上海地区人群抗凝蛋白C基因突变和多态性研究

目的研究上海地区人群抗凝蛋白C(PC)活性的正常范围和PC基因突变及多态性的分布;研究活化蛋白C抵抗(APC-R)的分布及其与相应已知基因突变的关系。方法采用发色底物法检测867例上海健康人PC活性,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测PC抗原,采用凝血法检测APC-R,采用聚合酶链反应(PCR)扩增PC基因所有外显子及其侧翼序列和5′、3′非翻译区,采用直接测序法检测所有扩增片段。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测APC-R相关多态性。结果 PC活性和APC-R的正常范围分别为67%～147%和114.7～195.2S。不同性别研究对象PC和APC-R测定结果间差异有统计学意义(P<0.05)。PC活性随年龄增长而增加(P<0.01)。在对10例PC活性降低标本的基因检测中发现2个基因突变,即Ala121Thr(G3406A)和Pro247Ser(C8454T)。据此,计算出上海地区健康人群PC基因突变的频率为0.23%。在对15例APC-R阳性标本的检测中未发现FV多态性位点(FV Arg306Thr、Arg306Gly、Arg506Gln、His1299Arg和Ile359Thr)和PT G20210A。结论 PC基因突变的频率为0.23%;APC-R与已知的FV多态性位点无关;PC基因突变Ala121Thr和Pro247Ser可能是中国人易栓症的危险因素。     

经皮针撬注射植骨治疗腕舟骨陈旧性骨折、骨不连29例

腕舟骨骨折是腕部常见损伤之一，治疗方法较多，但疗效不确定，常发生为延迟愈合或骨不连，自1999年6月至2004年7月我们收治腕舟骨骨折延迟愈合或骨不连患者29例，采用透视下经皮针撬注射植骨治疗，取得良好效果，现报道如下。     

COPD急性加重期患者甲状腺激素水平与患者肺功能和营养状况的相关性

目的：探究慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)急性加重期患者甲状腺激素水平与患者肺功能和营养状况的相关性。方法：选取于2013年5月～2015年12月期间在我院呼吸内科住院治疗的87例COPD急性加重期患者作为观察组,另选87例同期健康体检者作为对照组,比较两组的血清总三碘甲腺原氨酸(serum total triiodothyornine,TT3)、血清总甲状腺素(serum total thyroid hormone,TT4)、血清游离三碘甲腺原氨酸(serum free triiodothyronine,FT3)、血清游离甲状腺素(serum free thyroid hormone, FT4)、促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)、肺功能、营养状况,并分析COPD急性加重期患者的甲状腺激素与其肺功能和营养状况的相关性。结果：观察组患者的TSH、FT4、TT4、FT3、TT3、BMI、IBW%、FEV₁%预计值以及FEV₁/FVC均显著低于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.001)。COPD急性加重期患者的FT3、TT3水平与其BMI、IBW%、FEV₁%预计值及FEV₁/FVC均呈正相关,FT4、TT4水平与其FEV₁%预计值及FEV₁/FVC呈正相关,差异具有统计学意义(r=0.263、0.281、0.782、0.823、0.271、0.302、0.843、0.881、0.276、0.283、0.251、0.293,均P<0.05),患者的TSH水平与其BMI、IBW%、FEV₁%预计值及FEV₁/FVC,FT4、TT4水平与其BMI及IBW%均无明显相关性(均P>0.05)。结论：COPD急性加重期患者的甲状腺激素水平常明显降低,且TT3、FT3水平与患者的肺功能和营养状况呈正相关关系,密切监测患者的血清甲状腺激素水平,有助于正确评估患者的病情及治疗效果。     

毫针配合埋针治疗周围性面瘫恢复期临床观察

目的观察毫针配合埋针治疗周围性面瘫恢复期的疗效。方法采用随机序列软件生成80个随机序列数,80例周围性面瘫的患者按就诊顺序依次从前至后取用随机序列数,奇数者为毫针组(对照组),偶数者为毫针加埋针组(治疗组),每组40例。对照组采用毫针常规针刺治疗,留针30 min,每周6次,6次为一个疗程,连续治疗3个疗程,2个疗程之间休息1 d,治疗组在对照组的基础上加用埋针疗法。治疗效果评价标准为国家"十一五"针灸重点专科面瘫协作组制订的标准,采用患侧与健侧对照的评分方法及临床疗效评价。结果治疗3个疗程后,对照组有效率为85.0%,治疗组有效率为95.0%,2组临床疗效比较,差异有统计学意义(P0.05);2组治疗后症状评分比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论毫针配合埋针治疗周围性面瘫恢复期有良好的治疗效果,值得临床推广。     

新型冠状病毒非结构蛋白NSP13通过调控IκBα蛋白降解抑制NF-κB信号通路

目的 研究新型冠状病毒非结构蛋白13(NSP13)调控NF-κB信号通路的作用机制。方法 利用GV367-NSP13-FLAG慢病毒感染的方法制备高表达NSP13的A549细胞（A549-NSP13）和A549对照组,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和ELISA检测NF-κB下游细胞因子白细胞介素6(IL-6)和趋化因子5(CCL-5)表达水平;Western印迹法检测NF-κB信号通路P65、磷酸化P65和NF-κB抑制因子α(IκBα)蛋白表达。放线菌酮10 mg·L-1处理细胞0,15,30,45,90和120 min,Western印迹法检测IκBα蛋白半衰期。结果 与A549对照组相比,A549-NSP13细胞检测到FLAG标签蛋白条带,且NSP13 mRNA表达显著上调（P<0.01）,表明A549-NSP13细胞系构建成功。与A549对照组相比,A549-NSP13细胞IL-6 mRNA和蛋白表达水平（P<0.01）及CCL-5 mRNA和蛋白表达水平（P<0.05,P<0.01）均显著降低;磷酸化P65蛋白表达下降（P<0.01）,而...     

酶联免疫吸附试验检测尿半胱氨酸蛋白酶抑制剂C在糖尿病肾病中的应用

目的建立酶联免疫吸附试验(ELISA)检测尿半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C),探讨其在糖尿病肾病(DN)中的临床意义.方法检测129名正常对照、55例糖尿病(DM)患者、59例DN患者的血、尿Cys C,59例DN组又分为A组[24h尿白蛋白(Alb)30～300mg/24 h]39例,B组(ALb＞300mg/24 h)20例,比较各组结果,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析其诊断效率.结果该方法的灵敏度为0.283μg/L.工作曲线的范围为0.39～25.0μg/L.A组与正常组比较,尿Cys C差异有显著性(P＜0.01),而血Cys C差异无显著性(P＞0.05);B组与A组比较,血、尿Cys C差异均有显著性(P＜0.01).A组血、尿Cys C的ROC曲线下面积分别为0.448±0.081、0.811±0.055,B组血、尿Cys C的ROC曲线下面积分别为0.813±0.060、0.928±0.037.结论本研究建立的ELISA方法检测尿Cys C,灵敏度、稳定性及准确性高.研究结果表明,尿Cys C对DN的诊断具有较高的敏感性及特异性.     

透明质酸结合蛋白诱发肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨人脑透明质酸结合蛋白(hbHABP)对人肿瘤细胞凋亡的影响。方法将hbHABP全长cDNA转染到人乳腺癌细胞(MDA435)和前列腺癌细胞(TSU)中,采用Western blot检测细胞caspase-3、CD95表达的变化,并采用酶联免疫吸附试验试剂盒测定细胞裂解液中Bcl-2、Cip／WAFI的含量。再将转hbHABP基因的MDA435细胞种植到鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上,使MDA435肿瘤细胞在体内环境中生长成瘤,取肿瘤块作病理切片,采用caspase-3抗体作免疫组织化学染色。结果MDA435和TSU细胞转染hbHABP基因后,caspase-3和CD95表达均增高;MDA435-hbHABP细胞裂解液中Bcl-2含量下降,TSU-hbHABP的Bcl-2无明显变化。TSU-hbHABP细胞Cipl／wAFl的含量升高,MDA435-hbHABP无变化。免疫组织化学结果显示,MDA435-hbHABP肿瘤组织内caspase-3表达均增高。结论hbHABP可能诱导肿瘤细胞凋亡,从而抑制肿瘤生长。     

膜结合型透明质酸酶PH-20 mRNA在消化道肿瘤表达的意义

目的研究膜结合型透明质酸酶(PH-20)mRNA表达与消化道肿瘤侵袭能力及淋巴结转移的关系,探讨其预测肿瘤侵袭危险度的意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测59例消化道肿瘤患者的原发癌、癌旁组织、淋巴结转移癌(其中13例)及4例消化道良性病变和各种细胞系(SGC-7901、BGC823、LS-174-T、HCT8、95-D、A549、HFL、HEPG2、L-02)中PH-20mRNA的表达水平。结果PH-20mRNA在上述组织中均有表达,消化道原发癌和淋巴结转移癌均明显高于癌旁组织(P<0.05)。消化道肿瘤PH-20mRNA表达与肿瘤浸润程度有关,浸润性肿瘤的PH-20mRNA表达量高于浅表性肿瘤(P<0.01)。结论PH-20mRNA表达改变可能与消化道肿瘤的发展有关,高表达PH-20mRNA的肿瘤细胞具有高侵袭潜能。