细菌代谢产物中小分子有机酸的高效毛细管电泳分析

目的建立高效毛细管电泳法测定甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、乳酸的分析方法,测定细菌代谢产物中的小分子有机酸。方法采用毛细管：Beckman coulter未涂层50μm×60cm（有效长度50cm）;缓冲溶液：pH10．5的10mmol／L（含0．5mmol／LCTAB）的硼砂溶液;检测波长214nm,分离电压-20kV,进样压力为1．0psi,进样时间为10s。结果4min内甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、乳酸得到基线分离。线性范围分别为：甲酸3．8～30．7mg／L（r=0．9971）;乙酸3．3～52．5mg／L（r=0．9961）;丙酸3．1～49．5mg／L（r=0．9993）;丁酸3～48mg／L（r=0．9925）;乳酸7．5～60．5mg／L（r=0．9995）。平均回收率分别为：甲酸99．29％（RSD=0．67％）;乙酸98．90％（RSD=1．36％）;丙酸99．65％（RSD=0．65％）;丁酸99．35％（RSD=0．42％）;乳酸98．06％（RSD=1．44％）。结论该方法简单、快速、准确,可用于细菌发酵液中代谢产物有机酸的检测。     

抗氯霉素抗体可变区基因的克隆与序列分析

[目的]克隆并分析抗氯霉素单克隆抗体(抗CAPmAb)的轻、重链可变区基因VL和VH. [方法]从分泌抗CAP mAb的杂交瘤细胞株4D10中提取总RNA,利用RT-PCR技术和一系列简并引物扩增VL和VH基因,扩增产物克隆于pMD18-T后测序,利用VBASE2数据库进行比对分析. [结果]有多对引物扩增到VL或VH基因,但同一基因的不同引物扩增到的序列相同.VL和VH基因长度分别为342 bp和357 bp,分别编码114个和119个氨基酸残基.编码产物均具有4个FR区、3个CDR区和2个特征性半胱氨酸残基,符合典型的KABAT结构特点,分别属于IGKV1亚群和IGH-V3609VH8家族.所克隆序列已被GenBank收录,序列号分别为FJ477893和FJ477894. [结论]成功克隆到抗CAPmAb的VL和VH基因,为进一步构建氯霉素残留检测用基因工程抗体打下了基础.     

McAb共刺激PBLs介导肝癌细胞凋亡

用ＭｃＡｂ，抗ＣＤ３，ＣＤ３＾＋ＣＤ２８和ＣＤ２８＾＋ＣＤ８０激活健康人ＰＢＬｓ，作用于肝癌细胞，透射电镜观察其超微结构，发现除抗ＣＤ３可引起部分淋巴细胞诱导性凋亡外，其他组都可介导肝癌细胞凋亡。     

TCR Vβ7.1基因对IL-12基因修饰乳腺癌细胞的识别和杀伤作用

目的：探讨ICR Vβ7．1基因与IL-12基因在乳腺癌细胞株MCF—7／S识别和杀伤中的效应机制和相互作用。方法：用脂质分别包裹TCR Vβ7．1基因和IL-12基因并转染健康人PBMC和乳腺癌细胞株MCF—7／S，流式细胞仪检测TCR Vβ7．1基因表达，ELISA法检测IL-l2基因在MCF—7／S中的表达及淋巴细胞-肿瘤细胞共培养上清中IFN—γ和IL-4水平，改良MTT法检测TCR Vβ7．1基因修饰PBMC对IL-12基因转染前后MCF—7／S的杀伤活性。结果：TCR Vβ7．1基因和IL-l2基因在PBMC和乳腺癌细胞MCF—7／S中稳定表达；ELISA法检测提示IL-12基因修饰前后肿瘤细胞。淋巴细胞共培养上清中IFN—γ和IL-4水平有显著性差异；细胞毒活性检测表明IL-12基因修饰可明显增强TCR Vβ7．1基因对乳腺癌细胞株MCF-7／S的杀伤作用。结论：TCR Vβ7．1基因修饰CTL及IL-l2基因修饰乳腺癌细胞株共培养，提高了CTL的杀伤作用，说明TCR识别基因与杀伤基因在抗肿瘤效应中具有协同作用。     

共刺激信号在抗肝脏肿瘤免疫中作用的研究

目的：研究共刺激信号在肮肝脏肿瘤免疫中作用。方法：分析经anti-CD3McAb和anti-CD28McAb协同共刺激，并与肝脏肿瘤细胞（HepG2-2215细胞株）共同孵育的人外周血淋巴细胞（PBLs）。结果：发现其TCRVβ基因表达呈限制性，初步筛选出识别肝脏肿瘤抗原的TCRVβ基因亚家族。结论：有针对性地在体外大量扩增表达Vβ3、Vβ14的T细胞并回输给该肝脏肿瘤患者，可能比非特异性的LAK或CD3AK更有疗效。     

浅析心理疗法在骨伤治疗中的应用

心理疗法 ,是指通过医生的语言和行动来改善病人的精神状态 ,提高病人对疾病的认识 ,解除其思想顾虑 ,树立战胜疾病的信心 ,而达到加快愈合目的的一种治疗方法。骨伤之疾 ,多由于突然外伤所致 ,对病人的精神损害较大 ,部分病人不能承受伤害所带来的心理打击。临床上 ,骨伤科医师对病人所伤之处的皮肉、筋骨、神经、血管等治疗极为重视 ,往往忽视病人求医过程中的心理变化 ,缺乏正确的诱导 ,从而影响病变的康复 ,甚则加重病情 ,现就笔者的临床体会介绍如下 ,以供探讨。1　心理活动乃脏腑功能活动的外在表现心理活动与脏腑气血息息相关 ,其产…     

中药治疗的烧伤创面细菌培养前期质量控制研究

目的探讨创面两种不同的标本采集方法和接种时间对接受中药创面治疗的同一烧伤创面细菌培养的影响。方法采用从创面表面分泌物和创面坏死组织两种方法从本组46例接受中药治疗的深度烧伤患者的同一创面同一时间采集标本,每组标本按采集后及时和后1 h进行接种,进行相同条件的细菌培养实验,比较各组革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌检出率。获取的数据用SPSS-12软件进行分析处理。结果 （1）从坏死组织中采集标本组革兰氏阳性球菌检出率高于从创面分泌物采集标本组,其差异具有统计学意义,P〈0.05;从坏死组织中采集标本组革兰阴性杆菌检出率略高于从创面分泌物采集标本组,其差异无统计学意义P〉0.05）。（2）从创面表面分泌物采集标本及时接种组革兰阳性球菌检出率高于后1 h接种组,其差异有统计学意义（P〈0.05）,其余各组差异无统计学意义。结论从创面坏死组织采集标本且采集后及时接种较从创面分泌物采集标本进行细菌培养具有更高的敏感性。     

手法结合理疗治疗第三腰椎横突综合征45例观察

第三腰椎横突综合症,又称腰背筋膜损伤,在急慢性腰腿痛中最常见。本组45例经骨科确诊建议理疗,经单纯理疗治疗数次效果不佳。改用于理疗后施行手法治疗,收到了令人满意的效果,现小结如下:一般资料 45例中男性30例,女性15例。门诊35例,住院10例。发病在二月以内的定为急性腰痛共13例,2个月以上的定为慢性腰痛共32例。病     

CpG ODN刺激PBMC后作用于肝癌细胞BEL-7402杀伤活性的检测

目的 :探讨合成含CpG基序的寡核苷酸 (CpGODN)在肿瘤免疫治疗中的研究。方法 :将CpGODN刺激体外培养的人外周血单个核细胞 (PBMC)后作用于肝癌细胞株 (BEL 74 0 2 ) ,采用MTT法检测其杀伤活性。结果 :加CpGODN组较单独PBMC组杀伤活性明显增高 (P <0 .0 5 )。结论 :CpGODN可刺激PBMC增殖 ,提高PBMC的杀伤活性 ,从而增强机体的特异性和非特异性免疫效应     

HLA-A2限制性Survivin点突变肽诱导特异性抗肝癌CTL反应

目的 探讨HLA-A2限制性Survivin点突变抗原肽体外诱导CTLs的抗肝癌作用.方法 生物信息学软件BIMAS和SYFPEITHI用来鉴定点突变的HLA-A2限制性Survivin抗原九肽;流式细胞术检测突变肽与HLA-A2分子结合效率;肽体外刺激肝癌患者腹水来源的肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)诱导反应性CTLs,用流式细胞术及ELISA检测反应性CTLs释放IFN-γ情况;肽诱导的CTLs与肝癌细胞系HepG2及BEL-7402共孵育,CytoTox 96(R)非放射性细胞毒性检测法检测对肿瘤细胞的裂解情况,倒置相差显微镜观察肝癌细胞形态学变化.结果 生物信息学分析筛选出与MHC分子结合效率评分显著提高的点突变Survivin抗原九肽Sur79M2 (KMSSGCAFL),流式细胞术检测证实负载Sur79M2的T2细胞,HLA-A2表达率显著提高,经Sur79M2体外刺激诱导的CTLs与靶细胞共孵育后能释放较高水平的IFN-γ,Sur79M2诱导的CTLs能通过HLA-A2限制性机制有效杀伤肝癌细胞系HepG2,对HLA-A2阴性的BEL-7402细胞无明显杀伤作用.结论 点突变肽Sur79M2能在体外诱导反应性CTLs产生,该CTLs能以HLA-A2限制性方式有效杀伤肝癌细胞系.