经树突状细胞递呈的HBcAg特异性细胞毒T淋巴细胞的体外研究

目的　从人的外周血树突状细胞 (DC)的抗原递呈方面研究慢性乙型肝炎的发病机制 ,并诱导出针对HBcAg特异性的细胞毒T淋巴细胞 (CTL)。方法　取健康人DC和患者DC ,比较两组的抗原递呈功能是否存在差异。以HBcAg体外冲击致敏DC ,与自体T淋巴细胞共育 ,诱导出HBcAg特异性CTL ;以HepG2细胞为对照靶细胞 ,转染HBVDNA的HepG2 2 15细胞为靶细胞 ,分别测定CTL在效靶比为 2∶1、6∶1和 2 0∶1时对HepG2细胞的非特异性杀伤率及对HepG2 2 15细胞的特异性杀伤率 ,并比较患者组与正常组特异性杀伤率的差异。结果　患者DC的抗原递呈功能(10 99.2 6 7± 2 39.12 ,1374 .8± 36 4 .15 5 ,2 717.78± 15 89.72 )较健康人 (314 7.933± 72 6 .5 7,384 3.0 0 0±10 6 0 .85 ,5 4 86 .86 7± 1790 .6 4 )弱 ;健康组与患者组CTL对HepG2各效靶比的非特异性杀伤作用差异无显著性。健康组与患者组CTL对HepG2 2 15的特异性杀伤作用差异有显著性 ;患者组CTL的活性 (7.1± 4 .33,15 .6 8± 3.3,2 7.6 6± 4 .5 9)较健康组 (2 0 .76± 6 .0 8,33.97± 8.0 0 ,4 9.6 3± 9.4 8)弱。结论　用HBcAg体外负载患者DC ,能诱导出抗原特异性的CTL ,这些CTL能特异性地杀伤相应靶细胞。     

含脐血MSCs体系扩增后的脐血重建NOD/SCID小鼠造血的研究

[目的]探讨含人脐血(umbilical cord blood,UCB)来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)联合造血生长因子(hematopoietic growth factors,HGFs)体系扩增后的脐血造血细胞在NOD/SCID小鼠体内植入及重建小鼠造血的能力.[方法]①用含女性胎儿脐血MSCs(UCBMSCs)及HGFs组合的无血清扩增体系体外扩增男性新生儿UCB CD34 细胞.②收获扩增第6天的UCB细胞,经尾静脉移植给亚致死量照射后的雌性NOD/SCID小鼠.③动态观察移植后小鼠生存情况及外周血象的恢复.④移植后8周,流式细胞仪检测存活小鼠骨髓中人CD45 、CD45 CD33 、CD45 CD41 、CD45 CD3 和CD45 CD19 细胞含量;PCR法检测移植小鼠外周血中人Y染色体表达.[结果]①非扩增组小鼠存活率为60%,扩增组存活率为90%.②动态观察发现:扩增组白细胞和血红蛋白于移植后第20天恢复,PLT于移植后第40天恢复,明显短于非扩增组.③移植后8周,两组小鼠外周血中人Y染色体检测均为阳性,扩增组和非扩增组小鼠骨髓中人CD45 细胞的含量分别为18.5%±8.3%和16.5%±5.7%,差异无统计学意义(P＞0.05).④移植后8周,扩增组小鼠体内CD45 CD33 和CD45 CD41a 细胞的百分率均高于非扩增组,但CD45 CD3 、CD45 CD19 细胞百分比均低于非扩增组.[结论]①含人UCBMSCs体系扩增后的UCB细胞具有NOD/SCID小鼠体内植入并重建小鼠造血的能力,但不具有提高小鼠体内植入率的作用.②扩增后的UCB移植可显著促进移植后小鼠造血恢复,提高小鼠存活率.③扩增后的UCB移植主要促进小鼠髓系及巨核系的植入,但对淋巴系的植入有抑制作用.     

同种异基因小鼠骨髓腔内脐血移植模型的建立及其对造血干细胞植入的影响

[目的]建立同种异基因小鼠骨髓腔内脐血移植模型,研究该技术对造血干细胞(HSC)归巢、植入率、移植后免疫造血重建、移植物抗宿主病(GVHD)等方面的影响.[方法]用C57BL/6胎鼠及新生鼠外周血(FNPB)作供体,以单侧胫骨骨髓腔内注射(IBMI)和尾静脉注射(Ⅳ)两种途径移植经亚致死量60Coγ射线辐照预处理的BALB/c鼠.200只受鼠随机分为4组:骨髓腔内注射组(IBM组);尾静脉注射组(Ⅳ组);放疗对照组;正常对照组,每组50只.用组织冰冻切片和流式细胞术动态了解CFSE标记FNPB在受体内的分布变化,并观察移植后受鼠存活状况、植入水平、造血与免疫功能恢复及GVHD情况.[结果]①荧光标记FNPB体内动力学显示直至输注后72 h,供体FNPB经IBMI后主要积聚于注射侧骨髓腔内,肺部滞留很少.而Ⅳ组及IBM组非注射侧骨髓中的FNPB细胞数显著少于IBM组注射侧,Ⅳ组非造血组织器官如肺部有明显供体细胞滞留.②同种异基因小鼠CBT模型中IBM组造血、免疫功能的恢复明显快于Ⅳ组,无GVHD,移植后90 d存活率达到90%,注射侧胫骨植入水平(29.53±6.64)%,较Ⅳ组有显著改善.③IBM输注侧骨髓中供体HSCs植入水平及造血重建速度明显优于非注射侧骨髓.[结论]成功建立同种异基因小鼠骨髓腔内脐血移植模型,并证实IBMI途径对促进HSCs植入,造血免疫功能重建,提高UCBT效果方面优于Ⅳ途径,多部位IBMI可能更有利于HSC归巢骨髓.     

CD158分子表达在他克莫司、霉酚酸酯联合甲基强的松龙治疗顽固性慢性移植物抗宿主病中的追踪观察

目的：探讨慢性移植物抗宿主病（graft-versus-host disease，GVHD）症状期及缓解期CD158分子的表达变化。方法： 观察异基因造血干细胞移植后发生广泛性慢性GVHD的儿童患者，应用他克莫司（FK506），霉酚酸酯（MMF）和甲基强的松龙（MP）联合治疗的毒副作用和疗效；同时采用流式细胞仪检测外周血中CD158在NK细胞和T细胞的表达，比较治疗前后CD158的表达。结果： 移植前、慢性GVHD症状期和治疗后CD4+CD158a+和CD4+CD158b+表达水平极其低下，但无明显差异。5例急性GVHD患者CD3+CD158b+和CD3+CD8+CD158b+的表达水平分别为4.97%±2.36%和4.58%±2.90%，与移植前相比差异显著(P＜0.05)，CD3-CD16+CD158b+的表达也明显高于移植前(P＜0.05)。6例慢性GVHD患者症状期，CD3+CD158b+和CD3+CD8+CD158b+的表达均高于移植前的水平(P＜0.05)；在缓解期，CD3+CD158b+、CD3+CD8+CD158b+和CD3-CD16+CD158b+的表达水平逐渐下降，与慢性GVHD症状期相比差异显著(P＜0.05)，与移植前无明显差异。移植后6-12个月CD3-CD16+CD158b+ 表达水平与移植前无明显差异。结论： CD158b分子在T细胞表达水平增加与慢性GVHD的发生有关，FK506，MMF和MP联合有效治疗慢性GVHD的作用机制之一可能是下调T细胞CD158b+的表达，从而抑制cGVHD。     

同胞供者全相合脐血移植治疗重型β地中海贫血的细胞免疫重建分析

目的:探讨同胞供者全相合脐血移植治疗重型β地中海贫血后免疫重建的特点.方法:8例同胞供者HLA全相合脐血移植成功治疗重型β地中海贫血患者,采用流式细胞仪分别在移植后1、3、6、12个月检测T细胞亚群.结果:该组患者植入证据显示均移植成功,在移植后4周内恢复造血重建;3例发生Ⅰ～Ⅱ急性移植物抗宿主病,无慢性移植物抗宿主病发生;移植后CD3+细胞1个月为(45.3±27.2)%,3个月为(66.7±10.4)%,6个月为(68.7±14.5)%,12个月为(71.7±10.2)%;移植后CD4+细胞1个月为(13.3±7.8)%,3个月为(21.8±11.6)%,6个月为(19.4±10.9)%,12个月为(30.1±10.4)%;移植后CD8+细胞1个月为(32.1±15.4)%,3个月为(30.6±10.9)%,6个月为(26.9±7.3)%,12个月为(28.1±5.6)%;移植后CD3-CD19+细胞1个月为(6.4±5.6)%,3个月为(12.7±3.4)%,6个月为(16.3±7.3)%,12个月为(16.7±5.7)%;移植后CD3-CD16+CD56+细胞1个月为(16.4±7.4)%,3个月为(15.9±7.6)%,6个月为(14.7±6.6)%,12个月为(15.6±3.4)%.结论:同胞供者HLA全相合脐血移植治疗重型β地中海贫血后1个月CD8+细胞逐渐恢复正常,移植后3个月时CD3+细胞和NK细胞逐渐恢复正常水平,移植后6个月后CD4+和CD19+细胞表达水平逐渐恢复达正常水平.     

异基因造血干细胞移植CD94分子在T细胞高表达的意义初探

目的检测CD94分子在T细胞表达的水平,同时探讨在异基因造血干细胞移植(HSCT)中发生移植物抗宿主病(GVHD)患者CD94分子在T细胞表达的意义。方法HSCT治疗高危白血病和遗传性溶血性贫血成功植入的儿童患者,其中同胞脐血移植(UCBT)10例,非血缘相关UCBT1例,异基因外周血造血干细胞移植(alloPBSCT)5例,在移植前后发生GVHD时采用流式细胞仪检测和比较外周血中CD94的表达,并与正常外周血水平比较。结果CD94主要表达于CD3+CD8+T细胞,正常情况下外周血和脐血T细胞表达率低于10%,其中CD4+细胞几乎不表达,低于2%。但在UCBT或alloPBSCT后CD94在CD4+T细胞和CD8+T细胞均明显增高。3例UCBT无GVHD,其余均发生了ⅠⅣ0急性GVHD。急性GVHD发生时CD4+CD94+和CD8+CD94+T细胞表达明显升高。结论异基因造血干细胞移植后发生GVHD时,T细胞高表达CD94,可能是在同种抗原的刺激下机体自我保护的结果。     

PDGF-BB/PDGFR信号通路与糖尿病视网膜病变相关性研究进展

糖尿病视网膜病变(DR)是临床常见的致盲性眼病之一,其病理机制主要包括周细胞的选择性丢失与新生血管的形成等,但具体分子学机制目前尚未完全阐明.其中血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)/血小板衍生生长因子受体(PDGFR)信号通路可通过活化细胞质中的胞外信号调节激酶、磷脂酶Cγ、磷脂酰肌醇-3-激酶等分子途径调节细...     

SARS患者急性期外周血CD3+、CD4+及CD8+细胞数量的变化

目的 探讨SARS患者外周血T淋巴细胞亚群的变化及其临床意义。方法 用全自动血细胞分析仪检测44例SARS患者外周血白细胞计数及分类，用流式细胞仪检测SARS患者外周血T淋巴细胞亚群；并与正常对照组比较。结果 与对照组比较，SARS组患者白细胞总数显著下降，淋巴细胞百分数和绝对数显著下降，粒细胞绝对数显著下降，粒细胞百分数显著增加；CD3^ 、CD4^ 和CD8^ 细胞绝对数显著下降，CD3^ 、CD4^ 及CD8^ 细胞百分数和CD4^ /CD8^ 比值与对照组比较无显著性差异。结论 SARS冠状病毒感染损伤患者细胞免疫功能。     

放射状视神经切开手术机制的初步研究

目的观察猫眼行放射状视神经切开术(RON)后视盘结构的改变,探讨RON的临床机制。方法健康成年猫18只分为术后1、15、30、90d四组,右眼行RON。术后1d组为6只。分别于术后1、15、30、90d取材,行组织病理学观察。结果术后1d巩膜切口呈"一"型裂开,手术间隙与蛛网膜下腔相通,伴少量出血及炎性细胞浸润;15～30d切口呈"枣核"型,神经胶质细胞增生,胶原纤维沿切口缘环形增生,以Ⅰ型和Ⅲ型为主,筛孔呈长裂隙状;90d瘢痕组织将筛板和巩膜切口完全填充,Ⅲ型胶原排列不规则,边缘的筛孔形态恢复。结论手术将视盘周围的巩膜环及视神经眼内段软膜锐性切开,切口在巩膜环处呈逐渐扩宽趋势并与蛛网膜下腔相通;这可能是RON减轻临床症状的机制之一。     

CD40和CD40配体表达在异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病发生中的变化

目的 探讨在血缘相关人类白细胞抗原(HLA)全相合异基因造血干细胞移植(HSCT)中发生移植物抗宿主病(GVHD)患者CD40和CD40配体(CD40L)表达的变化及意义.方法 成功应用血缘相关HLA全相合异基因HSCT治疗19例重型珠蛋白生成障碍性贫血和1例遗传性溶血性贫血.其中脐血移植(UCBT)8例,异基因外周血造血干细胞移植(allo-PBSCT)12例,移植前、后发生急、慢性GVHD时采用流式细胞仪检测和比较其外周血CD40和CD40L的表达.结果 UCBT 3例和allo-PBSCT 4例无急性GVHD,余13例均发生I-Ⅳ度急性GVHD.急性GVHD发生时CD4 CD40L 和CD8 CD40L T细胞表达明显升高,尤其在alloPBSCT者更明显.5例UCBT和12例allo-PBSCT发生慢性GVHD,慢性GVHD发生时患者的CD40L 、CD25 和CD69 在CD4 和CD8 T细胞上的表达增加.CD19 CD40 B细胞的表达在UCBT和allo-PBSCT后l a一直处于低水平.结论 HSCT移植后患者外周血CD40L T细胞的高表达可能与异基因HSCT GVHD的发生过程中的T细胞活化与增殖有关.