肿瘤患者偏移的T细胞TCRBV表达谱在自体CIK细胞中的恢复

目的 研究肿瘤患者自体PBMC经体外诱导培养的CIK细胞群TCRBV亚家族表达的变化.方法 Ficoll密度梯度离心法分类人体外周血单核细胞(PBMC),经IFN-γ、OKT-3以及IL-2诱导培养,Trizol试剂提取总RNA,RT-PCR半定量分析24个TCRBV亚家族表达情况,流式分选平台分选CD3+ CD8+细胞和CD3+ CD56+细胞亚群.结果 诱导培养后的CIK中,分化的CD3+ CD56+细胞亚群比例占12.6％～41.7％.PBMC中弱表达或缺失的TCRBV亚家族,在CIK中上调或恢复表达.CIK细胞群中,CD3+CD8+细胞和CD3+ CD56+细胞亚群克隆组成无明显差异.结论 肿瘤患者自体PBMC体外诱导培养CIK细胞后,部分表达偏移的TCRBV亚家族能恢复表达,表明部分受损或被抑制的T细胞克隆在CIK培养中被激活并增殖.     

5型腺病毒载体对人T淋巴细胞的转染及细胞毒性分析

 目的:利用5型腺病毒载体转染人T淋巴细胞,对其转染T淋巴细胞的效率以及细胞毒性进行分析。方法:选取T淋巴瘤Jurkat细胞及原代T细胞,腺病毒按感染复数(multiplicity of infection, MOI)为20、50、100、200和400对其转染,转染48 h后利用流式细胞术检测转染效率;选取腺病毒转染后的不同时点,利用碘化丙啶染色法分析转染对于细胞周期的影响;利用Annexin V/7-AAD染色法分析转染诱导细胞凋亡情况;利用台盼蓝染色计数法分析转染对活细胞数目的影响。结果:5型腺病毒载体转染T淋巴瘤的效率最高,转染效率随着MOI值的增大而增加;CD8+ T细胞和CD4+ T细胞的转染效率大致相同,T细胞经刺激活化后,CD8+ T细胞的转染效率下降;病毒转染未导致明显细胞凋亡;病毒转染对细胞周期与活细胞数目没有显著影响。结论:5型腺病毒载体转染T细胞呈现较低细胞毒性。     

补血方协同转染TCRVβ7.1 PBMC对肿瘤化疗造成骨髓抑制的缓解机制

目的:探讨补血方协同转染TCRVβ7.1 PBMC对肿瘤化疗造成骨髓抑制的缓解机制.方法:采用体外细胞实验建立化疗损伤模型,利用MTT法测定肿瘤细胞的死亡率,利用ELISA法检测造血相关细胞因子的分泌情况.结果:与对照组相比补血方与转染TCRVβ7.1 PBMC组能够明显促进粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的分泌,并且加PBMC组与单纯化疗药组相比能够明显抑制肿瘤的生长.结论:补血方协同转TCRVβ7.1 PBMC不仅能够对肿瘤细胞起到杀伤作用,且对化疗药所引起的骨髓抑制有一定的缓解作用.     

重组SARS-CoV S1蛋白抗原表位分析及抗原性检测

目的对严重急性呼吸系统综合征冠状病毒(SARS-CoV)刺突蛋白(Spike,S)S1段进行原核重组表达,并检测表达产物的抗原性。方法对S1中的HLA抗原表位进行预测分析,根据分析结果选定用于重组表达的区段,利用pET21b载体进行原核表达,将产物纯化后利用SARS抗血清进行抗原性检测。结果抗原表位分析表明,S1中包含有多个能够被HLA分子有效提呈的抗原表位,综合考虑表位肽的分布、重组表达的效率、重组蛋白的空间构象以及引物设计的优化等因素,选取S1中的关键区域259~565 aa进行原核重组表达,得到了包涵体形式的重组蛋白,经过纯化和复性,获得了纯度较高的可溶性S1蛋白;用SARS抗血清对此重组蛋白进行免疫学鉴定,表明该蛋白具有SARS特异的抗原性。结论重组表达的S1蛋白具有较强的抗原性,为进一步的疫苗研究和抗体筛选奠定了基础。     

Survivin启动子介导的胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因的抗肿瘤研究

目的 探讨Survivin启动子介导的CD/5-FC自杀系统的抗肿瘤效果.方法 利用Survivin启动子替换pEGFP-N1载体上的巨细胞病毒(CMV)启动子,构建重组表达载体pSurP-EGFP,通过报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达确定Survivin启动子的特异性;将酿酒酵母的胞嘧啶脱氨酶(CD)基因克隆在pSurP-EGFP中,构建成重组载体pSurP-CD,转染肿瘤细胞后利用毛细管电泳仪检测前药5-氟胞嘧啶(5-FC)的转化效率,同时分析肿瘤细胞的凋亡.结果 GFP的表达表明Survivin启动子具有较好的肿瘤靶向性;毛细管电泳检测表明CD能够有效地将5-FC转化为5-FU,显微镜观察和流式分析表明了Survivin启动子介导的CD的抗肿瘤效果.结论 Survivin启动子能有效地介导CD自杀基因的表达,具有较好的靶向性抗肿瘤效果.     

创新课程生物技术药物药动学的设置

根据生物技术药物的发展趋势和现状，分析开设生物技术药物药动学这一创新课程的必要性，提出该课程理论课教材和教学内容选择的一些看法和建议，介绍包括药物动力学实验在内的基因工程制药综合性实验课的实施和意义。     

抗乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原McAb的特性分析与初步应用

目的：通过对抗乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原单克隆抗体的特性分析，研制检测乙型副伤寒沙门菌的ELISA法，对副伤寒传染病进行早期诊断。方法：用杂交瘤技术制备单克隆抗体，并进行鉴定，用双抗体夹心ELISA建立检测乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原ELISA方法，对临床标本进行检测。结果：7株抗乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原的单克隆抗体IgG15株、IgG2a1株、IgG2b1株，均不与相关沙门菌、肠道菌反应，用菌体免疫制备的MeAb 3B5、3G12、7H1、2B5，与乙型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原反应，而用纯化的鞭毛抗原免疫制备的单克隆抗体1F4、5D3、3H7，只与乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原，385与7H1识别同一抗原表位，3B5、7H1与3G12、2B5相互识别不同抗原表位，1F4、5D3、3H7相互识别不同抗原表位。3B5包被、过氧化物酶（HRP）标记3G12建立双抗体夹心ELISA，鞭毛抗原、菌体的最低检出量分别为5ng／ml、10^5个／ml。检测159份献血员血清及70份发热待查血清为阴性，1份发热待查血清、9份血培养阳性患者血清为阳性。结论：用纯化的鞭毛抗原免疫制备的单克隆抗体不适于检测乙型副伤寒沙门菌，菌体免疫制备的单克隆抗体特异性强，建立的双抗体夹心ELISA法，可对乙型副伤寒进行早期诊断。     

3-氯丙二醇和2,3-氧丙醇合并灌喂九个疗程和停药120天后对大白鼠性腺器官的生化观察

本实验以合并3-氯丙二醇和2,3-氧丙醇(5+75mg/kg/d×2)给大鼠9个疗程,停药120天,共历程210天。观察其睾丸及附睾头、精囊某些生化成份的影响,其结果表明实验组之糖蛋白、RNA、DNA,含量有不同变化,停药120天未能完全恢复。停药120天后,乳酸脱氢酶活性及其同功酶酶谱的分析表明,能量的供能未能恢复到对照组的水平。从酶谱来看,药物所致的供能方式受损伤,因器官不同而有不同,并讨论了药物所致的不育,可能与能量供给有关。     

儿茶素单体EGCG与ECG体外抗人肝癌细胞BEL-7402的作用

目的研究儿茶素单体表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和表儿茶素没食子酸酯(ECG)抗人肝癌细胞BEL-7402的作用。方法形态学观察EGCG、ECG作用后BEL-7402细胞的生长;MTT法检测EGCG、ECG对BEL-7402细胞生长的抑制;流式细胞术(FCM)检测EGCG、ECG诱导BEL-7402细胞凋亡水平;RT-PCR检测增殖相关信号分子Gli2和凋亡受体Fas的表达水平。结果 EGCG、ECG均能以时间依赖和浓度依赖的方式抑制BEL-7402细胞生长,并诱导细胞凋亡。EGCG对BEL-7402细胞的生长抑制和诱导凋亡作用均较ECG强。EGCG和ECG均能下调Gli2的表达,但对Fas表达无影响。结论EGCG抗人肝癌BEL-7402细胞作用较ECG强。     

中西医综合治疗47例脑梗塞的临床观察

动脉硬化性脑梗塞是脑血管疾病中最常见的一种。它在很大程度上影响患者的生活质量,部分病人可因梗塞面积大或并发出血、感染、心肌梗塞等而危及生命。本文将在我院中西病房1995年收治的47例脑梗塞病人治疗情况作一小结。 1 资料与方法 1.1 一般资料 自1995年1月至12月,共收治脑梗塞病人47例(均经头颅CT检查证实)。其中男性23例,女性24例。年龄最大84岁,最小36岁,平均年龄60.19岁。大多在秋、冬季发病。其中合并脑出血1例,脑萎缩25例,冠心病29例,糖尿病1例,颈椎病3例,胆囊炎5例,血小板减少1例。