融合蛋白表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

目的构建人类regucalc in重组原核表达载体。方法用RT-PCR的方法从人类肝癌细胞系HepG2中扩增出regucalc in基因cDNA序列,应用T克隆载体及pET-32 a(+)表达载体后,将质粒转化进入原核表达菌株进行表达。结果表达产物经SDS-PAGE电泳分析后,在45 000处有一明显表达条带,与理论结果相符。结论成功构建融合表达载体Pet-regucalc in,并在原核细胞中表达出人类regucalc in-H is融合蛋白。     

慢性点燃癫痫形成中大鼠皮质胶质纤维酸性蛋白表达的变化

为探讨星形胶质细胞在戊四唑 ( pentylenetetrazol,PTZ)化学点燃癫痫形成过程中的作用 ,采用免疫组织化学方法和图像分析技术 ,对PTZ点燃各发作级别大鼠大脑皮质部位的胶质纤维酸性蛋白 (glialfibrillaryacidicprotein ,GFAP)的变化进行动态观察。发现 :GFAP值于点燃后Ⅲ级组开始增加 ,Ⅴ级组达到高峰。表明 :在戊四唑点燃癫痫模型中 ,随着点燃级别的进展 ,GFAP的免疫表达逐渐增加。提示 :星形胶质细胞GFAP含量的增加 ,可能是PTZ点燃模型癫痫发病的原因之一。     

经皮神经电刺激大鼠涌泉穴的fMRI表现和对痛阈的影响

目的:观察经皮神经电刺激(TENS)法刺激大鼠涌泉穴的fMRI表现,为揭示针灸镇痛的中枢机制提供可视实验数据。方法:使用热板仪测定大鼠TENS前后痛阈的变化,利用fMRI血氧水平依赖(BOLD)技术获取TENS涌泉穴的脑功能图像,并显示激活区域。结果:实验组TENS 20 min后痛阈值比实验前显著提高,与对照组相比差异有显著性意义;经皮神经电刺激大鼠右足涌泉穴时大脑激活区域有双侧的额叶皮质1区、2区、双侧的扣带皮质1区、2区、对侧的尾壳核、对侧岛叶皮质、皮质后肢代表区和顶皮质1区。结论:TENS后大鼠痛阈显著增高,提示针刺涌泉穴具有镇痛效应;其机制可能与引起中枢内与痛有关的皮层激活,从而使针刺部位的传入冲动在中枢神经系统内整合,并通过调节神经递质和激素的释放而对疼痛产生抑制作用。     

肝硬化后大鼠小脑皮质中P物质(SP)的变化及其意义-荧光免疫组化技术结合激光扫描共聚焦显微镜的研究

目的 :研究P物质 (SP)在大鼠小脑皮质中的分布特点及肝硬化后对大鼠小脑皮质中SP的影响。方法 :采用荧光免疫组化技术结合激光扫描共聚焦显微镜技术。结果 :①SP样阳性纤维及终末散在分布于小脑皮质各层 ,但在Purkinje神经元层其平均荧光强度相对其它各层较高 ,并主要分布于该神经元树突侧胞体周边形成突触样结构 ;②肝硬化后SP在小脑皮质中的分布与正常组基本一致 ,但阳性反应物的密集度明显增高 ,平均荧光强度显著增强。结论 :肝硬化后小脑皮质中SP含量较正常明显增多 ,很可能是脑损害的一种继发性代偿作用。     

溃变纤维Fink-Heimer Ⅱ法镀银染色后漂白复染技术

Fink-Heiller Ⅱ法能较好地分辨溃变纤维和溃变终末,广泛它用于神经束略的追踪。但该法常因正常组织中有许多金属银颗粒不能全部去除而造成切片背景不清,又固不能区分溃变来末梢周围的细胞构筑关系而致评价溃变终末的范围造成困难。本实验将Fink-Heimer Ⅱ法染色后的切片作漂白处理,而后作焦油紫复染。结果表明,经漂白处理的切片正常组织完全漂白而使背景清晰,而黑色的溃变纤维不受影响,完全保留。经复染的切片,复染的神经细胞显示较佳,能很好地反映出溃变终末的分布范围。因而是一种较为理想的溃变染色技术。     

点燃模型大鼠海马和皮层星形胶质细胞变化的动态观察

目的　探讨星形胶质细胞在戊四唑 (PTZ)化学点燃模型癫痫发病中的作用。方法　用 30只Wistar大鼠随机分为对照组和模型组。采用免疫组织化学方法和图像分析技术 ,对PTZ点燃各发作级别大鼠海马结构和颞叶皮质部位的胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的变化作动态观察。结果　GFAP值改变见于点燃后Ⅲ级组开始增加 ,Ⅴ级组达到高峰 ,Ⅴ级后 2 4h组仍有持续增加。结论　戊四唑点燃癫痫模型中 ,随着点燃级别的进展 ,GFAP免疫表达逐渐增加。提示星形胶质细胞GFAP含量的增加可能是PTZ点燃模型癫痫发病的原因之一。     

家兔脊髓长下行固有束与坐骨神经运动神经元之间的突触联系

本实验采用成年家兔12只,在上颈髓单侧往入海人酸后,将HRP注入同侧的坐骨神经内,应用HRP逆行追踪结合顺行溃变技术的电镜方法,首次在电镜水平对脊髓长下行固有束终末与坐骨神经运动神经元之间的突触联系进行了研究,结果表明,在坐骨神经运动神经元的胞体及近侧树突表面发现有少量的溃变终扣.根据溃变终扣的外形可分为圆形和长形,根据溃变终扣内突触小泡的形状可分为圆形和椭圆形.突触联系包括:(1)溃变终扣与标记胞体及树突形成轴一体、轴一树突触;(2)溃变终扣与非标记胞体及树突形成轴一体、轴一树突触;(3)正常轴突终末与标记胞体及树突形成轴一体、轴一树突触.本文首次报道,起源于上颈髓的脊髓长下行固有束终末与坐骨神经运动神经元之间存在着直接的突触关系.     

家兔皮质脊髓束投射神经元的分布

将辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）分别注入家兔脊髓单侧颈、胸、腰等不同节段，以显示皮质脊髓束投射神经元的分布。结果表明，大脑皮质的ＨＲＰ标记神经元仅见于颈段注入例，而胸段和腰段注入例未见到皮质标记神经元。标记的皮质脊髓束投射神经元主要分布于注入侧对侧的额叶无颗粒型皮质和顶叶颗粒型皮质，并呈现为３个分隔的标记细胞密集区，分别位于额叶皮质吻侧端的内侧部、邻近前囟的额顶叶皮质、顶叶皮质的外侧部。标记神经元呈柱状     

家兔脊髓长下行固有束至腰膨大的投射

目的　探讨脊髓长下行固有束在腰膨大的分布。方法　用成年家兔 2 5只 ,分两组进行 ,第一组 15只行溃变法和铜银顺行追踪法。第二组 10只葡聚糖胺结合免疫组化法 (ABC法 )顺行追踪脊髓长下行固有束在腰膨大的投射。结果　两组的实验结果基本一致 ,在腰膨大处 ,溃变终末或标记终末可见于双侧的灰质内 ,并主要见于同侧 ;其分布较为广泛 ,主要见于灰质 — 层 ,以 层和 层较为密集。结论　来自颈段的脊髓长下行固有束可投射到腰膨大 ,为探讨下肢运动的调控提供了进一步的形态学资料     

大鼠腰髓脊髓小脑束神经元向小脑中央核的投射—BDA顺行追踪研究

本实验采用 BDA顺行追踪法研究了大鼠腰髓脊髓小脑束向小脑中央核的投射。结果发现 :(1)大鼠腰髓脊髓小脑束神经元 (Clarke氏柱、第 层神经元和脊髓边缘细胞 )可向两侧小脑中央核投射 ,并以注射部位同侧的投射为主 ;(2 )大鼠腰髓脊髓小脑束向小脑中央核的投射主要分布于内侧核及间位核 ,并存在一定的体部定位关系。同时 ,首次发现有向外侧核的投射