小檗碱通过抑制凋亡和炎症减轻大鼠慢性萎缩性胃炎病变的效果

目的：探究小檗碱对慢性萎缩性胃炎(CAG)的改善作用及其作用机制。方法：将SD大鼠随机分为对照组、模型组、小檗碱低剂量组、小檗碱中剂量组、小檗碱高剂量组和DUSP19组,每组9只。除对照组外均构建CAG模型,小檗碱低、中、高剂量分别灌胃给与25、50、100 mg/kg的小檗碱,DUSP19组灌胃给与100 mg/kg的小檗碱和尾静脉注射JAK激酶2/信号转导及转录激活因子3（JAK2/STAT3）通路激活剂DUSP19 100 μmol/L。苏木精-伊红（HE）染色法检测病理学变化;蛋白质印迹法检测JAK2/STAT3信号通路及凋亡相关蛋白表达;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清相关因子表达水平;原位末端转移酶标记技术（TUNEL）检测胃黏膜细胞凋亡。结果：与模型组比较,小檗碱观察组磷酸化JAK2（p-JAK2）、磷酸化JAK3（p-JAK3）、胃动素（MTL）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）、前列腺素E2（PGE2）、内皮素（ET）、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（Bax）、裂解胱天蛋白酶3（Cl-caspase-3）、裂解胱天蛋白酶9（Cl-caspase-9）水平及细胞凋亡率显著降低(P<0.05),胃泌素（GAS）、分泌型免疫球蛋白A（sIgA）、谷胱甘肽（GSH）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）水平显著升高(P<0.05);JAK2/STAT3通路激活剂DUSP19可显著扭转小檗碱对上述指标的影响(P<0.05),且HE结果显示小檗碱可显著改善CAG大鼠胃组织病理病变。结论：小檗碱可通过JAK2/STAT3信号通路抑制细胞凋亡和炎症反应减轻大鼠慢性萎缩性胃炎。     

An experimental study on nerve regeneration and spinal neurons after CO2 laser anastomosis of rat sciatic nerve

Objective: Many methods have been used in an attempt to seal the epineurium and to prevent axonal outgrowth.In this study, the rat sciatic nerves were repaired with CO2 laser, the nerve regeneration and the morphology of spinal anterior horn neurons were investigated. Methods: Seventy-two male Sprague-Dawley rats were randomly divided into 6 groups of 12 rats. The animals were designed to observe the electrophysiology, the histopathology and the morphology of spinal anterior horn neurons. One of the rat sciatic nerve anastomosed with CO2 laser, the contralateral nerve was reconstructed by microsuture technique. At 2, 4, 6, 8 weeks postoperatively, neuromuscular functions, the regeneration of axons and neurons were evaluated by the electro-physiological and histopathological studies. The rats were killed at 4, 6 weeks postoperatively. Results: The recovery of toe spread and myodynamia in laser groups was better than that in suture groups (P＜0.05). The latency of foot withdraw caused by radiate heat and neuromuscular conduction velocity in laser groups were faster than that in suture groups (P＜0.05). The density of nerve fibers, percentage of axons passing through anastomotic area and numbers of neurons were better in laser groups than in suture groups. At 8 weeks postoperatively, the first grade dendrites of anterior horn neurons grew well. Their diameter, length, volume and total volume were much higher than that in control group. (P＜0.05, P＜0.01). Conclusion: CO2 laser repairing was effective in promoting the regeneration and the recovery of sciatic nerves in its earlypost-trauma stage. In addition, laser repairing was found to reduce regenerating axons misdirection and forming neuroma.     

大库容量人源性天然单链抗体库的构建

目的：构建一个大库容量（＞10^8）的人类天然单链抗体库。方法：从正常人400mL外周血分离林巴细胞,提取mRNA后反转录出cDNA第一链, 行半套式PCR扩增VH和VL基因片段,依次插入含Loxp和Loxp511序列的pDNA5,电转化TG1大肠杆菌,构建初级库进一步用初级库感染BS1365使其VH,VL发生重组从而获得次级库。结果：所有VH,VL亚类基因都得到了扩增,scFv克隆效率为99．9％,重组效率为每个单克隆BS1365中含至少8种不同的scFv基因。初级库容量为10^7,次级库容量至少为10^11。结论：我们采用细胞内重组的方法构建了10^11的人类天然抗体库。     

Endostatin裸DNA对人脑胶质瘤的抑瘤效应

目的：探讨endostatin裸DNA对裸鼠皮下脑胶质瘤生长的影响特点。方法：用脂质体包埋法将endostatin基因的真核表达载体pcDNA-S-Endo注入裸鼠皮下SHG44人脑胶质瘤内,观察肿瘤生长情况并计算抑瘤率,结合免疫组化、电镜、微血管和瘤体坏死区计数,确定endostatin裸DNA治疗人脑胶质瘤的特点。结果：Endostatin裸DNA在荷瘤裸鼠体内获得表达,裸鼠皮下胶质瘤血管生成能力显下降,肿瘤生长受到抑制,抑瘤率达到41．6％。结论：Endostatin裸DNA能够抑制人脑胶质瘤生长41．6％。结论：Endostatin裸DNA能够抑制人脑胶质瘤生长,它是通过抑制肿瘤血管生成,导致肿瘤坏死实现的。本研究为应用裸DNA药物治疗人脑质瘤奠定了初步基础。     

从人软骨提取总RNA和CDMP－1成熟肽片段的克隆

目的 克隆人软骨来源形态发生蛋白－１（ＣＤＭＰ－１）成熟肽编码区的基因片段。方法 用异流氰酸胍一步法从人软骨组织和酶消化法原代培养的软骨细胞中分别抽提总ＲＮＡ,利用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出人ＣＤＭＰ－１成熟区的基因片段（约１．０ｋｂｐ）,将所得基因片段插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ）质粒载体,重组质粒ＤＮＡ,通过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果 从罗骨组织直接取到总ＲＮＡ,其质量与从等重量软骨     

羊水表皮生长因子与胎肺成熟度的关系

目的 探讨羊水表皮生长因子浓度与胎儿肺成熟度的关系。方法 对１６８例胎龄在２１￣４２周的孕妇,采用羊膜腔穿刺术采集羊水。分别以薄层层析法和放射免疫法测定卵磷脂／鞘磷脂比值（Ｌ／Ｓ）和表皮生长因子（ＥＧＦ）。结果 羊水Ｌ／Ｓ比值及ＥＧＦ浓度均与胎龄呈正相关（ｒ值分别为０．８６和０．８７,Ｐ值均〈０．０１）。羊水ＥＧＦ浓度与Ｌ／Ｓ比值及显著相关性（ｒ＝０．７６,Ｐ〈０．００１）,结论 羊水表皮生长因子     

大鼠急性颅脑损伤后脑微循环的变化

目的 研究鼠急性颅脑损伤后脑微循环的改变,以找出影响颅脑损伤与恢复变化的规律。方法 大鼠１００只随机分为５组,采用自由落体致大鼠脑损伤,伤后０．５,３．２４和１６８ｈ取材,研究脑微血管形态学变化,并用核磁共振波谱法分析颅脑损伤局部脑组织代谢的变化。结果 大鼠实验性脑损伤后０．５～２４ｈ大脑皮层微血管减少,并有“微无血管区”,微血管内可见微血栓形成;血脑屏障（ＢＢＢ）通透性增加,出现脑水肿,颅脑损伤     

人脑胶质瘤Tenascin基因表达与侵袭相关性

目的 探讨Ｔｅｎａｓｃｉｎ和Ｋｉ－６７在不同级别人脑胶质瘤细胞表达情况,分析它与胶质瘤细胞的侵袭相关性。方法 采用原位杂交和化学方法,检测不同级别人脑胶质瘤组织５０例中,Ｔｅｎａｓｃｉｎ和Ｋｉ－６７表达,以细胞核增殖抗原Ｋｉ－６７表达,经细胞核增殖抗原Ｋｉ－６７阳性细胞数分析胶质瘤细胞的增殖情况,结果 胶质瘤与其增生血管内皮细胞均表达Ｔｅｎａｓｃｉｎ,Ｔｅｎａｓｃｉｎ基因表达与肿瘤细胞增殖指数呈显     

Cyclin A表达与人脑胶质瘤细胞增殖活性及其病理分级的关系

目的研究人脑胶质瘤中cyclin A表达与肿瘤细胞增殖活性及其病理分级的关系.方法采用免疫组化方法检测42例人脑胶质瘤标本中cyclin A和PCNA的表达水平,计算cyclin A阳性率和标记指数,以及PCNA阳性率和标记指数,分析它们与胶质瘤病理分级的关系.结果随着人脑胶质瘤病理分级的增高,cyclin A的阳性率和平均标记指数明显升高.在Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤中其标记指数分别是(0.15±0.42),(1.59±1.95),(5.76±5.85)和(6.74±6.33);Ⅰ,Ⅱ级和Ⅲ,Ⅳ级间有显著性差异(P<0.01);其阳性率分别是11%,75%,71%和82%,在Ⅰ级与Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ级间有显著性差异(P<0.05).PCNA标记指数随脑胶质瘤恶性程度提高而升高.Cyclin A与PCNA的表达呈正相关(r=0.858,P<0.01).结论人脑胶质瘤中cyclin A蛋白的阳性表达与细胞增殖活性和组织学分级密切相关,它可能参与了人脑胶质瘤细胞的恶性转化.     

人脑胶质瘤金属硫蛋白表达的生物学意义

目的 研究金属硫蛋白（ＭＴ）在人脑各级胶质瘤中表达的生物学意义,方法 利用免疫组织化学方法检测４８例胶质瘤手术标本中金属硫蛋白及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达水平,比较不同级别胶质瘤中ＭＴ的表达与胶质瘤级别的关系及其与ＰＣＮＡ相关性,结果 随着胶质瘤级别的增高,ＭＴ和ＰＣＮＡ的表达率逐渐升高,ＭＴ在脑胶质瘤中的表达率分别为Ⅰ级３８．０％,Ⅱ级４６．７％,Ⅲ级６６．７％,Ⅳ级７５．０％,低恶性度组