CDK1靶向shRNA质粒载体的构建及鉴定

目的:设计并构建CDKI -shRNA质粒表达载体,转染肝癌HepG2细胞,验证shRNA对肝癌HepG2细胞CDK1基因的沉默效应,便于进一步研究CDK1的功能.方法:设计针对CDK1 mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的pSIREN-RetroQ-ZsGreen载体片段进行连接、转化.经测序等方法鉴定重组克隆.将重组载体质粒经脂质体包裹转染肝癌HePG2细胞,realtime PCR及Western blot检测RNA干扰效果.结果:重组克隆经测序证实插入的序列正确,realtime PCR及Western blot检测证实设计的3条RNA干扰序列有效沉默了肝癌HepG2细胞中的内源性CDKI.结论:所制备的CDK1-shRNA在肝癌HepG2细胞中可获得高效转染,并能产生特异性的基因沉默效应,以CDK1为靶向的shRNA能够有效下调CDK1基因的表达,对周期依赖激酶CDK1功能的研究奠定基础.     

吉非替尼对A549细胞增殖及细胞周期、凋亡的作用

目的:观察吉非替尼对人非小细胞肺癌A549的生长增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响.方法:用5-40μmol/L浓度范围内的吉非替尼和A549细胞共培养24、48、72h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测吉非替尼对细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测其对细胞凋亡及细胞周期分布的影响;利用抗Capspase-3 的ELISA(酶联免疫吸附)法检测是否发生细胞凋亡.结果:在5-40μmol/L浓度范围内,吉非替尼对A549细胞的增殖有明显的抑制作用,并呈时间和剂量依赖性,以40μmol/L作用72h时的抑制率最高.流式细胞仪检测显示10μmol/L-40μmol/L的吉非替尼作用可使细胞发生G0/G1期阻滞,但即使作用48h也未发现凋亡细胞.ELISA法显示48h内,吉非替尼组与正常细胞组的Capspase-3浓度无统计学差异,但作用72h时出现凋亡.结论:吉非替尼在5-40μmol/L浓度下作用时间小于48h时,其对A549细胞的增殖抑制可能是通过阻滞A549细胞于G0/G1期而非引起细胞凋亡实现的,但作用时间达到72h时,其可以诱导A549发生细胞凋亡.     

气囊对腹壁撤退反射实验结果的影响

目的为腹壁撤退反射实验优选出恰当的制备气囊的材料。方法分别通过数显游标卡尺及X光图像对不同气囊在不同压力值下的直径进行测量;并采用3分疼痛阈值作为判断标准,测试不同气囊对大鼠造成明显内脏疼痛时所对应的压力值。结果圆形乳胶气球的直径随压力值增加变化均匀和缓,并且可以满足实验中常用的压力范围(20~80 mm Hg),其对大鼠造成内脏疼痛的阈值在伤害性刺激值附近,不会对大鼠肠道造成不可逆的损伤。结论腹壁撤退反射实验中使用圆形乳胶气球制备气囊较为理想。     

DNA多态性的研究进展

1　ＤＮＡ多态性研究的三大阶段1.1　第一代基因组遗传标记—限制性片段长度多态性 (ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ,ＲＦＬＰ)　ＲＦＬＰ是 70年代中后期建立起来的遗传标记系统。ＲＦＬＰ在发生上可以分为单碱基突变型和顺序重排型两种类型[1] 。所谓单碱基突变型是由于在某一限制性内切酶识别位点上 ,因发生单碱基替换而引起该限制性内切酶识别位点丢失 ,或在无切点的位点上形成新的限制性酶识别位点。顺序重排型是指因ＤＮＡ顺序发生重复、插入或缺失等改变 ,导致两个限制性内切酶位点之…     

阿片对人遗传物质的损伤效应

目的··：了解阿片对人体产生的细胞遗传学效应。方法··：运用微量人全血培养方法研究了阿片滥用者的外周血淋巴细胞染色体畸变、微核形成及细胞分裂指数。结果··：滥用阿片能够诱发人血淋巴细胞染色体畸变,提高微核形成率,并可使细胞分裂指数下降。随着滥用史的延长,其损害作用具有显著增加的趋势。结论··：阿片是人血淋巴细胞染色体的损伤因子。     

通过抑制ERK1/2通路诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡的研究

目的应用细胞外信号调节激酶(ERK)1/2抑制剂U0126研究ERK1/2在肝癌细胞增殖、凋亡中的作用。方法以肝癌SMMC-7721细胞株为材料,分为空白对照组及不同浓度的U0126处理组。以MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡情况。结果不同浓度的U0126处理后均可明显抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),使处于G0/G1期的细胞明显增多(P<0.05)且呈剂量依赖性,并诱发细胞凋亡发生(P<0.05)。结论阻断ERK1/2通路有可能成为肝癌治疗的重要手段。     

某三甲中医医院院内感染危险因素预测

目的 探讨某三甲中医医院院内感染的危险因素,采用ROC曲线评估模型的预测效果。方法 收集某三甲中医医院发生医院感染的住院患者334例为病例组,以年龄、性别和入院年份作为匹配因素,用1∶1倾向性评分匹配(PSM)匹配未发生医院感染的344例住院患者作为对照组,采用多因素Logistic回归分析住院患者发生医院感染的危险因素,并构建模型进行预测,通过ROC曲线对预测模型进行评估。结果 纳入住院患者668例,医院感染病例中以下呼吸道感染为主;二元Logistic回归结果显示,同期住院天数、抗菌药物的使用、留置导尿管、病种是医院感染独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线下面积为0.836(95%CI为0.806～0.866)。结论 多因素Logistic回归分析方法构建的数据模型,能较好预测院内感染情况。     

保留主动脉瓣根部手术治疗马方综合征的近期疗效CSCD

目的 评价保留主动脉瓣根部手术治疗马方综合征的近期疗效.方法 54例患者,男38例,女16例;年龄20～50岁,平均（31.26±7.80）岁.术前均根据1996年制定的Ghent标准确诊为马方综合征.术前超声心动图示主动脉瓣反流微量5例,少量12例,中量22例,大量15例.根据影像学资料及术中探查,决定是否保留主动脉瓣,其中行Bentall＋二尖瓣成形（MVP）手术2例,Bentall＋二尖瓣置换（MVR）手术4例,Bentall＋全弓＋象鼻手术2例,Bentall手术27例,David＋MVP手术6例,David手术13例.根据术式分为Bentall手术组35例和David手术组19例.随访12～48个月,比较两组手术前、后和不同方案的疗效差异.结果 手术死亡2例,Bentall手术组1例死于术后无法控制的大出血,,David手术组1例死于术后肺部感染、多脏器功能衰竭.52例恢复良好,术后心包及纵隔引流310～820 ml;住院11～29天,平均（16.43±4.38）天.Bentall手术组体外循环（141.09±15.48）min,主动脉阻断（93.82±15.06）min.David手术组体外循环（186.32±23.96）min,主动脉阻断（140.21±22.13）min.术后两种术式的射血分数、左心室径、左心室收缩期末容量、左心室舒张末期容量、短轴缩短率改善与术前相比差异有统计学意义（P〈0.05）,但组间差异无统计学意义（P〉0.05）,术后早期并发症发生比例组间差异无统计学意义,晚期并发症Bentall手术组明显高于David手术组.术后David手术组主动脉瓣反流程度较术前明显减轻（1.37±0.95对2.53±0.84,P〈0.05）.随访期间David手术组1例主动脉瓣重度关闭不全行主动脉瓣置换术;Bentall手术组1例再发腹主动脉夹层手术治疗,6例因华法林抗凝出现出血、栓塞并发症.结论 保留主动脉瓣的根部处理治疗马方综合征的近期疗效满意.     

基因表达的系统分析在基因组转录谱研究中的应用

基因表达的系统分析技术 (SAGE)是一种全面分析基因表达模式的实验方法。该方法的原理是基于分离出每一m RNA所特有的长 9bp～ 14 bp的标签并将其串联起来进行克隆和测序。该方法不仅可以给出我们一个全面的特定细胞或组织的基因表达谱 ,而且还可以通过对两组处于不同环境中的同一类型细胞的基因表达谱进行比较 ,帮助我们发现那些由于环境的变化而表达发生改变的基因。本文拟就这一高通量方法的原理、应用、不足及其改进等方面的研究情况作以综述     

先天性长QT综合征相关HERG基因A561V突变体及其真核表达载体的构建及表达

目的在收集的一个先天性长QT综合征（congenital long QT syndrome，LQTS）家系中发现HERG基因A561V突变，探讨HERG基因A561V突变体及其真核表达载体的构建方法，并观察其在真核细胞中的表达。方法采用克隆载体快速PCR法构建HERG基因A561V突变体PGEM-HERG-A561V，并应用限制性内切酶法将突变体构建到真核表达载体pcDNA3中，用Superfect转染试剂将野生型pcDNA3-HERG及pcDNA3-HERG-A561V突变体与荧光真核表达载体pRK5-GFP共转染至HEK293细胞，用细胞免疫荧光化学法检测蛋白质表达。结果构建的突变体经DNA直接测序示HERG基因cDNA1682位点碱基C变为T，构建的突变体在HEK293细胞中成功表达，其蛋白质位于细胞浆中及细胞膜上，而野生型基因的蛋白质位于细胞膜上。结论用克隆载体快速PCR法构建并表达了HERG基因A561V突变，为突变基因的进一步功能研究奠定了基础。