载脂蛋白E基因多态性与华法林维持剂量的相关性

目的:探讨载脂蛋白E基因(apolipoprotein E,apoE)多态性与个体间华法林维持剂量差异的关系.方法:采用聚合酶链反应/变性高效液相色谱技术,检测249例已获得华法林维持剂量患者的apoE基因型;比较不同基因型患者华法林维持剂量的差异.结果:249例患者中,基因型ε2/ε2,ε2/ε3,ε2/ε4,ε3/...     

9437例体检人群多肿瘤标志物蛋白芯片检测结果分析

肿瘤的早期发现和诊断对肿瘤的治疗和预后至关重要.肿瘤标志物的单项标志物检测在临床上已应用多年,但存在检出率低及费用贵的缺陷.多肿瘤蛋白芯片具有高通量、高速度、高灵敏度等特点[1],对多种标志物并行检测,增加了肿瘤检测的敏感性和特异性,尤其是对无症状人群的早期肿瘤筛查具有重要的意义.本文对我院2010年3月至2012年2月健康体检者的多肿瘤蛋白芯片检测结果分析如下.     

Sysmex CA-7000血凝仪的应用效果评价

目的了解Sysmex CA-7000全自动血凝仪(CA-7000仪)测定凝血机制的性能。方法按照国际血液学标准化委员会制定的评价内容,对CA-7000仪测定凝血酶原时间(PT)、部分活化凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原(Fbg)凝血四项的精密度、准确性、线性和携带污染率等进行实验评价。结果CA-7000仪测定PT、APTT、TT、Fbg的批内批间变异系数(CV)0.7%～2.3%,测定校正血浆误差绝对值为0.4%～4.0%,与Sysmex CA500全自动血凝仪(CA500仪)对比检测结果无统计学差异(P>0.05),线性相关分析r为-0.772～0.999,携带污染率为0～1.5%。结论CA-7000仪检测凝血四项的精密度好、准确度高、线性及交叉污染率达到实验室要求,适合于临床止凝血功能检测分析。     

VKORC11173C>T基因多态性与华法林稳定剂量关系的研究

目的:探讨VKORC1 1173C>T基因多态性位点与个体间华法林稳定剂量差异的关系.方法:采用实时荧光PCR结合熔解曲线分析的方法,检测323例已获得华法林稳定剂量患者的VKORC1 1173C>T位点基因型;比较不同基因型患者的华法林稳定剂量的差异.结果:贵州汉族和少数民族的VKORC1 1173C>T基因型和等位基因频率分布差异无统计学意义.323例患者中,VKORC1 1173C>T基因型TT、TC和CC分别有253例、66例和4例,各占78.3%、20.4%和1.2%,等位基因T和C的频率分别为88.5%和11.5%.在VKORC1的3种基因型中,TT基因型组剂量最低(2.58±0.78)mg/d,与TC组(4.25±1.35)mg/d和CC组(4.53±0.94)mg/d比较有显著性差异(P<0.001).结论:VKORC1 1173C>T基因多态性是影响华法林个体间用量差异的一个主要遗传因素,对患者的VKORC1 1173C>T位点进行分型,可作为华法林个体化用药的一个重要依据.     

贵州地区α-地中海贫血基因诊断

目的:探讨α-地中海贫血(α-地贫)基因诊断的临床应用价值。方法:采用单管多重PCR技术及反向点杂交技术,对95例可疑α-地贫患者进行基因分析。结果:95例患者中检出37例α-地贫,检出率为38.9%。共检出6种突变基因型,其中--SEA/αα占56.8%,-α3.7/αα占27.0%;检出的4种突变等位基因按发生频率由大到小排列为:--SEA、-α3.7、-α4.2和-αCS,其中--SEA占60.0%,-α3.7占30.0%。结论:基因诊断是确诊α-地贫准确可靠的方法,贵州地区α-地贫基因突变类型以缺失型为主。     

贵州地区呼吸道感染儿童中肺炎支原体检测与分析

目的探讨肺炎支原体(MP)DNA及MP抗体联合检测的临床诊断价值。方法收集临床疑似MP感染的268例患儿样本,凝集法检测血清MP-抗体、实时荧光定量PCR法检测MP-DNA。结果 268例病例中65例确诊为MP肺炎,两种方法灵敏度分别为70.77%、87.69%,差异有统计学意义(P<0.05);特异度分别为95.07%、96.06%,差异无统计学意义。结论对疑似MP感染患儿同时进行抗体和DNA检测,可有效避免漏检。     

灭蚊真菌卡地腐霉产生游动孢子所需条件的研究

目的：观察卡地腐霉产生游动孢子所需的环境条件。方法：以卡地腐霉经诱导产生的游动孢子数量为指标，观察不同条件对其产生游动孢子的影响，确定该真菌产生游动孢子所需的最适条件。结果：卡地腐霉产生游动孢子的适宜温度范围为10-30℃，最适温度为24—26℃；适宜产孢的蒸馏水pH值范围为5—12，最适pH值为9—11；8d的培养物产孢量最多；菌块与蒸馏水的比例为1：40时产孢最多；三种光照周期对卡地腐霉的产孢影响不大，紫外线对产孢有抑制作用；NaCl、(NH4)2S04、蛋白胨和葡萄糖对游动孢子的产生有较强抑制作用，产孢能力对尿素的耐受性极大。结论：本观察所得资料对卡地腐霉的基础研究和应用都有重要价值。     

阳离子脂质体介导肽核酸转染K562细胞的研究

目的 优化阳离子脂质体介导肽核酸(PNA)转染K562细胞的条件.方法 以阳离子脂质体lipofectamine 2000为载体,将标记有FITC荧光基团的PNA转染K562细胞,在荧光显微镜下观察并计算其转染效率,采用Cell Counting Kit(CCK-8)检测其细胞毒性.应用正交试验筛选出最佳的PNA和脂质体的用量及比例,并优化稀释用培养基血清浓度,以获得最优的转染效果.结果 以2.5× 105/mL～3×105/mL的细胞密度接种,100 μL/孔的培养基中加入PNA 6.25 pmol,PNA与脂质体的体积比为1∶3.5,稀释用培养基未加胎牛血清时,细胞转染效率和细胞毒性最佳,转染效率为87.2％,细胞存活率(RGR)为94.1％.结论 PNA可通过阳离子脂质体转染进入K562细胞,优化条件后得到的细胞转染效率和细胞存活率能够满足基因表达研究的实验要求.     

X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良家系SEDL基因突变及基因诊断

目的 确定一个X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良(X-linked spondyloepiphyseal dysplasia tarda,SEDL)家系的基因突变类型;建立一种快速基因诊断方法.方法 采用体格检查、影像学检查及家系分析进行临床诊断.针对SEDL基因的第3～6外显子及其侧翼序列设计4对引物,建立基于PCR的变性高效液相色谱技术(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)快速基因分型方法.常规酚-氯仿法从该家系3代18名成员的外周血中提取基因组DNA,经PCR/DHPLC分析,筛查出SEDL基因突变所在的片段,对该片段进行序列分析以确定突变位点及类型.结果 DHPLC分析发现该家系的SEDL基因突变位点在第4外显子片段,序列分析证实为c.218C》T突变,导致氨基酸序列S73L改变.在该家系的18名成员中,3例男性患者,5例女性肯定携带者和2例未婚女性携带者均带有该突变,其余表型正常的8名成员中未检测到这一突变.各成员的DHPLC峰型所代表的基因型与表型结果相吻合.结论 首次报告中国人SEDL基因c.218C》T突变,丰富了中国人SEDL基因的突变谱.采用的技术快速、可靠,能对SEDL进行快速基因分型和产前诊断.