HBV 基因T1862突变真核表达载体的构建及在Cos7细胞中的表达

目的研究HBV T1862变异的生物学意义。方法采用分子生物学方法,构建HBV前C/C基因EB病毒真核表达载体,利用体外定点突变技术诱导前C/C基因T1862变异,经PCR-RFLP初筛并经测序终鉴定出阳性克隆后,以脂质体介导方法将突变前后的重组质粒转染Cos7细胞, 以ELISA 检测HBeAg的表达量。结果未突变的重组质粒可稳定表达HBeAg,突变后的重组质粒未能检测到HBeAg表达。结论 HBV前C/C基因1862点突变的真核表达载体的构建,为体外研究该点突变引起HBV的一系列生物学改变奠定基础。     

立体定向适形放疗对中晚期肝癌的疗效观察

目的评价立体定向适形放疗对中晚期肝癌的治疗效果。方法对中晚期肝癌患者经立体定向适形放疗及肝动脉 栓塞化疗（ＴＡＥ）后癌块最大直径、血清甲胎蛋白（ＡＦＰ）及血白细胞、肝功能的变化情况进行对比分析。立体定向适形放 疗组（Ａ组）２１例,其中肝功能Ｃｈｉｌｄ Ａ级１３例、Ｂ级８例,癌块直径小于５ ｃｍ ２例、大于１０ ｃｍ ６例、５～１０ ｃｍ １３例。 ＴＡＥ组（Ｂ　组）２０例,Ｃｈｉｌｄ Ａ级 １２例、Ｂ级 ８例,癌块直径小于 ５ ｃｍ ５例、大于 １０ ｃｍ ３例、５～１０ ｃｍ １２例。结果两组 瘤体平均直径缩小值、瘤体直径缩小率、血ＡＦＰ降低率、白细胞减少发生率及肝功能改变发生率分别为,Ａ组：（２．５８±１．８０）ｃｍ、 ６６．６７％、８６．６％、１９．０５％和９．５２％;Ｂ组：（１．２０±０．６８）ｃｍ、３０％、４３．７５％、５０％和６０％。两组差异有显著性意义。结论立体定 向适形放疗是治疗不能手术的中晚期肝癌较好的方法之一,且副反应发生率低。     

中药复方发明专利创造性审查的影响因素分析

目的 寻找中药复方发明专利创造性审查的关键影响因素并分析原因,为完善相关审查标准提供参考。方法 筛选驳回依据为创造性的中药复方发明专利复审决定,建立数据库,通过分类和单因素逻辑（Logistic）回归等方法分析影响因素。结果 中药复方专利创造性的审查标准受年度变化的影响明显。按要求补充实验数据、区别技术特征数量、复方的发明类型、审查员所引用的对比文件及公知常识情况均能提高专利复审的撤驳率。结论 我国尚未建立合理、统一、清晰的中药复方发明专利创造性审查标准,仍有待从多个方面进一步完善。     

从发病机制概述针刺治疗血管性痴呆的研究进展

血管性痴呆是脑血管病变后所引起的认知功能障碍,是临床中较为常见的痴呆类型。其发病机制源于血管系统损害引起低脑血流灌注、氧化应激等一系列病理过程。针灸作为一种非药物疗法,在脑血管病及相关疾病中有较为广泛的临床应用,许多研究都显示了针灸对认知功能的改善作用,并涉及细胞凋亡、氧化应激、神经炎症、神经递质通路等方面的调节作用。因此,现从血管性痴呆的发病机制角度探讨针刺的治疗作用,以期为进一步揭示针灸在血管性痴呆治疗中的潜在机制提供参考。     

广山楂HPLC指纹图谱建立及其活血化瘀作用谱效关系研究

目的 建立广山楂Malus doumeri指纹图谱,测定各批次广山楂的“活血化瘀”药效学指标,探讨广山楂化学成分与活血化瘀功效的谱效关系。方法 采用HPLC法建立18批广山楂的指纹图谱。利用大鼠高脂模型,测定不同批次广山楂的“活血化瘀”药效学指标,包括高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterin,LDL-C）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、三酰甘油（triglyceride,TG）含量及血液流变学指标等。运用偏最小二乘回归法（partial least-square method regression,PLSR）、灰色关联度分析法,分析广山楂化学成分与活血化瘀药效指标间的谱效关系。结果 构建了广山楂的HPLC图谱,确定了6个共有峰,并指认了其中的2个共有峰（绿原酸、根皮苷）。活血化瘀实验表明,不同批次广山楂活血药效指标间具有明显差异,在标定的广山楂6个特征峰中,峰2～6与HDL-C呈正相关,峰1、5、6与LDL...     

参与连翘苯丙烷合成途径的WRKY转录因子的筛选与鉴定

目的 筛选出参与连翘Forsythia suspensa苯丙烷合成途径的WRKY转录因子并进行生物信息学分析。方法 通过对从连翘转录组数据中筛选出的62条连翘WRKY基因序列进行鉴定;通过采用蛋白理化性质和基序分析、蛋白结构分析、系统进化分析、功能注释、蛋白互作分析、外源激素处理后实时荧光定量分析等方式进行相关分析。结果 最终筛选出52条具有WRKY结构域的连翘WRKY转录因子。WRKY转录因子编码蛋白的氨基酸数目在105～728,相对分子质量在12277.95～80 321.99。蛋白基序分析显示其均有WRKY结构域,与拟南芥WRKY转录因子构建系统进化树将连翘52个WRKY转录因子进一步分为3大类;筛选出5个可能参与连翘苯丙烷合成途径的连翘WRKY转录因子,并推测其可能以被MAPK级联反应所调控的方式介导连翘中苯丙烷合成途径。结论 通过分析转录组测序结果,从52个连翘WRKY转录因子中筛选出5个可能参与连翘苯丙烷合成途径的转录因子,其表现出组织特异性表达,且对不同浓度茉莉酸甲脂表现出不同的响应,为进一步研究其作用机制提供研究方向。     

IL-6、IL-1及TNF对人类骨髓瘤细胞系KM_2、KM_3增殖的影响

细胞因子的异常表达对骨髓瘤细胞的恶性增殖起重要作用。本文研究了IL-6、IL-1及TNF 对人骨髓瘤细胞系增殖的影响。KM_2、KM,均能分泌IL-6,以维持自身的增殖。培养体系中加入抗IL-6抗体可抑制瘤细胞的增殖,这种抑制作用可通过加入重组IL-6而逆转.在培养体系中加入重组IL-6和TNF 均可促进KM_2、KM_3的增殖,而IL-1无此作用。培养体系中加入TNF 培养后,上清中IL-6活性增高。我们的结果提示,人骨髓瘤细胞系KM_2、KM_3存在IL-6自分泌增殖机制,而TNF 可加强这种自分泌作用。     

肠道菌群介导生脉方对脓毒症小鼠的治疗作用

探究生脉方（Shengmai formula,SMF）对脓毒症小鼠组织损伤、血清炎症因子和外周血固有免疫细胞比例的作用;考察肠道菌群在SMF治疗脓毒症中的作用。灌胃0.3,0.6,1.2 g/kg或腹腔注射0.6 g/kg SMF 4 d后腹腔注射20 mg/kg脂多糖（LPS）建立脓毒症模型,考察小鼠生存率,通过H&E染色观察小鼠肝、肺、肾组织病理改变,检测血清IL-6、TNF-α、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）水平;建立LPS和盲肠结扎穿刺（CLP）脓毒症模型,通过流式细胞术检测SMF灌胃或腹腔注射对外周血单核细胞、巨噬细胞和中性粒细胞比例的影响;考察抗生素（ABX）处理对SMF灌胃治疗脓毒症的影响;考察SMF灌胃小鼠的粪菌对脓毒症的治疗作用。结果表明,SMF灌胃显著提高LPS模型小鼠生存率,减轻肝、肺、肾损伤和炎性浸润,降低血清IL-6、ALT、AST、BUN、Cr水平;显著降低LPS模型24 h外周血巨噬细胞比例,下调CLP模型24 h外周血单核、巨噬细胞和中性粒细胞比例。SMF腹腔注射对脓毒症模型上述指标均无显著作用。ABX...     

神经移植端侧缝合颈5/7神经根与上干桥接治疗产瘫

目的：探讨一种不影响残存神经自行恢复的产瘫臂丛神经修复新方法。方法：将上干损伤部位行松解,不切除神经瘤,将其近端的颈5或颈7神经根和神经瘤远端的臂丛上干的神经束膜切开窗口,取颈丛皮支或前臂外侧皮神经前成多段（一般每段长约2．0－2．5cm）,两端分别与颈5神经根和上干的神经束膜行端侧缝合,结果：8例患儿经术后1－11年（平均3年）的随访,4例的三角肌和肱二头肌骨力达4级和4^-级,4例达3例。3例后期进行了肩关节松解和旋前圆肌肌腱切断,结论：该方法既提供了可使损伤近端颈5神经根的新生纤维生长至上干的神经通道,又未阻断神经瘤内残存神经纤维的自行恢复,是治疗产瘫特别是Tassin2型的新术式。     

热化疗对人体结肠癌LoVo细胞中一氧化氮含量的影响

Aim To study the effect of nitric oxide (NO) on LoVo cells after hyperthermia combined with MMC and their mechanisms. Methods The levels of NO were determined in cell culture medium of LoVo cells by Cu-Cd reduction method.Results The levels of NO in control (45.9±16.12) μmol/L group were lower than those in chemohyperthermy(92.3±24.30) μmol/L and hyperthermia (67.67±15.48)μmol/L group (P＜0.01,P＜0.05 respectively). Levels of NO in chemohyperthermy and hyperthermia groups were higher than those in chemotherapy(47.03±16.32)μmol/L(P＜0.01,P＜0.05 respcevtively). The levels of NO in chemo-hyperthermy group were higher than those in hyperthermia group(P＜0.05), and those in chemotherapy group higher than in control group but without statistical significance.Conclusion Chemohyperthermy and hyperthermia could remarkably enhance the levels of NO produced by LoVo cells. NO levels could also be enhanced by chemotherapy. It could be concluded that Nitric Oxide Synthase (NOS) in tumor cells might be activated by hyperthermia, chemohyperthermy and chemotherapy, and increased NO level which induced cytotoxic reaction. This may be one of the mechanisms of treatment with chemohyperthermy.