siRNAi沉默DNMT1基因对肺癌细胞WIF-1启动子甲基化的影响

目的 探讨DNA甲基转移酶(DNMT1)siRNAi对人肺癌A549细胞内抑癌基因wnt抑制因子-1(WIF-1)基因启动子高甲基化的影响.方法 利用pSilencer 4.1-CMV neo载体,通过siRNAi表达载体法制备DNMT1 siRNAi.将DNMT1 siRNAi转染肺癌A549细胞,采用RT-PCR和Western blot检测观察转染前后肺癌A549细胞DNMT1内DNMT1基因的表达改变,并利用甲基化PCR,直接测序法检测WIF-1基因启动子甲基化水平.结果 构建的DNMT1 siRNAi转染肺癌A549细胞后,明显抑制DNMT1基因的表达,mRNA表达下降75%,蛋白表达下调82%;同时,WIF-1基因启动子序列较转染前甲基化水平明显降低.结论 靶向DNMT1的siRNAi可明显下调靶基因DNMT1的表达,并逆转WIF-1基因启动子高甲基化水平.     

运用甘油磷酸氧化酶法测定冰冻红细胞解冻后残留甘油的含量

目的 建立测定冰冻红细胞解冻洗涤后残留甘油含量的酶学方法测定工艺.方法 进行甘油磷酸氧化酶法的线性范围测定、重复性、准确性(回收试验)、游离血红蛋白干扰试验,并比较不同样本处理方法(钨酸钠裂解法、三氯醋酸裂解法及制备后2h直接取上清液法)对酶法检测甘油的影响;进行系列浓度甘油红细胞酶法测定结果与传统过碘酸钠滴定法测定结果比对.结果 用GPO-PAP法检测甘油浓度在0.05～2.0 g/L时有较好的线性关系,,=0.9994,Y=0.942 X+0.0239;甘油含量为0.2 g/L、1.0 g/L的样本,批内CV值分别为2.68％、0.81％(n=20),日间CV值分别为4.59％、4.37％(n=20);甘油浓度从0.29～2.09 g/L间其回收率97.1％～100.8％,样本的平均回收率为99.0％;10g/L游离血红蛋白对GPO-PAP法检测结果无干扰;3种样本处理方法所测得的系列浓度甘油红细胞样品及解冻去甘油红细胞制品(n=18)酶法测定结果一致(P＞0.05);系列浓度甘油红细胞测定结果显示酶法测定比滴定法更准确,滴定法测定值偏高.结论 甘油磷酸氧化酶法可用于冰冻解冻去甘油红细胞制品中残留甘油含量的测定,方法简便、快速、准确、重复性好.3种样本处理方法对GPO-PAP法检测甘油含量无影响.     

儿童甲状腺激素抵抗综合征临床和遗传特点分析及文献复习

目的 分析儿童甲状腺激素抵抗综合征的临床特点及随访资料,并检测患儿及其父母甲状腺激素受体β(TRβ)基因突变情况,对其遗传特点进行分析.方法 回顾性分析我院2000-2014年确诊为甲状腺激素抵抗综合征患儿的临床资料,并在获得知情同意书的前提下对部分患儿、父母及其部分家系进行外周血DNA的TRβ基因突变位点检测.结果 患儿均于院外诊断为Grave's病或先天性甲状腺功能减退症,存在误诊误治.该病临床症状主要集中在神经系统、心脏症状和听力功能受损.4例患儿学习成绩不良,处于中等以下水平,其中1例患儿智力筛查为中度发育迟滞落后,1例智力发育临界.8例患儿均有心动过速.听力检测提示1例存在听力障碍.6例患儿以发现甲状腺肿大、心率增快就诊.实验室检查以异常的血清游离甲状腺激素升高和不受抑制的促甲状腺激素水平正常或升高为特点.心电图检查3例患儿发现异常,1例表现为加速性房性逸搏心律,2例表现为显著窦性心律不齐,其中1例伴预激综合征.共获得4例患儿及父母TRβ基因检测结果.1例患儿及其母亲TRβ基因第9外显子突变,第1235位碱基由胞嘧啶变为腺嘌呤,导致该位点编码的氨基酸由丙氨酸变为天冬氨酸,但患儿母亲没有相应的临床表现.1例患儿TRβ基因编码区出现第949位点突变,导致第3171位碱基由丙氨酸变为苏氨酸,余2例患儿及父母未发现TRβ基因突变.5例患儿应用溴隐亭治疗,随诊1-5年,5例患儿均心率下降明显,至90-92次/min,甲肿及突眼情况较前好转.结论 甲状腺激素抵抗综合征临床变异较多,临床表现主要为心律失常和智能发育问题,误诊率高.该综合征TRβ基因突变检出率不高,即使基因突变位点相同,表型也不尽相同,是否存在其他基因位点突变尚有待进一步证实.经长期随访观察溴隐亭治疗效果满意,为临床治疗提供可能.     

喉癌p53基因突变与人乳头状瘤病毒感染的关系

目的探讨喉癌细胞ｐ５３基因突变与人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）感染的关系及其临床意义。方法应用星普旋转离心柱Ｂ溶液系统,结合聚合酶反应链多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）及ＤＮＡ序列分析（ＰＣＲ－ＤＮＡＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）,对３６例喉癌组织新鲜标本进行ＨＰＶ定型、相对定量及ｐ５３基因第４至第８外显子突变检测。结果３６例喉癌标本中有１３例发生基因点突变或转码突变,其中１０例为ＨＰＶ１６／１８感染者,且与细胞内病毒含量呈正相关。２４例晚期喉癌（临床Ⅲ－Ⅳ期）有颈淋巴结转移者突变检出率明显高于无转移者（Ｐ＜０．０５）。结论喉癌ｐ５３基因突变与ＨＰＶ１６／１８感染有关,晚期喉癌颈淋巴结转移与ｐ５３基因突变有关。     

椎管内肿瘤26例围手术期的护理

0　引言　手术切除椎管内肿瘤是唯一有效的治疗方法 .由于病变部位的特殊性 ,手术难度大、危险性大 ,术后易出现神经损伤、脊髓缺血、水肿 ,发生呼吸障碍、高热、消化道出血、四肢瘫痪或截瘫等严重并发症 .其护理工作也具有一定的复杂性和特殊性 .1　临床资料　我院 2 0 0 0 - 0 5 / 11收治椎管内肿瘤患者 2 6 (男19,女 7)例 ,年龄 9～ 6 1岁 .颈椎段 14例 ,胸椎段 6例 ,腰椎段 5例 ,骶管内 1例 . 7例为转移瘤 ,2例为原发性胶质瘤 ,其余均为良性肿瘤 .本组患者以颈段椎管内肿瘤居多 (5 4% ) .2　讨论　为使患者安全渡过围手术期 ,术前健康教…     

左旋精氨酸甲酯对大鼠膈疝模型肺血管发育的影响

目的 通过对大鼠孕期一氧化氮(NO)合成的抑制,探讨一氧化氮/环磷酸鸟苷(NO/cGMP)通路在大鼠膈疝肺动脉高压发病中的意义及部分膈疝患者NO吸入效果不佳的原因.方法 随机取孕9.5 d SD大鼠13只,3只作为正常对照组(C组),给予橄榄油2 ml灌入胃内,10只予异草醚(nitrofen)橄榄油溶液(200 mg/只)灌入胃内.左旋精氨酸甲酯干预分小剂量组、大剂量组(分别为L-NAME 1组、L-NAME 2组)进行,每组各4只,自孕14 d开始分别皮下注射左旋精氨酸甲酯(L-NAME)溶液250 mg/kg/d、500 mg/kg/d至孕20 d,对照组(CL组)3只于同样时间段给予生理盐水注射.分析各组血管计数、中膜厚度百分比(MT%),同时对内皮细胞源性一氧化氮合成酶(eNOS)表达进行免疫组化检测.结果 L-NAME 1组、L-NAME 2组与CL组胎鼠成模率、生存率比较,差异无统计学意义;L-NAME 1组、L-NAME2组与CL组血管计数、MT%均较C组明显增高,但L-NAME 1组、L-NAME 2组与CL组之间相比,无显著差异;膈疝发生后,eNOS阳性表达率降低;使用L-NAME后eNOS阳性表达率进一步减低.结论 阻断NO/cGMP通路,膈疝胎鼠肺小动脉的结构未出现相应变化.NO/cGMP通路的变化仅为肺动脉压力改变的功能性因素之一,调节NO/cGMP通路无法独立影响肺动脉的压力.     

慢病毒载体介导的RNAi技术构建稳定抑制β-catenin的人鼻咽癌细胞株

目的建立稳定抑制β-catenin基因表达的人鼻咽癌6-10B细胞株,为探讨Wnt/β-catenin信号在鼻咽癌发生中的作用提供细胞模型。方法于β-catenin CTNNB1基因编码区选择3个siRNA靶点合成3对shRNA干扰序列,分别与pLKO.1载体连接,构建pLKO.1-sh-β-catenin质粒(干扰组1)、pLVTHM-sh-β-catenin(干扰组2)和pLKO.1-sh-β-catenin-Neg质粒(阴性对照组);将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,收集含慢病毒颗粒的上清液感染人鼻咽癌6-10B细胞,感染pLKO.1-sh-β-catenin和pLKO.1-sh-β-catenin-Neg质粒的细胞经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到稳定克隆株。Western blot检测干扰组β-catenin抑制效率及下游基因c-myc蛋白的表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测比较细胞增殖状况,Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移率。结果 Western blot检测结果显示pLKO.1-sh-β-catenin(干扰组1)干扰效率最佳,β-catenin及c-myc蛋白表达减少;MTT检测显示干扰β-catenin后细胞吸光度下降,细胞增殖受到抑制;穿过Transwell小室底膜的细胞数:干扰组1为(23.5±4.6)个,明显低于阴性对照组(50.3±5.3,P<0.01)及空白对照组(54.3±5.6,P<0.01)。结论成功构建了β-catenin shRNA慢病毒表达载体,建立了稳定抑制β-catenin基因表达的人鼻咽癌6-10B细胞株,为进一步研究以β-catenin为靶点的鼻咽癌基因治疗奠定基础。     

微小RNA-143-3p靶向调控Kirsten鼠肉瘤病毒癌基因介导丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶信号通路对胃癌细胞增殖侵袭及上皮间质转化的作用机制

目的:探讨miR-143-3p靶向调控Kirsten鼠肉瘤病毒癌基因(KRAS)介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路对胃癌细胞增殖和侵袭的作用机制。方法:双荧光素酶报告基因实验验证miR-143-3p与KRAS基因的靶向关系。将购自上海中国科学院的胃癌细胞株转染分组,将筛选人胃癌细胞...     

癫痫病不同中医证型脉图分析

１９４例癫痫病人中风痰闭阻型９７例，痰火内盛型１６例，心肾亏虚型８１例。左桡动脉“关部”脉图中脉象出现率依次为紧脉、弦脉、动脉、滑脉、弦滑脉、弦细脉，但在中医各证型间的分布极不均匀。脉图各测值中风痰闭阻型与痰火内盛型之间差异无显著性，虚证组与实证组相比，ＰＰＭＡ降低，α１变小，α２变大，Ｗ１和Ｗ２增宽，ｈ值降低，ｈ２／ｈ１增高，ｈ３／ｈ１和ｈ４／ｈ１降低，ｔ１和ｔ２延长，ｔ缩短，Ｗ２／ｔ增大。