实验性大鼠脑血管痉挛动物模型制备

目的探索实验性SD大鼠蛛网膜下隙出血（SAH）脑血管痉挛模型制备方法。方法尾动脉取血,立体定位仪下枕大池二次注血,印度墨水灌注测量大脑中动脉、颈内动脉和基底动脉直径,Morris水迷宫行为学测试,测定血中内皮素-1、一氧化氮合酶含量。结果 SAH组脑血管明显变细,Morris水迷宫显示有学习记忆能力减退,大脑中动脉、颈内动脉和基底动脉直径分别为（169.33±8.67）mm、（227.33±14.25）mm、（226.33±5.99）mm;内皮素-1和一氧化氮合酶分别为（214.36±10.49）g/L、（211.15±16.99）U/mL,与对照组比较有统计学差异。结论本实验方法能够制备蛛网膜下隙出血后脑血管痉挛模型。     

早期手术治疗急性创伤性髌骨脱位疗效分析

目的探讨早期手术治疗急性创伤性髌骨脱位的效果。方法对22例急性创伤性髌骨脱位患者行关节镜下内侧髌骨股骨韧带（MPFL）修补或重建,同时部分病例行关节镜下髌外侧支持带松解和（或）胫骨结节内移截骨。结果术后平均随访25.5个月,术后所有病例均未出现髌骨再次脱位,无髌骨错动或半脱位。患者主观Kujala评分、Lysholm评分、Tegner运动等级评分与受伤前比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论早期手术治疗急性创伤性髌骨脱位能够明显改善髌骨稳定性,患者的术后主观评分和运动等级均能够达到受伤前水平,对于患者术后膝关节功能和运动水平的恢复有积极的作用。     

412例前列腺癌患者血清前列腺特异抗原游离与总量比值及骨转移的分析

目的分析前列腺癌(Pca)患者血清前列腺特异抗原游离(FPSA)与总(TPSA)比值(F/T)的结果及骨转移的特点。方法对412例Pca患者术前血清TPSA、FPSA含量和F/T比值及99mTC-MDPECT全身骨骼显像分为二组进行分析。结果无骨转移组为25.5%(105/412例);有骨转移组为74.5%(307/412)。307例Pca骨转移组患者,共有2907个转移病灶,97.5%(2834/2907)显示为"热区"病灶,2.5%显示为"冷区"病灶(73/2907)。有Pca骨转移组血清TPSA、FPSA和F/T分别是97.9±59.4μg/L,10.2±8.1μg/L和0.09±0.04;无ca骨转移组29.6%(16/54),分别是24.8±23.0μg/L,4.4±3.4μg/L和0.12±0.05;二组有显著性差异(P0.01)。TPSA与骨转移程度呈负相关(r=-0.487,P0.05)。当PSA10μg/L,骨转移率为2.6%;当PSA 10～20μg/L,为10.5%;PSA 21～50μg/L,为52.6%;PSA 51～100μg/L,为92.7%;PSA100μg/L,为100%。F/T比值与骨转移程度呈负相关(r=-0.641,P0.05)。F/T0.15者,有84%的Pca患者有骨转移;F/T0.10者,100%的患者有骨转移。结论血清F/T比值小于0.15者,必要时行ECT全身骨骼显像。骨转移的好发部位依次是盆骨、椎骨和肋骨。     

免疫抑制剂西罗莫司对walker-256肿瘤细胞系的抑制作用

目的：探讨肝癌肝移植术后应用西罗莫司的临床意义。方法：体外实验：应用MTT比色法观察西罗莫司对walker-256肿瘤细胞增殖的影响;应用流式细胞仪观察西罗莫司对walker-256肿瘤细胞周期的影响。体内实验：观察西罗莫司对肝癌肝移植术后肝癌复发大鼠模型肿瘤生长情况、肿瘤组织PCNA指数、肿瘤复发率及生存情况的影响。结果：体外试验：MTT比色法示西罗莫司对walker-256肿瘤细胞有抑制作用,IC50为6.36ng/ml;细胞周期检测示西罗莫司组G1/G0期比例为（55.2±0.1）%较对照组（45.2±0.4）%高（P〈0.05）。体内实验：西罗莫司组大鼠肿瘤复发率为90%,对照组为95%,两组比较差异无统计学意义;西罗莫司组生存时间为（26.5±2.5）天,对照组为（14.8±2.3）天,两组差异有统计学意义（P〈0.05）。西罗莫司组大鼠PCNA指数为（64.1±2.1）%,较对照组（80.8±1.0）%低,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：西罗莫司能明显抑制肿瘤生长速度,延长带瘤生存时间。     

PTEN与MGMT蛋白在男性乳房发育症中的表达

目的观察抑癌基因PTEN和DNA直接修复酶MGMT在男性乳房发育症(GM)乳腺中的表达。方法采用免疫组化SP法检测68例GM乳腺(实验组)和24例正常男性乳腺(对照组)中PTEN与MGMT的表达状况。将所选实验组分别按年龄及组织学类型分组并分别研究。结果PTEN与MGMT表达均位于乳腺导管上皮细胞核。GM乳腺中PTEN与MGMT表达水平较正常男性乳腺显著降低(P<0·01)。二者在GM不同年龄组间的表达有差异(P<0·05),且PTEN表达水平在中年组、老年组、青年组依次降低;MGMT表达水平在老年组、中年组、青年组依次降低。二者在GM不同组织学类型间的表达亦有差异(P<0·05),且二者表达水平在硬化型、过渡型、旺炽型均依次降低。PTEN与MGMT表达之间没有相关性。结论GM乳腺组织中PTEN与MGMT表达的异常可能与GM的发生有关。     

TGF-β1联合内脏内胚层END-2细胞诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞及与凋亡的关系

目的:探讨体外诱导胚胎干细胞(ESCs)向心肌细胞分化过程中分化与凋亡的关系,为优化组织工程的种子细胞提供依据。方法:先将ESCs悬浮培养形成2-3 d拟胚体(embryoid bodies,EBs),再向培养液中添加转化生长因子-β1(TGF-β1),以及与内脏内胚层样END-2细胞条件培养液共培养联合诱导ESCs向心肌细胞分化。以自然分化为对照组。激光共聚焦显微技术检测心肌细胞特异性肌钙蛋白T(TnT)的表达,透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构。用AnnexinⅤ/PI双染后,在流式细胞仪上检测ESCs分化过程中的凋亡情况。结果:EBs经TGF-β1诱导后,有(43.00±2.08)%的拟胚体出现自发节律性收缩,表达心肌细胞特异性蛋白TnT,以及观察到心肌样超微结构,尤其是联合TGF-β1和END-2细胞条件培养液诱导,自发性收缩的拟胚体高达(88.00±1.42)%(P<0.01),收缩区域较大且拥有较成熟的心肌样结构。然而自然分化组发生自发节律性收缩的拟胚体只有(12.00±1.53)%。经2种诱导条件诱导后,检测两者的凋亡率分别为(5.58±0.65)%,(9.60±0.75)%(P<0.05)。结论:联合TGF-β1和内脏内胚层样END-2细胞条件培养液对心肌细胞分化有较高的诱导率,两者发挥协同诱导作用,可能机制是直接诱导ESCs分化或促进不向心肌细胞分化的ESCs凋亡。     

IFN-α和IFN-γ逆转MR2细胞维甲酸耐药的实验研究

目的:探讨IFN-α和IFN-γ与全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)联合逆转MR2细胞对ATRA耐药的可能性及其机制。方法:IFN-α、IFN-γ及ATRA单独或两种IFN分别与ATRA联合作用于对ATRA耐药的细胞株MR2后,采用MTT比色法检测细胞的增殖,用光镜观察、NBT还原实验及流式细胞仪检测细胞的分化,用间接免疫荧光法检测早幼粒细胞白血病(promyelocytic leukemia,PML)蛋白的表达。结果:两种IFN均能抑制MR2细胞的增殖;IFN与ATRA联合应用时抑制作用更加显著;但两种IFN无论是单独应用还是与ATRA联合应用,二者之间均无统计学意义(P>0.05)。两种IFN也能诱导MR2细胞发生一定程度的分化;二者分别与ATRA联合应用时作用更加显著,但IFN-γ ATRA组诱导MR2细胞分化的作用明显强于IFN-α ATRA组(P<0.05)。两种IFN都能诱导PML蛋白的表达。结论:IFN-γ与ATRA联合应用逆转MR2细胞对ATRA耐药的作用强于IFN-α与ATRA的联合,可能与IFN-α和IFN-γ信号传导途径的不同有关。     

GLUT4在多囊卵巢综合征大鼠子宫内膜中的表达及意义

目的： 探讨葡萄糖转移因子4（GLUT4）在多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠子宫内膜中的表达，评价其与子宫内膜胰岛素抵抗(IR)的关系。方法: 54只85日龄SD雌性大鼠，随机分为：① 对照组（20只）；② PCOS组（17只）；③ 二甲双胍治疗组（17只）。其中后两组先参照Poretsky等的方法复制PCOS大鼠模型，造模成功后，再分别喂服安慰剂或二甲双胍， 14 d后断头处死各组大鼠并取材。采用免疫组织化学染色Elivision^TM Plus两步法检测对照组、PCOS组及治疗组大鼠子宫内膜GLUT4蛋白的表达。结果: PCOS组大鼠子宫内膜腺上皮中GLUT4和INS-R蛋白表达明显低于对照组（P＜0.01，P＜0.05），INS蛋白表达水平明显高于对照组水平（P＜0.01）；治疗组GLUT4表达显著高于PCOS组（P＜0.01），但仍低于对照组（P＜0.01），INS表达较PCOS组显著降低（P＜0.05），但仍高于对照组（P＜0.05）；子宫内膜间质中无GLUT4的表达，INS和INS-R表达情况与腺上皮相似。结论: PCOS大鼠子宫内膜GLUT4表达减少和子宫内膜的IR有关。     

LAIR-1/LAIR-2(CD305/CD306)与配体结合亲和力的比较

目的:LAIR-1/LAIR-2(CD305/306)与配体结合亲和力的比较。方法:应用不同浓度混合的LAIR-1和LAIR-2融合蛋白,同时或先后与配体表达细胞孵育后,用特异性LAIR-1或LAIR-2单克隆抗体(mAb)进行免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)分析,比较LAIR-1和LAIR-2融合蛋白与细胞结合的百分率的变化及相互竞争情况。结果:LAIR-1和LAIR-2膜型配体的分布较广泛,人和小鼠LAIR受体与配体的结合具有相互交叉的特点。LAIR-2能够明显阻断LAIR-1与其膜型配体的结合,而LAIR-1对LAIR-2与其配体的结合无影响。结论:LAIR-1和LAIR-2可能结合相同的膜型配体,但LAIR-2结合配体的亲和力明显高于LAIR-1结合的亲和力。此结果为深入探讨LAIR家族免疫调节的分子机制提供重要的实验依据。     

人致肺纤维化因子的重组表达和抗体制备

目的:进行人致肺纤维化因子的原核和真核表达,并利用原核表达蛋白制备兔抗人致肺纤维化因子多克隆抗体。方法:人致肺纤维化因子为同一基因的一组可变剪切产物,将其共有cDNA序列(ChS)插入质粒pQE-30,构建ChS-pQE表达质粒,转化大肠杆菌M15,表达菌株经IPTG诱导,获得大量不可溶的包涵体蛋白。以之为抗原免疫新西兰大白兔,制备出多克隆抗体。对该多克隆抗体初步检测证明获得较高滴度和较高特异性的抗体,并用Western blot鉴定这组cDNA连接到pcDNA3.1D载体后在真核细胞的重组表达。结果:原核表达的不可溶性重组蛋白也能成功地制备出多克隆抗体。结论:成功地表达了人致肺纤维化因子,并制备出高滴度、高特异性的多克隆抗体,人致肺纤维化因子的表达和功能研究提供了一条途径。