刚地弓形虫RH株ROP11基因的克隆与真核表达载体的构建北大核心CSCD

目的构建刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白11(ROP11)的真核表达重组质粒并在真核细胞中表达目的蛋白。方法设计合成弓形虫ROP11基因引物,运用RT-PCR方法扩增ROP11基因并克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建重组表达质粒pcDNA3.1-ROP11。将重组质粒转染HeLa细胞,采用间接免疫荧光法检测目的蛋白表达。结果 RT-PCR扩增弓形虫ROP11基因片段为1 548bp,与预期大小相符。构建的重组质粒pcDNA3.1-ROP11经PCR及EcoRⅠ和NotⅠ双酶切鉴定正确。重组质粒测序后与GenBank报道的ROP11基因比对,核苷酸序列同源性和推导氨基酸序列同源性均为99%。免疫荧光检测显示,在重组质粒转染的HeLa细胞胞浆观察到黄绿色荧光,对照组无荧光。结论成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-ROP11,该重组质粒能够在真核细胞中表达目的蛋白,为弓形虫核酸疫苗的研制奠定了基础。     

IL-3-LDM融合蛋白对CD123+白血病细胞的靶向杀伤作用

目的：构建以IL-3为靶向、力达霉素（lidamycin,LDM）为弹头的融合蛋白IL-3-LDM,观察其对多种CD123+白血病细胞的靶向杀伤作用。 方法: 原核表达IL-3-LDP（interleukin 3-lidamycin）融合蛋白,组装活性烯二炔（active enediyne,AE）发色团得到IL-3-LDM。流式细胞术检测不同白血病细胞系（KG1-a、TF-1、M07e、HL-60、K562、Raji）表面CD123分子的表达,并检测融合蛋白IL-3-LDM与各白血病细胞的结合能力;CCK-8检测IL-3-LDM融合蛋白对不同CD123阳性率的白血病细胞的杀伤能力。 结果: 组装活性发色团得到的IL-3-LDM蛋白纯度可达90%以上。急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）KG-1a细胞表面CD123阳性率最高（88.9%）,其次为MO7e和TF-1细胞（＞75%）,再次为HL-60细胞（7.8%）,而K562、Raji细胞CD123表达呈阴性。体外IL-3-LDM融合蛋白对CD123+白血病细胞(KG-1a、MO7e、TF-1和HL-60细胞）的结合能力和杀伤效率与细胞表面CD123的阳性率成正比,对于CD123表达率最高的KG-1a细胞,LDM的杀伤强度是多柔比星（adriamycin, ADR)的1 415.8倍,而IL-3-LDM 的杀伤强度又是LDM的9.6倍。 结论: IL-3-LDM融合蛋白可以有效携带细胞毒药物LDM 并高效靶向杀伤CD123+白血病细胞。     

遗传性耳聋相关基因SLC26A4新突变致病性分析

目的验证SLC26A4基因ivs16+10C>T变异与遗传性耳聋的相关性,确定其是否致病。方法我们采集了一个聋-聋婚配家庭中的2例样本(编号7518)、200例大前庭水管散发病例及200例正常听力对照的血液样本及临床资料,分析该变异在人群的携带情况。采用在线软件预测(Fruitfly)及RT-PCR法验证SLC26A4基因ivs16+10C>T变异是否对剪切位点的识别产生影响。结果 SLC26A4 ivs16+10C>T变异在中国人群中携带率低。在200例EVAS散发患者及200例正常人中检测,均未发现携带该变异。Fruitfly结果显示SLC26A4 ivs16+10C>T对剪切位点的识别没有影响,RT-PCR证实SLC26A4编码cDNA长度没有改变。结论 SLC26A4 ivs16+10C>T变异是非致病的核苷酸多态,推测7518家庭的后代不会复制父母的听力。     

氨溴索对流感嗜血杆菌生物膜清除和膜内杀菌作用研究

目的：观察氨溴索（AMB）对流感嗜血杆菌生物膜（BF）的作用以及对BF菌的杀菌作用。方法：30株流感嗜血杆菌菌株从腺样体肥大患儿术中切除的腺样体组织分离,选取具有较强成膜能力的2株细菌,96微孔板法培养细菌形成BF,结晶紫染色法测定不同浓度AMB对2株细菌BF的影响,并用扫描电镜观察细菌BF形态结构的改变;平板计数法检测AMB对BF菌杀菌作用。结果：结晶紫染色法示,当AMB浓度分别达到0．25mg／ml和0．49mg／ml时,2株细菌BF吸光度值较对照组差异有统计学意义（P〈0．01）,扫描电镜发现BF结构受到破坏;菌落计数显示AMB对流感嗜血杆菌BF菌有杀菌作用,且剂量依赖效果明显。结论：AMB在体外对流感嗜血杆菌BF具有破坏和清除功能,并对BF菌具有杀菌作用。     

四种手术方法治疗翼状胬肉168眼

目的 探讨单纯翼状胬肉切除术、翼状胬肉切除联合丝裂霉素C、翼状胬肉切除联合带角膜缘的结膜瓣移植术、翼状胬肉切除联合羊膜移植术四种方法治疗胬肉的手术效果。方法 分析翼状胬肉患者158例(168眼)接受不同手术方式的手术效果。其中,A组（41眼）接受单纯翼状胬肉切除术,B组（42眼）接受单纯胬肉切除联合丝裂霉素C术,C组（44眼）接受翼状胬肉切除联合带角膜缘的结膜瓣移植术,D组（41眼）接受翼状胬肉切除联合羊膜移植术。术后随访 6～12个月。结果 A组复发率 17.1% ,B组复发率为9.5％,C组复发率4.5%,D组复发率为4.9% 。A组的复发率和其它三组比较差异有统计学意义 (P﹤0．05);B、C组、B、D组、C、D组复发率的比较差异无统计学意义(P﹥0．05)。C组的并发症较其他三组的并发症少。 结论 翼状胬肉切除联合带角膜缘的结膜瓣移植术是目前值得推广的手术方式,具有经济实用、复发率低、角膜上皮愈合快、并发症少等优点。     

心肌缺血过程中磷酸肌醇4-激酶变化的研究

目的　观察大鼠心肌缺血后心肌细胞和红细胞膜上磷酸肌醇 4 激酶活性的变化 ,探讨其在心肌缺血过程中的调控机理。方法　建立大鼠体内心肌缺血模型 ,在蛋白水平上分别检测心肌细胞和红细胞膜上磷酸肌醇 4 激酶活性在缺血后不同时间 (缺血后 1、8、2 5及 48h)的变化 ,用免疫组织化学方法检测磷酸肌醇 4 激酶蛋白表达水平的变化。结果　 (1)心肌细胞膜上磷酸肌醇 4 激酶活性在心肌缺血后 1h达到最高 ,为对照组的 6 .1倍 ,随着时间的延长 ,其活性逐渐下降 ,48h接近于正常水平 ;免疫组织化学结果显示 :与正常组相比 ,缺血组磷酸肌醇 4 激酶蛋白表达水平明显升高。 (2 )红细胞膜上磷酸肌醇 4 激酶活性在缺血后 1h和 2 5h达到最高 ,随后酶活性开始下降 ,缺血后 48h酶活性水平低于正常水平。结论　心肌缺血早期 (1h)心肌细胞和红细胞膜上磷酸肌醇 4 激酶活性显著提高 ,提示磷酸肌醇 4 激酶参与了心肌缺血后的调节过程 ,其活性升高可能与心肌受损伤程度相关。     

激光心肌血管重建术诱导热休克蛋白表达上调

为探讨经皮穿刺激光心肌血管重建术 (PTMR)的心脏保护作用及其保护机制 ,在猪原位心脏缺血再灌注 (I/R)模型上 ,采用TTC法观察PTMR对于I/R后心肌梗死范围的影响 ,以Westernblotting方法测定心肌组织内热休克蛋白 (HSP) 70和 86蛋白水平的变化 ,并进行相关分析。结果发现PTMR组动物心肌梗死面积明显缩小 ,其梗死面积为 (32± 3) % ,对照组为 (5 6± 7) % (P <0 .0 5 ) ;PTMR区域心肌组织内HSP70和HSP86蛋白的相对含量较对照组明显升高。PTMR术后 2 4h ,I/R所致心肌梗死面积与HSP70和HSP86蛋白水平呈显著负相关 (r =0 .5 6和 0 .5 1,P均 <0 .0 1)。上述实验结果提示 ,心肌组织诱导型HSPs表达的上调可能参与了PTMR的心脏保护作用。     

结核分枝杆菌FurB基因真核表达质粒的构建及表达

目的构建结核分枝杆菌铁调控基因furB真核表达载体。方法以BamHⅠ和HindIII双酶切pQE-80L-furB获得furB基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),重组质粒酶切鉴定后以阳离子聚合物转染COS-7细胞,分别以RT-PCR方法检测mRNA表达和间接免疫荧光技术检测目的蛋白的表达。结果构建了重组质粒pcDNA3.1(-)-furB,RT-PCR结果证明furB可在COS-7细胞中转录,用间接免疫荧光检测,显示COS-7细胞内有FurB蛋白的表达。结论成功构建了结核分枝杆菌furB基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-furB,furB基因可以在COS-7细胞中表达。     

老年2型糖尿病患者甲状腺激素水平变化及其临床意义

目的：本文介绍了老年2型糖尿病患者的甲状腺激素水平检测方法,并观察其水平变化和临床意义。方法：选取我院300例被确诊为老年2型糖尿病患者作为研究对象,其中200例为轻度2型糖尿病,100例为重度2型糖尿病,再选取150例健康者为对照组,所有患者与对照组均进行血糖、甲状腺激素、T亚群细胞的检测,并将重症组、轻症组分别与对照组比较,观察和分析患者的甲状腺激素水平变化。结果：轻症组的FPG、糖化血红蛋白水平、空腹C肽均明显高于对照组（P＜0．05）,血清FT3水平明显低于对照组（ P＜0．05）;重症组的FPG、rT3水平、空腹胰岛素、CD8、糖化血红蛋白水平、空腹C肽均要明显高于对照组（ P＜0．05）,血清FT3水平、血清FT4水平明显低于对照组（ P＜0．05）。而T4、T3、TSH、CD4的检测结果,轻症组与重症组分别和对照组比较,均无统计学意义（ P＞0．05）。结论：老年2型糖尿病患者不同血糖的甲状腺激素水平与T亚群细胞存在一定的相关性,定期检测甲状腺激素可以尽早的诊断出老年2型糖尿病,从而能够帮助患者及时的治疗与预后。     

急诊科危重患者院内安全转运的护理

目的：探讨危重患者在院内转运的护理。方法：通过回顾162例危重患者的安全转运情况,观察护理安全转运的系列措施所产生的效果。结果：161例患者安全转运到相关科室病房,1例转运手术室过程中死亡。结论：转运前对患者病情做出的正确评估,转运中采取恰当的护理措施是院内转运安全的保障。