四重荧光定量rRT-PCR法检测柯萨奇病毒B1、B2、B3及其他未分型肠道病毒

目的建立检测柯萨奇病毒(CoxB1、CoxB2、CoxB3)和其他未分型肠道病毒(EV)的四重荧光定量rRT-PCR法。方法用Primer Express 3.0软件设计特异性引物和探针,优化反应体系,评价建立的rRT-PCR法的灵敏度、特异性和重复性,并用该法检测535份病毒性心肌炎患儿粪便标本和43份咽拭子标本,对阳性结果测序验证。结果 rRT-PCR法检测CoxB1、CoxB2、CoxB3和其他未分型EV灵敏度均达103copies/mL,特异性较高,检测CV均<1.0%。578份临床标本用该法检测EV为153份,其中CoxB1病毒69份,CoxB2病毒18份,CoxB3病毒27份,其他未分型EV 39份。随机选取CoxB1、CoxB2、CoxB3病毒检测阳性样本各10例测序,均与该法的检测结果一致。结论建立的四重荧光定量rRT-PCR法可同时检测并区分CoxB1、CoxB2、CoxB3病毒和其他未分型EV,可用于此类病毒引起的暴发疫情的实验室应急诊断。     

雷帕霉素激活自噬改善嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞损伤

目的:通过观察雷帕霉素对PAN 诱导的足细胞损伤及自噬相关蛋白表达的影响,探讨自噬在雷帕霉素保护PAN 诱导的足细胞损伤中的作用及可能机制。方法:构建PAN 诱导的足细胞损伤模型,将足细胞分成对照组(Control 组),PAN 组(加入50 μg/ ml PAN),雷帕霉素组(RAP 组:分别加入100、200、300 ng/ ml 雷帕霉素),PAN+雷帕霉素组(PAN+RAP组:细胞在用含PAN 的培养液培养前1 h,分别用100、200、300 ng/ ml 雷帕霉素进行预处理1 h)。采用Annexin V/ PI 双染法检测细胞凋亡,透射电镜观察自噬小体,Western blot 检测LC3、p62、4EBP1、P70S6K、mTOR 蛋白表达。结果:与对照组比较,PAN组足细胞凋亡增加,自噬体减少,LC3域蛋白表达下调,p62 上调,mTOR、4EBP1、P70S6K 磷酸化水平上调;与PAN 组比较,PAN+RAP 组足细胞凋亡率下降,自噬体增加,LC3域蛋白表达上调,p62 下调,mTOR、4EBP1、P70S6K 磷酸化水平下调。结论:PAN 可以抑制足细胞自噬,促进足细胞凋亡;雷帕霉素可通过激活自噬改善PAN 诱导的足细胞损伤,这种作用可能与雷帕霉素抑制mTOR/4EBP1、P70S6K 信号通路有关。     

系统性红斑狼疮患者自身抗体检测及意义

目的：探讨自身抗体在系统性红斑狼疮（SLE）中的意义。方法：采用放射免疫分析检测50例SLE患者血清中的抗双链DNA（dsDNA）抗体,采用德国IMTEC公司抗核抗体谱线性印迹法检测抗核小体抗体（AnuA）、抗组蛋白抗体（AHA）、抗StuD1等其他自身抗体。结果：抗StuD1阳性率最高（82％）,其次是抗R060KD抗体（80％）和AunA（72％）;抗dsDNA、AHA、抗U1-RNP、抗R052KD、抗SSB的阳性率分别为44％、32％、58％、48％、24％。其他三种自身抗体阳性率很低。结论：SLE患者血清中可出现大量的自身抗体,同时检测多种自身抗体能提高对SLE的鉴别诊断。     

D-丝氨酸与肾功能不全关系的研究进展

丝氨酸是人体所需的一种非必需氨基酸,在体内参与多种代谢过程,与各种生命活动密切相关。丝氨酸是手性氨基酸,有L型和D型两种存在形式。近年来,有研究发现,血液中D-丝氨酸(D-Ser)浓度升高可能是肾功能损伤的潜在生物标志物,但是其肾脏损伤机制仍然不清楚。本文从D-Ser的体内代谢特点、在肾脏疾病(慢性肾脏病、急性肾损伤、急进性肾小球肾炎和其他继发性肾脏病等)中的作用研究进展、D-Ser引起肾功能不全的可能机制等3个方面来阐述D-Ser与肾功能不全关系的研究进展,以期为肾功能不全的早期诊断、治疗和预后提供新的思路和策略。     

黄芪甲苷保护嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞损伤及机制探讨

目的探讨黄芪甲苷对嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞凋亡的影响及可能机制。方法构建嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞损伤模型,根据不同处理将足细胞分成:Control组、PAN组(50μg/mL嘌呤霉素氨基核苷处理24 h)、AS-IV组(分别用5μg/mL、15μg/mL、30μg/mL黄芪甲苷处理24 h)、AS-IV+PAN组(先用黄芪甲苷预处理30 min,再用50μg/mL嘌呤霉素氨基核苷处理24 h)。采用CCK-8检测足细胞生长活力,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,免疫荧光法检测足细胞标记蛋白,Western blot检测caspase-3、cleaved caspase-3及VEGFR2/GIV通路的蛋白水平。结果与Control组比较,PAN组足细胞的凋亡率显著增加(P0.05),nephrin、podocin、p-AKT的蛋白水平明显降低(P0.05),cleaved caspase-3、p-VEGFR2、p-GIV的蛋白水平均明显上调(P0.05);与PAN组比较,AS-IV+PAN组足细胞的凋亡率显著降低(P0.05),nephrin、podocin的蛋白水平明显增加(P0.05),cleaved caspase-3的蛋白水平显著下降(P0.05),p-VEGFR2、p-GIV、p-AKT的蛋白水平进一步上调(P0.05)。结论黄芪甲苷可以保护嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞损伤,VEGFR2/GIV通路可能参与其调节的作用机制。     

IgG抗-C引起配血不合1例

Rh血型抗体在临床输血中时常可见,其中抗-E、抗-C较为多见,但抗-C报道较少。近日,作者在为1例骨折手术患者备血时发现配血不合,经鉴定证明,其血清中含有IgG抗-C,现报道如下。     

中老年特发性膜性肾病128例临床病理特点分析

目的探讨中老年（≥45岁）特发性膜性肾病（IMN）患者的临床病理特点。方法对128例中老年IMN患者的临床资料、实验室检查结果、肾组织光镜病理特点、肾组织免疫病理及电镜特点进行分期,并与同期住院的51例青年IMN患者进行比较。结果与青年组比较,中老年组女性、合并高血压及原发性高血压的比例较高,尿素氮（BUN）、血糖、总甲状腺素（TT4）水平均明显较高,低密度脂蛋白（LDL）水平、肌酐清除率（eGFR）均较低,发生肾小管间质慢性病变、小动脉壁增厚、肾小球球性硬化的比例均较高,电镜下系膜区致密物沉积比例明显较高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论与青年患者比较,中老年IMN患者血压、血糖、BUN、TT4水平较高,eGFR、LDL较低,光镜下肾小管间质慢性病变、肾小球硬化等临床病理损伤较重,电镜下系膜区致密物沉积较多。     

IgA肾病足细胞自噬体的改变及其临床意义

目的 观察IgA肾病(IgAN)足细胞自噬体的数量变化,初步探讨足细胞自噬与IgAN进展的关系。 方法 回顾性分析浙江省人民医院2013年1月—2014年12月经肾活检确诊且具有完整临床资料的35例IgAN患者。据病理将患者分为LeeⅡ级、Ⅲ级和Ⅳ级。据尿蛋白分为大量蛋白尿组(尿蛋白≥3.5 g/d)和非大量蛋白尿组(尿蛋白＜3.5 g/d)。据eGFR分为2组:eGFR≥60 ml/min和eGFR＜60 ml/min组。据性别分为男性组和女性组。光镜和透射电镜分别观察肾脏组织病理学变化以及足细胞结构和自噬体的数量。每5例患者分为一组,每组患者随机选取30个足细胞记录足细胞自噬小体数量,然后计算出每个足细胞内自噬小体的数量。最后分析自噬体数量与病理分期、性别、肌酐清除率和尿蛋白的关系。 结果 与正常对照组比较,IgAN组患者足细胞自噬体数量明显减少,差异有统计学意义(P＜0.001)。然而随着IgA肾病Lees分期级别的增加,足细胞自噬体数量又呈增加趋势。其中Lee Ⅱ期患者与Lee Ⅳ期患者相比,差异有统计学意义(P=0.001)。另外,足细胞自噬体数量的减少在女性患者中更为明显,差异有统计学意义(P=0.035)。肾功能较差的患者(男性和Lee Ⅳ期患者)拥有更多的足细胞自噬体,但差别无统计学意义。自噬体数量在不同尿蛋白组之间的差异无统计学意义。 结论 足细胞自噬参与着IgA肾病的进展。      

融合蛋白表达载体MK—EGFP的构建及其在不同肿瘤细胞中的定位

MK（Midkine）是一种肝素结合性生长因子,最初发现与细胞生长、迁移和存活有关,随后的研究发现它在多种人源恶性肿瘤中高表达。新近研究显示MK能促进Wilm’s瘤细胞和成纤维细胞的生长、NIH3T3细胞的转化、用顺铂处理Wilm’s瘤细胞的抗凋亡活性以及诱导兔角膜强烈的血管生成应答。