HPV16L1-E7重组腺病毒载体疫苗免疫BALB/c小鼠的研究

目的:探讨人乳头瘤病毒16型L1-E7重组腺病毒载体疫苗的免疫效应。方法:①将rAd5HPV16L1-E7载体疫苗在293细胞中扩增后,以肌肉注射、腹腔注射、滴鼻和灌胃途径免疫小鼠,采用ELISA法测其血清IgG抗体水平;②制备脾细胞悬液,加入到96孔无菌培养板中,并分别加入rAd5HPV16L1-E7特异性蛋白和RPMI1640 10%胎牛血清,加入3H-TdR1μCi/孔,做T-细胞增殖实验;③取经过培养56h的培养液进行IFN-γ的测定。结果:不同途径免疫的BALB/c小鼠血清IgG抗体水平均高于对照组(P<0.05),但以肌注组产生抗体量最多,IFN-γ和T-细胞增殖亦高于对照组(P<0.05)。结论:rAd5HPV16L1-E7重组活病毒疫苗既能刺激T-细胞产生细胞介导的免疫应答,又能刺激B-细胞产生抗体介导的免疫应答,说明其具有很好的免疫原性。     

医学微生物学实验线上教学的实践与思考

针对医学微生物学实验线上教学面临的诸多难题,本研究采取线上直播+操作视频+虚拟实验的授课模式,通过操作视频和虚拟实验弥补了操作上的缺口;考核模式采用紧扣操作流程的主观型思考题+实验设计+文献综述（围绕传统实验由于条件所限无法开展的临床检验重头技术或新技术,如质谱分析、荧光定量PCR、G实验等展开）的模式,从而可以较大限度了解学生对教学目标的掌握程度和综合应用、创新性思维等能力。学生调查问卷显示,大部分学生对线上实验教学模式持肯定态度,学生作业的完成质量表明大部分学生学习效果良好。     

医学微生物学实验线上教学模式探索与思考

医学微生物学实验作为一门实践课,开展线上教学面临诸多难题。基本技能的掌握和动手能力的提高是实验课的核心培养目标。缺少了实地操作,线上实验教学在授课模式和考核模式上都面临较大挑战。我们采取线上直播+操作视频+虚拟实验的授课模式,通过操作视频和虚拟实验在一定程度上弥补操作上的缺口。考核模式采用紧扣操作流程的主观型思考题+实验设计+文献综述(围绕传统实验由于条件所限无法开展的临床检验重头技术或新技术如质谱分析、荧光定量PCR、G实验等展开)的模式,从而可以较大限度了解学生对教学目标的掌握程度和综合应用、创新性思维等能力,在较大程度上弥补了操作考试缺席的不足。对学生进行的随机调查问卷结果显示,大部分学生对本次线上实验教学模式持肯定态度。学生作业的完成质量表明大部分学生学习效果良好。     

曾以为，我可以用身体回报

这是我上大学的第一个寒假。月光那么凉，我的手心里却都是汗水。灯光太刺眼，我轻轻地关上，在潘叔叔惊诧的目光中，故作淡定地褪去衣物，我的胴体顿时被镶嵌在银白的光环里。终于，他带着熟悉的烟草味和粗重的喘息靠近，我光洁的身体轻微地抖动了几下……     

关键时刻，拉链搅局

他出差半个月后，给我打来电话说，他正在火车上，晚上就到家。我心里顿时像桃花般呼拉一下子就盛开了。     

HPV58 E6体外降解p53蛋白作用的研究

通过PCR方法从有乳头瘤病毒58型（HPV58）全基因克隆中扩增出HPV58E6基因片段，克隆至真核表达质粒pcDNA3的T7启动子下游，并在体外转录成mRNA后，在源自网织红细胞的翻译缓冲液中成功表达了含有生物素标记的HPV58E6蛋白，并在体外成功发现HPV58E6能够降解p53蛋白，从而推断结合并降解p53蛋白是其致癌作用的关键环节，这为日后在细胞内对其致癌机理行进一步研究以及针对其进行治疗奠定下坚实的基础。     

HPV16L1ORF的基因克隆及在大肠杆菌中的表达

目的获得足够量的人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1融合蛋白及含HPV16L1ORF序列的基因重组体。方法通过PCR扩增获得HPV16L1基因片段,将此片段插入原核细胞表达载体pGEMEX-1,构建相应的重组表达质粒pGEMEX-L1,将此质粒转化大肠杆菌JMl09(DE3),得到的转化子经IPTG诱导表达后进行菌体蛋白的Western blotting免疫印迹分析。结果HPV16L1基因重组体构建成功,克隆的目的基因片段在大肠杆菌中产生的融合表达产物在Western blotting检测中具有和抗HPV16L1阳性血清反应的抗原性。结论HPV16L1基因片段可在大肠杆菌中得到有效表达,表达产物可与相应的抗血清发生阳性反应。     

HPV_(16)L1-E7重组病毒及其重组质粒免疫后小鼠抗体水平动态变化的研究

目的 :研究人乳头瘤病毒 16型L1 E7重组腺病毒 (rAd5HPV16 L1 E7virus)及其重组质粒 (rAd5HPV16 L1 E7plasmid)经不同途径免疫后小鼠抗体水平的动态变化。方法 :用 2 93细胞扩增rAd5HPV16 L1 E7重组病毒 ,同时制备rAd5HPV16 L1 E7重组质粒 ,分别以肌肉注射、腹腔注射、滴鼻和灌胃途径免疫小鼠 ,采用ELISA法测定其血清IgG抗体水平。结果 :rAd5HPV16 L1 E7重组病毒及其重组质粒采用不同途径免疫的BALB/c小鼠血清IgG抗体水平均高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,其中以肌注组产生抗体量最多 ,并且出现最早。结论 :rAd5HPV16 L1 E7重组病毒及其重组质粒均能刺激B细胞产生抗体介导的免疫应答 ,免疫途径不同 ,抗体峰值的出现时间亦不同 ,测定抗体的最佳时间亦不同。     

幽门螺杆菌细胞微生物学模型的研究

目的 建立幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)细胞微生物学研究模型。方法 选择6至8月龄胎儿胃粘膜组织进行原代细胞培养,运用扫描和透射电镜研究了螺杆状和圆球形Hp与人胃粘膜上皮细胞相互作用关系。结果 螺杆状Hp很快与人胃粘膜上皮细胞微绒毛粘附,Hp粘附细胞处形成一个致密纤维样肌动蛋白垫,上皮细胞膜杯状内陷包绕Hp,紧密粘附于宿主细胞,Hp粘附下方细胞内微丝、微管和肌动蛋白呈局灶性聚集。圆球形Hp可出现类似生物学效应,提示两种形态的Hp皆可作用于人胃粘膜上皮细胞。此外,螺杆状Hp还可与宿主细胞膜融合,被细胞内在化,细胞内出现空泡效应。上述病理性改变与Hp感染的胃粘膜活性组织标本的检查结果基本一致。结论 原代胃粘膜上皮细胞与Hp相互作用近似于Hp体内致病的微环境,是Hp细胞微生物学研究的良好模型。     

HPV16L1-E7重组腺病毒在SCID-Hu IC小鼠和HPV16阳性肿瘤联合嵌合小鼠中防治作用的研究

目的　建立SCID HuIC小鼠动物模型和HPV16阳性肿瘤联合嵌合模型 ,研究HPV16L1 E7重组腺病毒在SCID HuIC小鼠和肿瘤联合嵌合模型中的防治作用。方法　①实验组SCID小鼠移植人胎儿多组织 ,对照组注射RPMI 16 4 0培养液 ,8周末检测人IgG抗体 ,人CD4 5、CD3、CD19;②T1和C1组先注射HPV16L1 E7重组腺病毒 ,2周末强化 ,4周末接种CaSki细胞 ;T2和C2组先接种CaSki细胞 ,4周末注射HPV16L1 E7重组腺病毒 ,6周末强化。 8周末检测病毒特异性IgG抗体、人IFN γ及T淋巴细胞增殖 ,测定肿瘤的物理指标以及免疫组化实验。结果　①实验组人IgG抗体阳性率 90 .0 % (18/ 2 0 ) ,CD4 5为 (49.79± 39.18) % ;CD3为 (42 .2 7± 36 .37) % ;CD19为 (9.2 8±7.4 6 ) % ,对照组人IgG抗体、人CD4 5、CD3及CD19均为阴性 ;②T1和T2组病毒特异性IgG抗体均为阳性、人IFN γ的含量和T淋巴细胞增殖实验 ,病毒特异性蛋白刺激组均高于非刺激组 (P <0 .0 5 ) ,C1和C2组病毒特异性IgG抗体为阴性、人IFN γ的含量及T淋巴细胞增殖均为阴性 ;肿瘤形成率 :T1和T2组分别为 0和 70 .0 % (7/ 10 ) ,而C1和C2组均为 10 0 % ;肿瘤大小 :T2组在 4周末时为 (4.35 5±0 .387)mm3 ,8周末为 (10 2 8± 90 .96 )mm3 ,C2组在 4周末时为 (32 .75± 6 .717)mm3