉络宁对重型肝炎患者血小板活性的影响。方法：采用ＥＬＩＳＡ法和单克隆酶联免疫吸附法。检测了５１例慢性重型肝炎患者和４４例健康体检者的血浆内血小板α颗粒膜蛋白（ＧＭＰ－１４０）和血管性假血友病因子相关抗原（ｖＷＦ：Ａｇ）含量。５１例慢性重型肝炎患者血浆ＧＭＰ－１４０、ｖＷＦ：Ａｇ含量均明显高于正常对照组（Ｐ〈０．０１）。脉络宁治疗组用药两周后,脉络宁对该病患者的血小板活性具有明显抑制作用。     

BIOTRANSFORMATIONANDELIMINATIONOF1－NITROPYRENEINTHEISOLATEDPERFUSEDLUNG∶EFFECTSOFPRETREATINGRATSWITH

将１５０μｇ１硝基芘（１ＮＰ）气管内或血管内给药后，对大鼠离体肺进行灌流，定时自灌流液中取样，以ＨＰＬＣ和ＧＣＭＳ测定并鉴定灌流液中未变的１ＮＰ及代谢物。经鉴定代谢物为单羟基硝基芘和二羟基硝基芘。两种途径给药后，１ＮＰ在灌流液中的浓度—时间数据符合一室药代动力学模型。预先以β萘黄酮，苯并蒽或苯巴比妥和β萘黄酮的混合物处理后的大鼠，肺灌流结果表明，显著降低１ＮＰ的平均保留时间（ＭＲＴ），促进１ＮＰ的生物转化和气管给药后的吸收。以苯巴比妥预处理后的大鼠肺则对１ＮＰ的药代动力学参数无显著影响。     

假鹰爪根化学成分的研究

假鹰爪(Desmos cochinensis Lour.)根的石油醚提取物中分得三个黄酮类化合物。其中化合物Ⅰ和Ⅱ分别鉴定为5,7-二羟基-6-甲酰基-8-甲基双氢黄酮(lawinal)和5,7-二羟基-6-甲酰基-8-甲基黄酮(isounonal)。Ⅲ为一含醛基的新化合物。根据光谱分析(紫外、红外、质谱、氢谱、碳谱、二维核磁共振异核位移相关谱及X-单晶衍射)证明其结构为4,7-二羟基-5-甲氧基-6-甲基-8-甲酰基黄烷。化合物Ⅰ和Ⅱ均属首次从该植物中分得。     

Effects of hyperglycemia on quantitative liver functions by the galactose load test in diabetic rats

Blood galactose clearance after an intravenous galactose load has been widely used as a quantitative liver function test. We have developed a novel quantitative rat liver function test, the galactose single point (GSP) method, to assess residual liver function with various injuries by measuring single time point galactose concentration in blood after an intravenous bolus injection of galactose. The goal of this study was to evaluate the influence of nonhepatic factors such as hyperglycemia on GSP and galactose elimination capacity (GEC) in rats. Four groups of animal studies were carried out, as follows: (1) normal control (NC), (2) streptozotocin-induced diabetes (DM), (3) carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity (CCl(4)), and (4) streptozotocin-induced diabetes with CCl(4)-induced hepatotoxicity (DM + CCl(4)). The serum glucose levels in the diabetic groups (DM and DM + CCl(4)) were significantly increased compared with the NC and CCl(4) groups (P < .001). A significant increase in hepatic activities of aspartate aminotransferase and alanine aminotransferase was observed in the CCl(4)-treated groups (CCl(4) and DM + CCl(4)) compared with the NC and DM groups (P < .001). In comparison with the NC group, the values of GSP and GEC in the diabetic groups (DM and DM + CCl(4)) were significantly reduced (P < .001) and increased (P < .01), respectively. Galactose single point had highly significant correlations with GEC (P < .001). These results suggest that galactose metabolism tests-as quantitative parameters of liver function-should be interpreted with caution in the condition of a significant hyperglycemia.