槲皮素对人骨肉瘤细胞U-2OS/MTX300增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:研究槲皮素(quercetin,Qu)对骨肉瘤细胞系U-2OS/MTX300增殖和凋亡的作用及其机制。方法:MTT法观察细胞增殖活性;Annexin V/PI染色检测凋亡;线粒体膜电位及细胞色素C的Western blot检测线粒体凋亡途径;持续活化Akt瞬时转染、Western blot检测Akt通路相关蛋白表达水平变化。结果:槲皮素可明显抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞U-2OS/MTX300生长,并呈时间和剂量依赖性;Annexin V/PI可明显检测到细胞凋亡;进一步发现其作用机制是通过下调线粒体膜电位,促进细胞色素C向胞浆释放及抑制Akt磷酸化来实现。结论:槲皮素可显著抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞系U-2OS/MTX300细胞增殖并诱导其凋亡,其机制与线粒体凋亡途径及抑制Akt活性有关。     

单中心四肢骨肉瘤311例预后分析

 目的 探讨单中心四肢骨肉瘤的治疗、预后及生存状况。方法 回顾性分析1998年至2008年间单中心收治的311例四肢骨肉瘤患者的病历资料,记录患者的基本资料、化疗、手术、并发症、肿瘤转移及预后情况,应用Kaplan-Meier、Cox regression 等统计学方法分析各变量与预后生存的关系。结果 311例四肢骨肉瘤患者,男206例,女105例;年龄5～56岁,平均18.6岁;上肢29例,下肢282例。282例获得广泛或根治性手术,保肢手术149例,截肢手术133例。术后64例患者发生各种并发症,其中17例出现2次以上的术后并发症,25例发生肿瘤局部复发。105例获得规范化疗,206例未获得规范化疗,5年生存率分别为57.4%和36.3%。肺转移患者(76例)和无肺转移患者5年生存率分别为16.8%和50.7%。Enneking 分期ⅡB期和Ⅲ期患者5年生存率分别为44.6%和33.1%。选择保肢手术和截肢手术患者的5年生存率分别为56.6%和31.8%,由于截肢患者中有较大的比例施行了不规范化疗以及其他混杂因素导致5年生存率明显降低。Cox回归分析显示化疗不规范和发生肺转移患者预后较差。结论 新辅助化疗联合肿瘤广泛或根治性手术切除可以挽救约60%青少年四肢骨肉瘤患者的生命,肺转移和不规范化疗严重影响患者的预后。     

非骨水泥型全髋关节置换的科学与个体化康复方案

背景:目前针对非骨水泥型全髋关节置换的康复治疗较少,且大都以遵循传统的负重限制.目的:比较早期负重和晚期负重对非骨水泥型全髋关节置换后患者功能恢复的影响,探讨制定科学与个体化康复方案的可行性.设计、时间及地点:分组对比观察,病例来自2003-04/2006-03中山大学附属一院骨科和广州市第一人民医院骨科.对象:共收集行非骨水泥型全髋关节置换患者40例(42髋),男21例,女19例,年龄32～63岁,平均50岁;符合研究入选标准的有30例(32髋).方法:30例患者分为两组,每组15例.早期负重组:对患者进行早期负重康复治疗;晚期负重组:对患者进行晚期负重康复治疗.两组患者的治疗方案,除术后负重方法不同外,均予系统的早期康复治疗.分为术前和术后阶段,基本训练内容包括肌力和耐力训练、关节活动度训练、转移能力训练、日常生活活动能力训练以及其他训练(心理指导,呼吸功能训练,出院后的指导如家居环境改造、家庭康复方案及复诊计划等).主要观察指标:分别于置换前和置换后12周采用Harris髋关节评分及WOMAC量表对入选患者进行功能评定.放射学评定包括置换前测量股骨皮质指数和CC值,置换后测量两组的假体柄髋腔内充填率,并动态观察股骨假体骨结合情况、髋臼杯固定情况以及假体有无松动、骨溶解、异位骨化等. 结果:①两组患者均未出现术后假体脱位,未见深静脉血栓形成的临床症状,无髋部感染病例.②置换后12周随访时早期负重组患者Hams评分为(93.06±3.42)分,高于晚期负重组(86.63±5.44)分(P<0.001);WOMAC评分早期负重组(4.94±2.21)分,低于(12.19±5.26)分(P<0.001).③股骨皮质指数和CC值及假体柄髓腔内充填率两组相比,差异亦无显著性意义(P>0.05).置换后12周与置换后,周内的X射线平片比较,两组股骨假体均无明显下沉征象(下沉均<1mm),也无透亮线(透亮区)或反应线形成.早期负重组和晚期负重组分别有3例和5例出现"点焊"现象,所有假体均未发现小珠脱落、骨性底座、骨质溶解及异位骨化、移位等假体不稳或固定失败的征象发生.结论:早期康复、早期负重对非骨水泥型全髋关节置换后患者功能改善更明显,科学、个体化康复方案的制定必须要考虑患者的全身状况、植入假体的初始稳定性以及髋周软组织平衡等因素.     

32种中草药提取物体外抗骨肉瘤作用的筛选

目的对32种巾草药进行初步抗骨肉瘤的体外筛选实验，为中药标准化和治疗骨肉瘤提供依据。方法应用MTT法测定各中药提取物对U2OS细胞株增殖活性的影响，检测其抑制骨肉瘤细胞的剂量效应关系：应用形态学观察、FCM及AnnexinV法测定筛选m的中药水提取物对U2OS细胞的凋亡作用。结果32种中草药提取物中蟾酥、牛胆粉等对骨肉瘤U2OS细胞株具有增殖抑制作用，深入研究表明蟾酥、牛胆粉水提取物对U2OS细胞具有促进凋亡作用，其中以蟾酥促进凋广作朋最为明瞳：结论通过对32种中草药进行筛选，发现蟾酥、牛胆粉等对骨肉瘤细胞株U20S的增殖有抑制作用，为进一步开展抗骨肉瘤中草约有效成分的筛选及体内动物研究提供实验依据。     

带血管蒂腓肠肌内侧头肌瓣转移重建髌腱的长期随访

目的 总结胫骨近端侵袭性骨肿瘤广泛切除假体置换手术,应用带血管蒂腓肠肌内侧头肌瓣转移重建髌腱的长期随访结果.方法 胫骨近端肉瘤广泛切除后,应用带血管蒂腓肠肌瓣转移重建髌腱附着,长期随访及评估伸膝动力和并发症.结果 临床治疗69例,对45例生存患者平均随访68.6(24～128)个月,局部复发率8.7%(6/69),伸膝肌力平均4.2级(3.6～5.0),膝关节屈曲平均95°(75°～135°),伸膝平均-2°(0°～12°),5例膝关节不能完全伸直;患肢MSTS功能评分为77%(23.1/30),外观正常.结论 在胫骨近端侵袭性骨肿瘤保肢术中,应用带血管蒂腓肠肌瓣转移重建髌腱,能够恢复伸膝力量,改善软组织覆盖和患肢功能.     

限制型肩胛骨假体置换治疗肩胛骨恶性肿瘤的疗效评价

目的 探讨限制型肩胛骨假体置换治疗肩胛骨恶性肿瘤的效果。方法 回顾性分析近十余年假体置换治疗19例肩胛骨恶性肿瘤的外科治疗适应证、操作要点和改进方法。结果 19例患者平均随访109个月．10例行边缘切除，9例行广泛切除和限制型肩胛骨假体置换手术；边缘切除和广泛切除后复发率分别为30％和11．11％；早期4例仿生型假体术后3例出现仿生肩峰外露和肩胛岗压迫性溃疡，二次翻修假体，MSTS功能评分53.3％；5例改良型肩胛骨假体置换手术后无假体相关并发症，MSTS功能评分70％。结论 限制性全肩胛骨假体置换手术能在切除恶性肿瘤后，最大限度重建了盂肱关节和肩胛骨胸廓间的肌肉群体功能，建立一个稳定的、无痛的肩关节；改良型假体置换术后假体近期并发症少．功能好于仿生型假体。     

四肢骨肉瘤保肢术后假体断裂个性化翻修10例报告

目的 报告连续10例四肢骨肉瘤患者保肢术后假体断裂的个性化翻修病例,总结不同类型假体断裂及相应个性化假体翻修手术的结果与体会.方法 2014年6月至2020年8月,本中心收治10例下肢骨肉瘤保肢术后假体断裂患者,男5例,女5例,初次保肢术前均接受新辅助化疗,术后继续完成辅助化疗.本组10例因下肢疼痛、畸形伴活动受限复诊...     

靶向糖原合成酶激酶-3β抗骨肉瘤的实验研究

 目的 研究糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)在骨肉瘤细胞增殖中的作用及相关分子机制,探讨其在骨肉瘤靶向治疗中的价值。方法 Western blot检测人成骨细胞及骨肉瘤细胞p-GSK-3β(Ser9)表达水平,观察GSK-3β抑制剂及siRNA干扰对细胞增殖、凋亡的影响,利用凋亡蛋白芯片筛查并验证GSK-3β调控骨肉瘤细胞的分子机制,通过裸鼠体内实验评估靶向GSK-3β对于骨肉瘤的治疗价值。结果 在骨肉瘤细胞中p-GSK-3β(Ser9)表达水平明显低于成骨细胞。GSK-3β特异性抑制剂及siRNA干扰均可明显抑制骨肉瘤细胞增殖并诱导凋亡蛋白cleave-caspase 3表达量明显上调。通过蛋白芯片筛查显示一组NF-κB调控的靶基因蛋白survivin、cIAP-1、XIAP及Bcl-2明显下调。Western blot验证了上述芯片结果,并发现氯化锂处理后p-IκBα水平下降,核内NF-κB p65表达量下降。NF-κB双荧光素酶报告系统检测稳定过表达持续活化GSK-3β细胞中NF-κB转录活性与空载体组细胞相比明显升高,而稳定干扰GSK-3β的细胞中NF-κB转录活性与空载体组细胞相比明显下降。裸鼠体内动物实验发现稳定干扰GSK-3β和采用氯化锂均可明显抑制骨肉瘤皮下移植瘤的生长。结论 GSK-3β在骨肉瘤中处于相对活化状态,可通过上调NF-κB转录活性调控骨肉瘤细胞增殖;靶向GSK-3β是骨肉瘤潜在的治疗新策略。     

华蟾酥毒基诱导骨肉瘤细胞凋亡的体外实验研究

 目的 研究华蟾酥毒基（cinobufagin）对多种骨肉瘤细胞系的增殖抑制和诱导凋亡作用,并探讨其相关机制。方法 不同浓度的华蟾素毒基分别处理骨肉瘤细胞系U2OS、MG63和SaO2后,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察不同骨肉瘤细胞系的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期的变化,细胞核荧光染色及Annexin V/ PI染色检测细胞凋亡,Western blot检测IAPs和Bcl-2家族凋亡相关蛋白凋亡相关蛋白Bax、cleaved-PARP、xIAP、cIAP-1、survivin及p65的表达。结果 MTT检测显示,华蟾酥毒基可明显抑制骨肉瘤细胞U2OS、MG63和SaO2的增殖,其抑制细胞增殖的作用呈剂量和时间依赖性,其对U2OS、MG63和 SaO2细胞的48 h IC50值分别为（104.83±16.96） nmol/L、（47.07±7.5） nmol/L和（136.72±10.08） nmol/L。100 nmol/L 华蟾酥毒基处理骨肉瘤细胞12 h后,流式细胞仪检测可见骨肉瘤U2OS、MG63和 SaO2的G₀/G₁期细胞比例下降,G2/M 期细胞比例增加,表明华蟾素毒基主要通过将细胞阻滞在G₂/M 期,以抑制骨肉瘤细胞的增殖。进一步Hoechst 33258细胞核染色发现,华蟾素毒基可诱导骨肉瘤细胞产生典型凋亡小体,Annexin V/ PI检测100 nmol/L 华蟾酥毒基作用48 h后,U2OS、MG63和 SaO2细胞凋亡率分别为33.6%±6.4%、36.4%±7.8% 及 29.3%±5.1%。表明华蟾酥毒基的抗骨肉瘤效果是通过诱导骨肉瘤细胞凋亡来实现。在探讨其诱导骨肉瘤细胞凋亡的相关机制中,通过Western blot检测发现其诱导凋亡的作用机制是通过上调IAPs和Bcl-2家族凋亡相关蛋白Bax、cleaved-PARP,下调xIAP、cIAP-1、survivin及p65蛋白来实现。结论 华蟾酥毒基可明显抑制骨肉瘤细胞株U2OS、MG63和 SaO2细胞增殖,阻滞细胞在G₂/M期,并诱导其凋亡,其诱导凋亡的作用机制为调节IAPs和Bcl-2凋亡相关家族蛋白的活性。     

硫化氢抑制顺铂致人骨髓间充质干细胞的损伤

背景：在使用顺铂进行化疗时,常因造血干细胞损伤造成严重的骨髓抑制,而目前临床上还没有一种有效的化疗细胞保护剂来减轻其不良反应。 目的：探讨硫化氢对顺铂致人骨髓间充质干细胞损伤的保护作用。 方法：应用硫氢化钠作为硫化氢的供体,用不同浓度的硫氢化钠与顺铂同时作用于人骨髓间充质干细胞48 h后,甲氮甲唑蓝法(MTT)检测细胞存活率,Hoechst33258染色检测细胞凋亡,Western blot检测蛋白的表达。 结果与结论：MTT检测发现顺铂可降低骨髓间充质干细胞的存活率,硫氢化钠可呈浓度依赖性的对抗顺铂对人骨髓间充质干细胞生长的抑制作用,0.5,1 mmol/L 硫氢化钠与20 mg/L顺铂共同作用人骨髓间充质干细胞48 h后会引起NF-κB(p65)上调和IκB-α的下调,1 mmol/L 硫氢化钠与20 mg/L顺铂在作用6 h后磷酸化蛋白激酶1/2明显上调。结果提示,硫化氢可能通过蛋白激酶-NF-κB信号通路来抑制顺铂致人骨髓间充质干细胞的损伤作用。