大鼠β-防御素-2基因气道转染增强肺抗感染防御功能的研究

β 防御素体外试验显示具广谱抗菌活性 ,本研究应用转基因方法评估其体内抗菌作用。构建大鼠 β 防御素 2 (rBD2 )重组质粒 pBK CMV$CrBD2和 pCD NA 3.1 Myc His( + ) rBD2 ,通过脂质体包裹的方法将重组质粒经气管滴入 ,检测其在气管和肺组织表达情况 ,并应用肺组织匀浆上清菌落计数法检察对绿脓杆菌的肺清除率。结果显示在基因转染大鼠的气管和肺组织内均检测到rBD2 His融合蛋白基因mRNA和蛋白的表达 ,说明脂质体包裹的重组 β 防御素 2pBK CMV$CrBD2质粒可有效转染气道上皮组织。肺细菌清除率实验显示构建重组质粒 p…     

采用Viatorr覆膜支架行经颈静脉肝内门体分流术

目的评价采用Viatorr覆膜支架行经颈静脉肝内门体分流术(TIPS)治疗门静脉高压并发症的疗效与安全性。方法回顾性分析8例接受Viatorr覆膜支架TIPS治疗的肝硬化门静脉高压症患者的资料。术后进行随访,复查上腹部CT,以评价TIPS疗效。结果对8例患者均成功手术,均采用直径8mm、覆膜段长度50~80mm的Viatorr覆膜支架建立肝内分流道。对其中1例合并门静脉海绵样变的患者于门静脉端置入8mm×40mm的E-Luminexx裸支架1枚;1例患者因肝静脉端狭窄于肝静脉端置入8mm×40mm的Fluency覆膜支架1枚。术后患者门静脉压力由术前的[33.08(29.32,40.22)]mmHg降为[23.31(21.43,26.51)]mmHg,差异有统计学意义(Z=-2.52,P=0.012)。术后随访1.1~7.7个月,所有患者均存活,均未再发生门静脉高压相关并发症。术后2例患者发生肝性脑病。术后1~7.7个月复查示所有患者TIPS分流道通畅。结论对国内肝硬化门静脉高压症患者应用Viatorr支架行TIPS治疗安全、有效。     

生长激素、张应力对兔下颌髁突软骨细胞增殖活性及功能的影响

下颌髁突软骨在颅面的生长发育中起着重要作用。功能矫形治疗中 ,下颌髁突软骨的生长改建一直是国内外学者关注的焦点。大量体内实验证明 ,功能矫形前伸下颌后 ,颞下颌关节及下颌髁突周围组织结构的生物力学环境发生改变 ,生长期动物下颌髁突软骨内的激素和生长因子 (如雌激素、胰岛素、睾酮、甲状腺素、甲状旁腺素、IGF 1、TGF β,PGE2等 )的含量和分布发生改变 ,髁突软骨细胞增生 ,下颌骨生长 ,达到功能矫形治疗错畸形的目的。大鼠下颌髁突软骨细胞体外培养研究发现 ,静张应力、压应力、bFGF、IGF l、TGF β以及静张应力与TGF β联合作用 ,在一定的力值范围、一定的时间内可以促进髁突软骨的增殖活性 ,且静张应力联合TGF β共同作用时的促增殖效应比单独使用TGF β更强 ,但随作用时间延长 ,逐渐表现出抑制作用。而外源性生长激素 (GH)及张应力能否促进体外培养兔下颌髁突软骨细胞的增殖活性及分泌功能 ,生长激素与张应力联合应用是否具有协同促进作用 ,目前尚未见报道。本研究通过兔下颌髁突软骨细胞体外培养 ,采用四点弯曲细胞力学加载仪 ,对细胞施加不同浓度的外源性生长激素和张应力 ,使用流式细胞仪和免疫组织化学方法 ,探讨生长激素和张应力在不同时间段对下颌髁突软骨细胞增殖活性及分     

EGFRvⅢ与S100A9在人脑胶质瘤中的表达、相关性及其与预后的关系北大核心CSCD

目的：探讨表皮生长因子受体变异体Ⅲ（epidermal growth factor receptor variantⅢ,EGFRvⅢ）和S100钙结合蛋白A9（S100 calcium binding protein A9,S100A9）在人脑胶质瘤组织中的表达水平及其相关性,以及2种蛋白表达与胶质瘤预后的关系。方法：收集重庆医科大学第二附属医院2008年1月-2015年4月收治的110例经病理确诊的新发胶质瘤标本及其临床资料。同时,收集10例非肿瘤脑组织作为对照。采用免疫组织化学法检测胶质瘤标本和对照脑组织中EGFRyⅢ和S100A9蛋白的表达水平,运用Spearman等级相关分析法分析蛋白表达与胶质瘤患者临床病理因素的相关性。随访其中75例胶质瘤患者,实访67例,采用Kaplan—Meier法对随访资料进行生存分析。结果：低级别胶质瘤（Ⅰ～Ⅱ级）中EGFRvⅢ的中高表达率为20．00％,而高级别胶质瘤（Ⅲ～Ⅳ级）中EGFRvⅢ的中高表达率为38．00％,两者差异有统计学意义（P〈0．001）;低级别胶质瘤（Ⅰ～Ⅱ级）中$100A9的高表达率也明显低于高级别胶质瘤（Ⅲ～Ⅳ级）中S100A9的高表达率（11．67％vs66．00％,P〈0．001）。EGFRyⅢ和S100A9蛋白表达水平之间呈明显的正相关性（rs=0．785,P〈0．001）。Kaplan—Meier生存分析表明,EGFRvⅢ和S100A9蛋白均表达阳性的胶质瘤患者的预后较差（P=0.002）。结论：EGFRvⅢ和S100A9蛋白均随着胶质瘤恶性等级升高而表达增强。联合检测EGFRvⅢ和S100A9蛋白水平可以有效判断胶质瘤患者的恶性程度及预后,有助于为胶质瘤患者制定个体化的治疗方案。     

HIF-1α反义寡核苷酸对肝癌细胞增殖凋亡的影响及机制

目的：本研究通过应用 HIF-1α反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide,ASODN）处理 SMMC-7721肝癌细胞,观察其对 SMMC-7721肝癌细胞增殖的作用和对细胞周期及凋亡率的影响及其机制。方法肝癌细胞系SMMC-7721分对照组和试验组。对照组细胞常规培养,试验组细胞施加 HIF-1α的 ASODN 干预,设浓度梯度和时间梯度。检测不同药物浓度、不同时间对 SMMC-7721细胞的增殖的作用及对细胞周期和凋亡率的影响。对 bcl-2、bax、surviving mRNA 表达产物相对定量,并对 SMMC-7721细胞胞浆 bcl-2、bax、survivin 蛋白进行相对定量分析。结果与对照组相比,各处理组 OD 值均有显著下降,细胞数量降低,且各实验组相比呈明显的时间-剂量依赖效应,差异有统计学意义（ P <0.05）。不同浓度 HIF-1α的 ASODN 处理细胞后,均可使各处理组 G0/ G1期细胞增多,S 期细胞减少,且呈时间-剂量依赖效应,差异有统计学意义（ P <0.05）。不同浓度 HIF-1α的 ASODN 处理细胞不同时间后,与对照组相比,各实验组 bcl-2 mRNA 和 survivin mRNA 表达均有显著下降,差异有统计学意义（ P <0.05）。而 bax 的 mRNA无明显变化趋势（ P >0.05）。不同浓度 HIF-1α的 ASODN 处理细胞不同时间后,与对照组相比,各实验组 bcl-2和survivin 的蛋白表达显著下降,bax 的蛋白表达显著增加,差异有统计学意义（ P <0.05）。结论 HIF-1α的 ASODN可以将 SMMC-7721肝癌细胞株阻滞于 G0/ G1期,影响细胞周期进程,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。HIF-1α促进增殖抑制凋亡的可能机制是上调肝癌细胞 Survivin 和 bcl-2的表达,下调 bax 的表达。针对 HIF-1α抑制剂的应用为肝癌的治疗提供了新思路。     

功能矫形前伸大鼠下颌后翼外肌胰岛素含量变化的定量研究

目的：了解功能矫形前伸大鼠下颌后胰岛素对翼外肌适用性改建的作用。方法：采用放射免疫分析技术分别检测实验组和对照组大鼠翼外肌内胰岛素的含量。结果;功能矫形前伸下颌后,生长期大鼠外肌内胰岛素含量增加。结论：胰岛素在功能矫形前伸大鼠下颌后翼外肌的适应性改建中有重要作用。     

Frnkel矫治器治疗早期骨性Ⅱ类错的八因素初步分析

目的 :探讨安氏 类 1分类骨性错经 FR- 、 型矫治器治疗前后八因素变化。方法 :对 17例安氏 类 1分类骨性错患者经 FR- 、 型矫治器治疗前后进行 X线头影测量 ,分析对比治疗前后八因素的改变。结果 :FR矫治器可促进髁突的前下生长 ,均使下颌体、下颌支增长 ,颅底角减小以及上颌骨向前旋转 ,有利于 类错的矫治 ,但该矫治器不能很好地控制上颌骨的矢状向和垂直向的生长发育 ,以及后部齿槽高度的生长。结论 :FR矫治器最适于治疗上颌发育基本正常而下颌发育不足的 类患者 ,不宜用于上颌发育过度和垂直生长型的患者。     

大鼠β-防御素rBD-1基因在皮肤和肾脏固有表达

设计大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ｃＤＮＡ序列一对特异引物：Ｒ１５′→３′ＡＣＴＣＴＧＧＡＣＣＣＴＧＡＣＴＴＴＣＡＣＣＧ;Ｒ２５′→３′ＣＣＣＴＴＧＣＴＴＧＴＣＣＴＴＴＡＴＧＴＣＣ。根据大鼠β－ａｃｔｉｎｃＤＮＡ序列设计一对阳性对照特异引物：Ｂ１５′→３′ＡＧＣＴＧＡＧＡＧＧＧＡＡＡＴＣＧＴＧＣＧ;Ｂ２５′→３′ＧＴＧＣＣＡＣＣＡＧＡＣＡＧＣＡＣＴＧＴＧ。引物由Ｇｉｂｃｏ公司合成。从Ｗｉｓｔａｒ大鼠皮肤、肾脏、气管、子宫颈、膀胱、小肠、脾脏、骨骼肌、骨髓及腮腺组织中提取总ＲＮＡ,行ＲＴ－ＰＣＲ扩增…     

人防御素cDNA重组真核表达质粒的构建

哺乳动物防御素（ｄｅｆｅｎｓｉｎ）是分子量为３－５～４－５ｋＤ的抗菌肽,具有广谱抗微生物活性,包括抗革兰氏阳性和阴性菌、霉菌、包膜病毒等。依据其分子结构,分为α－和β－防御素两个亚家族。在人类已发现６种α－防御素,即从中性粒细胞胞浆颗粒中发现的ＨＮＰ－１到ＨＮＰ－４,以及小肠Ｐａｎｅｔｈ细胞产生的ＨＤ５和ＨＤ６。β－防御素最早分别在牛白细胞和小牛气管、舌上皮细胞中发现,在人类发现有两种,即ｈＢＤ－１和ｈＢＤ－２。为了开展防御素基因转染上皮细胞以增强粘膜抗感染能力的实验研究,本文构建了ＨＮＰ－１和…     

人气管粘膜上皮细胞抗菌多肽探讨

用酶低温消化获得的人气管上皮细胞,气-液界面无血清培养,细胞呈现复层生长,细胞角蛋白免疫组化染色呈阳性反应,可确认为上皮细胞。琼脂糖弥散法显示培养细胞表面分泌物对绿脓杆菌有明显的抗菌活性。随底层培养基NaCl浓度的增高,杀菌环直径逐渐减小。当NaCl浓度分别为0、20、40、80、160、320mmol／L时,