消可宁对高糖状态下大鼠肾小球系膜细胞增殖的调控效应

背景：中药对早期糖尿病肾病有较好的防治作用，这一作用是基于中药有效成分的多样性而作用于糖尿病肾病不同靶点所引起的。目的：观察消可宁对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增生的影响，并探讨其可能的作用机制。设计：对照观察。单位：南京医科大学第一附属医院内分泌科。材料：实验于2003-07／2004-05在南京医科大学第一附属医院内分泌代谢研究中心细胞培养研究室完成。大鼠系膜细胞株HBZY-1：购自武汉大学中国典型培养物保藏中心。方法：系膜细胞按说明进行传代培养备用。①不同刺激浓度分组：高糖＋消可宁组（消可宁分别取20．0，40、0，60．0，80．0，120．0，200．0g/L）；正常糖对照组，细胞液中葡萄糖浓度为5．6mmol／L；高糖对照组，细胞液中葡萄糖浓度为30mmol／L，分别刺激72h进行观察。不同刺激时间分组：正常糖对照组，细胞液中葡萄糖浓度为5．6mmol／L；高糖对照组，细胞液中葡萄糖浓度为30mmol／L；高糖＋消可宁组，细胞液中葡萄糖浓度为30mmol／L，消可宁浓度为60g／L；3组分别在刺激24，48，72h给予观察。②将配置好的细胞悬液放入96孔培养板，每孔加200μL。培养板放置体积分数为0．05C0：，37℃孵箱24h后，取出弃上清，加入各组含不同药物及浓度的细胞液，每孔200μL。将96孔板放入37℃含体积分数为0．05的C02空气和100％湿度培养箱中孵育。不同刺激浓度组别于72h后分别向板孔中加20μL4-甲基偶氮四唑蓝（5g/L），不同刺激时间组别于24，48，72h后分别向板孔中加20μL4-甲基偶氮四唑蓝（5g/L），之后均在37℃培养箱中温育4h，置镜下观察4-甲基偶氮四唑蓝掺入细胞内，吸出上清，加入150μL二甲基亚砜使用甲醇溶解，用平板摇床摇匀振荡30s，于酶标仪492nm波长读数，并记录吸光度值。主要观察指标：不同培养时间及不同消可宁培养浓度下系膜细胞增殖情况（吸光度值）。结果：①不同刺激时间各组系膜细胞增殖的情况：高糖对照组刺激24，48，72h系膜细胞吸光度值分别为0．685&;#177;0．010，0．750&;#177;0．087，0．659&;#177;0．018，高于正常糖对照组（0．586&;#177;0．054，0．598&;#177;0．040，0．527&;#177;0．047，P〈0．05），高糖对照组及正常糖对照组葡萄糖刺激系膜细胞48h吸光度值高于24h（P〈0．05），刺激72h吸光度值低于48h，（P〈0．05）。高糖＋消可宁组药物刺激72h后系膜细胞吸光度值为0．538&;#177;0．023，低于高糖对照组（P〈0．05）。②不同浓度消可宁刺激系膜细胞增生情况：消可宁自浓度为60．0g/L起，可明显的阻止高糖对系膜细胞的过度刺激作用，并随着浓度的增加，这种作用逐渐增强，但过高的浓度（120．0g／L）则出现细胞脱落死亡，极高的药物浓度（200．0g／L）则不见存活的细胞。结论：高糖培养的系膜细胞在消可宁刺激72h后表现出较强的抑制系膜细胞增殖的作用，在一定范围内呈剂量依赖的方式，但过高的药物浓度又表现出很强的细胞毒性.     

中药复方制剂消可宁对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:观察中药复方制剂消可宁对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用。方法:实验于2004-04/11在南京医科大学第一附属医院内分泌代谢研究中心细胞培养研究室完成。①中药复方制剂消可宁(由制大黄、制附子、生黄芪组成,南京军区南京总医院制剂科生产,药品批号:院临(2003)第01017号,规格为90mL/袋)。大鼠系膜细胞株HBZY-1购自武汉大学中国典型培养物保藏中心。②将购入的系膜细胞株消化培养,取培养4～8代的细胞,吸去培养瓶中的上清液,消化离心后混匀,锥虫蓝染色观察细胞活性。③不同刺激时间系膜细胞增殖实验设立3组,正常糖浓度组每孔加入5.6mmol/L葡萄糖溶液200μL,高糖对照组每孔加入30mmol/L葡萄糖溶液200μL,高糖 消可宁组每孔加入30mmol/L葡萄糖与0.06g/mL消可宁混合液200μL,6孔/组。各组分别于培养24,48,72h后向板孔中加5g/L的4-甲基偶氮四唑蓝20μL,于酶标仪492nm波长处检测吸光度值。④不同浓度消可宁刺激高糖环境下系膜细胞增殖实验设立7组,高糖对照组每孔加入30mmol/L葡萄糖溶液200μL,消可宁20,40,60,80,120,200g/L组每孔加入30mmol/L葡萄糖 对应浓度的消可宁混合液200μL,6孔/组。培养72h后各组向板孔中加5g/L的4-甲基偶氮四唑蓝20μL,同法检测吸光度值。结果:①系膜细胞活性观察:原代培养的4～8代系膜细胞,经锥虫蓝染色,着色的死亡细胞数<5%,未着色活细胞数>95%。②不同刺激时间各组系膜细胞增殖情况的比较:与正常糖浓度组比较,高糖对照组于高糖刺激24h即可促进系膜细胞的增殖,且这种作用在刺激48h时最为明显,至72h细胞数量开始减少,但仍明显高于正常糖浓度组(0.527±0.047,0.659±0.018,P<0.05)。与高糖对照组比较,高糖 消可宁组在24h内并未表现出抑制系膜细胞增殖的作用,而刺激48h后显示出抑制趋势,但差异无显著性意义,于72h后表现出较强的抑制系膜细胞增殖的效应(0.659±0.018,0.538±0.023,P<0.05)。③不同浓度消可宁刺激对高糖环境下系膜细胞增殖的影响:刺激72h后与高糖对照组比较,20,40g/L的消可宁能够部分阻止系膜细胞的增殖;60,80g/L的消可宁则表现出明显阻止高糖对系膜细胞的过度刺激作用,且随着浓度的增加,抑制作用逐渐增强;浓度升至120g/L时出现细胞脱落死亡,高达200g/L时则不见存活的细胞。结论:消可宁能够有效抑制高糖诱导的系膜细胞增殖,可能是其早期防治糖尿病肾病的细胞学基础。     

COMPARISON OF THE THERAPEUTIC EFFECT OF AURICULAR ACUPUNCTURE, BODY ACUPUNCTURE AND COMBINATION OF AURICULAR PLUS BODY ACUPUNCTURE FOR TREATMENT OF SIMPLE OBESITY

1 CLINICAL DATA1. l Subjects: All the patients were from theOut-patient Department (SPecialist Clinic foracupuncturesreducing body weight) of NanjingTCM and Pharmacy University and from theout-patient department (Specialist Clinic forAcupuncture-reducing Body Weight) of our hos-pital. They were diagnosed as simple obesitythrough clinical examination.l. 2 General data: In this series of treatment,l95 cases of simple obesity including 8 males andl87 females were observed. The oldest …     

单纯性肥胖病的针灸治疗机理研究进展

单纯性肥胖病为常见病、多发病。针灸治疗本病疗效显著 ,其作用机理有两个方面 ,一方面是针灸能够抑制患者过亢的食欲 ,抑制亢进的胃肠道消化吸收机能 ,从而减少能量的摄入 ;另一方面针灸可以促进能量代谢 ,增加能量消耗 ,促进体脂的动员与分解 ,最终实现减肥效应。其作用是通过对神经、内分泌功能的调整来实现的。本文从临床和动物实验两个方面对针灸治疗单纯性肥胖病的机理研究进行了综述 ,并对今后研究的方向作了展望。     

补肾抗松丸对绝经后骨质疏松症患者骨密度的影响

目的:观察补肾抗松丸对绝经后骨质疏松症患者骨密度(BMD)的影响.方法:将84例绝经后骨质疏松症患者随机分为2组,观察组42例用补肾抗松丸加碳酸钙片治疗,对照组42例只用碳酸钙片治疗,疗程为6个月.治疗前后检测正位腰椎BMD,取第2-4腰椎BMD平均值,检查设备使用GE Lunar Prodigy型双能X线骨密度仪.结果:BMD与绝经年数的相关性分析显示,用药前两者呈显著负相关(r=0.254,P＜0.05),用药后两者无相关关系(r=-0.159,P＞0.05).观察组BMD自身前后比较显著增加(t=3.976,P＜0.01),与对照组比较,差异有显著性(t=3.297,P＜0.01;95%CI(0.010,0.042)).结论:绝经后骨质疏松症患者BMD呈逐年下降趋势,补肾抗松丸能逆转这个趋势,单纯服用钙片不能增加其BMD.     

回心草药材HPLC指纹图谱研究

目的 建立回心草药材的指纹图谱.方法 采用反相高效液相色谱,色谱条件为:Dikma Platisil ODS C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相A:0.5%醋酸乙腈,B:0.5%醋酸水溶液;洗脱方法:0～50 min,A为20%～55%;50～60 min,A为55%～95%,60～85 min,A为95%～100%,保持5 min;体积流量1.0 mL/min,波长360nm.柱温:30℃,运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004版(国家药典委员会)进行分析.结果 构建了回心草药材的指纹图谱.结论 该法准确.重现性好,可作为回心草药材的质控方法.     

2型糖尿病大鼠血清和脂肪组织TNFα对针刺的反应

目的:探讨TNFα在2型糖尿病(T2DM)发病中的作用以及针刺对T2DM机体TNFα的影响.方法:给食源性肥胖大鼠腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)造成T2DM模型,随机分为针剌组、优降糖组和模型组治疗,4周后检测空腹血糖(FBS)、空腹胰岛素(FINS)、血清TNFα、脂肪细胞TNFα水平,并与正常组大鼠进行对照.结果:针刺组和优降糖组FBS较模型组显著降低,接近正常组水平;针刺组FINS明显低于模型组,接近正常组水平,优降糖组FINS水平低于模型组,但无显著性差异;模型组、优降糖组血清TNFα水平明显高于正常组,针刺组高于正常组但无显著性差异;模型组、优降糖组脂肪细胞TNFα的表达明显高于正常组和针刺组;针刺组脂肪细胞TNFα与正常组无显著性差异.结论:血清TNFα水平升高、脂肪细胞TNFα表达异常可能是T2DM的发病环节之一;针刺和优降糖可不同程度地降低T2DM大鼠血清TNFα水平、抑制脂肪细胞TNFα的表达,针刺对T2DM大鼠TNFα的调节作用优于优降糖.     

非胰岛素依赖性糖尿病针刺辨治探要

非胰岛素依赖性糖悄病的病理改变是当液代谢失调,而脾胃功能失常是重要的致病因素,肾气不足亦不可忽视。辩证分为胃肠实热、脾虚湿阻、肾气不足和肝郁气滞甲型,主要治疗方法有清泻胃肠实热、平调脾胃功能、补益肾气、通调水道、疏肝理气等。     

单纯性肥胖病针刺辨治探要

单纯性肥胖病的病理改变是卫气失常、津液代谢失调，而脾胃功能失调是致病的关键因素，真元不足是肥胖发生的重要环节，恣食肥甘酒醴、缺少劳作及情志失调在发病中的作用亦不可忽视。辨证分为胃肠实热、脾虚湿阻、真元不足及肝郁气滞四型，主要治法有清泻胃肠实热、平调脾胃功能、补益元气、通调水道及疏肝理气等。     

Effects of Acupuncture on Monoamine Neurotransmitters in Raphe Nuclei in Obese Rats

Effects of acupuncture on the levels of neurotransmitters in the raphe nuclei were investigated in obese rats. It was found that the levels of tryptophan (Trp) and 5-hydroxyindoleacetic acid (5-HIAA) were increased, and 5-hydroxytryptamine (5-HT) level and 5-HT/5-HIAA ratio decreased in the raphe nuclei of the obese group as compared with the normal group; and that acupuncture could produce weight reduction, increase the 5-HT level and 5-HT/5-HIAA ratio, and decrease the contents of Trp and 5-HIAA, but did not change the levels of dopamine (DA) and noradrenaline (NA). It is indicated that benign regulative action of acupuncture on 5-HT and its metabolism in the raphe nuclei is possibly one of the factors for reducing weight by acupuncture.