老龄男性人群外周血T淋巴细胞丝裂原反应性和血浆睾酮、皮质醇含量的相关分析

为揭示老龄人群细胞免疫功能与激素含量变化的内在关系,以一汽集团离退休及在岗５０ 岁以上男性职工为研究对象。应用生物测定法检测外周血 Ｔ 淋巴细胞丝裂原反应性和 Ｉ Ｌ２ 活性,放射免疫技术测定血浆睾酮、皮质醇的含量。结果表明：１ ．外周血 Ｔ 淋巴细胞丝裂原反应性随增龄而下降,与年龄呈明显的负相关关系（ｒ ＝－ ０ ．５９４ , Ｐ＜ ０ ．０００１） ; Ｉ Ｌ２ 活性也随增龄而下降（ｒ ＝ － ０ ．５３２ , Ｐ＜ ０ ．００１） 。２ ．血浆睾酮含量随增龄下降,与年龄呈明显负相关（ｒ ＝ － ０ ．４５ , Ｐ＜ ０ ．０００１） ;而血浆皮质醇含量随增龄升高,与年龄呈明显正相关关系（ｒ ＝ ０ ．３２ , Ｐ＜０ ．０００１） 。３ ． Ｔ 淋巴细胞丝裂原反应性与血浆睾酮和皮质醇含量均有相关关系（ｒ ＝ ０ ．３６ , Ｐ＜ ０ ．０００１ ;ｒ ＝ － ０ ．５０８ , Ｐ＜ ０ ．０００１） 。提示：老龄人群 Ｔ 细胞功能的增龄变化与体内睾酮和皮质酮含量的变化有关,为进一步揭示衰老时机体免疫功能下降的机理提供了实验依据。     

辣椒素抑制自发性高血压大鼠脑基底动脉平滑肌细胞的增殖和迁移

目的 研究辣椒素(CAP)是否可以改善自发性高血压大鼠(SHR)脑基底动脉平滑肌细胞(BASMC)的增殖迁移。方法 体外培养SHR及Wistar京都(WKY)大鼠原代BASMC,随机均分为对照组(WKY组)、 SHR组、 CAP处理的SHR组。通过CCK-8法选取CAP处理浓度;Transwell^TM小室实验和划痕实验检测各组BASMC的迁移能力;免疫荧光细胞化学染色检测BASMC中的骨桥蛋白(OPN)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达和分布;Western blot法检测BASMC的OPN、 PCNA蛋白水平。结果 与WKY组相比,SHR组BASMC增殖和迁移能力增强,经CAP处理后,细胞增殖和迁移能力降低;OPN表达在BASMC胞质和胞核,PCNA主要表达在胞核,与WKY组相比,SHR组OPN、 PCNA表达及蛋白水平增强,经CAP处理后,其OPN、 PCNA表达及蛋白水平明显降低。结论 CAP可降低SHR来源的BASMC的增殖和迁移。     

老年甲状腺功能亢进性心脏病63例临床分析

我院自１９９０年１月～１９９９年２月收治合并心房颤动（房颤）的老年甲状腺功能亢进性心脏病（甲亢心）共６３例,首诊误诊４５例,误诊率７１．４３％。现将其临床特点分析如下。１　临床资料１．１　一般资料　本组６３例中,男５１例,女１２例;年龄７１．３０±１０．６５岁。病程０．５～４年。合并冠心病６例（经选择性冠状动脉造影证实）、高血压病１３例、老年退行性心脏瓣膜病７例。１．２　临床表现　以阵发性快速房颤为主要表现５６例（８８．８９％）,以慢性房颤为特点７例（１１．１１％）;心脏明显扩大２７例（４２．８…     

单链抗体与lidamycin辅基蛋白融合蛋白工程菌的高密度发酵及其免疫活性

目的 实现抗Ⅳ型胶原酶单链抗体(Fv)与lidamycin辅基蛋白(LDP)结合构成的融合蛋白Fv-LDP产生菌的高密度发酵,并测定融合蛋白Fv-LDP免疫活性.方法 先在5L发酵罐中进行工程菌分批发酵和补料分批发酵,再用同定化金属亲和层析从菌体中纯化融合蛋白Fv-LDP,分步透析使之复性,酶联免疫吸附试验和免疫荧光细胞化学染色检测其免疫活性.结果 确定分阶段恒速补料分批发酵为工程菌最佳高密度发酵模式,融合蛋白Fv-LDP最高表达量为4g/L,A600为55左右,培养时问约14h.融合蛋白Fv-LDP对Ⅳ型胶原酶呈阳性免疫反应,能与PG细胞特异结合.结论 确定了工程菌高密度发酵工艺,融合蛋白Fv-LDP免疫活性良好,为融合蛋白Fv-LDP与lidamycin烯二炔发色团(AE)构成的小型高效化抗体药物Fv-LDP-AE的研究奠定良好基础.     

血管内皮生长因子及其受体双靶向阻断对膀胱癌细胞生长及血管生成的抑制作用

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(KDR)双靶向阻断对人膀胱癌T24细胞和裸鼠膀胱癌移植瘤生长的抑制作用.方法 构建VEGF siRNA和可溶性KDR(sKDR)表达质粒的共转染细胞系,采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法和流式细胞仪测定T24细胞的增殖和凋亡,采用免疫组化法检测裸鼠移植瘤组织中VEGF的表达、瘤间质微血管密度(MVD)和细胞DNA拓扑异构酶(Topo)Ⅱα的表达,采用原位末端标记(TUNEL)法检测裸鼠移植瘤中肿瘤细胞的凋亡.结果 MTT法检测结果显示,VEGF siRNA、sKDR和联合应用组细胞的生存率分别为56.3%±8.3%、42.6%±13.8%和32.5%±4.3%,均明显低于阴性对照组(97.3%±11.6%,P＜0.0001).流式细胞仪分析显示,VEGF siRNA、sKDR和联合应用组在G.期前均出现亚二倍体凋亡峰,凋亡率分别为5.1%±0.9%、4.2%±0.5%和8.8%±0.7%,均高于阴性对照组(0.9%±0.4%,P＜0.05),而且联合应用组的凋亡率还明显高于VEGF siRNA和sKDR组(P＜0.01).体内实验结果显示,VEGF siRNA、sKDR和联合应用组的肿瘤生长均受到不同程度的抑制,联合应用组从16 d开始肿瘤体积即明显小于阴性对照组(P＜0.05),28 d起肿瘤生长几乎处于停滞状态.免疫组化分析显示,联合应用组肿瘤组织中VEGF的表达水平为54.37±5.28,显著低于阴性对照组(141.66±8.59,P＜0.0001);瘤间质MVD仅为8.22±3.79,明显低于阴性对照组(61.76±5.28,P＜0.0001)和sKDR组(19.46±4.16,P=0.0089);瘤细胞增殖指数为1.5%±0.7%,显著低于阴性对照组(11.8%±5.2%,P＜0.0001);而凋亡率达到67.2%±8.5%,明显高于阴性对照组(8.7%±2.7%,P＜0.0001)、VEGF siRNA组(54.3%±4.8%,P=0.0492)和sKDR组(52.3%±6.4%,P=0.0293).结论 VEGF siRNA与sKDR单独应用均可不同程度地抑制肿瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡,但二者联合应用时靶向双位点的治疗效果更为显著.     

siRNA介导的血管内皮生长因子基因沉默对膀胱癌T24细胞增殖的影响

我们应用RNA干扰技术,以血管内皮生长因子(VEGF)为靶点,对人膀胱癌T24细胞进行研究,初步探讨VEGF特异性小干扰RNA(siRNA)作为膀胱癌基因治疗手段的可能.现报告如下.     

Effect of total flavonoids of Rosa rugosa on PI3K/AKT pathway and endoplasmic reticulum stress apoptosis in rats with cerebral ischemia-reperfusion injury北大核心CSCD

Aim To investigate the effects of total flavonoids from Rosa rugosa (TFR) on cerebral ischemia reperfusion injury (CIRI) in rats, and to investigate whether TFR inhibited neuronal apoptosis by regulating phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B (PI3K/AKT) signaling pathway and endoplasmic reticulum stress (ERS) pathways. Methods SD rats were randomly divided into sham operation group, model group, low-dose group (50 mg · kg -1 · d -1), medium-does group (100 mg · kg -1 · d -1), and high-does group (200 mg· kg -1 · d -1). The injury model of middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) was prepared following suture method. Neurobehavioral changes, cerebral infarct size and brain tissue water content were detected 24 h after surgery. HE and Nissl staining were performed to observe pathological indicators. TUNEL staining was used to detect the apoptosis of ischemic nerve cells in brain. Western blot was used to detect the protein levels of Bcl-2, Bax, and cleaved Caspase-3, PI3K, p-PI3K, AKT, p-AKT, GRP78, CHOP and Caspase-12. Results Compared with MCAO/R group, the rats in medium-dose group and high-dose group showed improvement in the neurobehavioral function, decrease in the cerebral infarction area and the degree of cerebral edema, and reduction of the pathological damage of cerebral cortex. Moreover, there was a significantly decrease in the apoptosis rate of nerve cells in medium-dose group and high-dose group. The expression of anti-apoptotic protein Bcl-2 increased, and the pro-apoptotic protein Bax and cleaved-Caspase-3 decreased, the expression of pPI3K/PI3K, p-Akt/AKT increased, and the expression of ERS-related protein GRP78, CHOP, Caspase-12 decreased. Conclusions TFR can inhibit neuronal apoptosis by regulating the PI3K/AKT signaling pathway and ERS pathway, thus playing a protective role in CIRI rats. © 2023 Publication Centre of Anhui Medical University. All rights reserved.     

两种重组菌中融合蛋白Fv-LDP含量测定方法的比较研究

目的:测定抗Ⅳ型胶原酶单链抗体Fv和力达霉素辅基蛋白LDP在大肠杆菌中表达产生的融合蛋白Fv-LDP含量。方法:3瓶培养融合蛋白Fv-LDP表达菌,固定化金属亲和层析纯化融合蛋白Fv-LDP,分步透析使之复性,HPLC测其纯度。比色法测定菌体浓度,SDS-PAGE分离蛋白带,积分密度扫描法测定融合蛋白Fv-LDP表达百分比和含量。结果:在88.7~1 064 mg.L-1范围内,融合蛋白Fv-LDP浓度和积分密度值呈线性关系(r=0.998 8),精密度RSD为2.09%(n=8),平均回收率为95.18%。结论:SDS-PAGE-SpotDenso法操作简单,重复性好,灵敏度高,适用于发酵过程中对融合蛋白Fv-LDP表达产量的控制分析。     

一株新的小单孢菌C-3509抗肿瘤活性成分的分离、纯化和结构鉴定

目的:分离纯化小单孢菌C-3509中的抗肿瘤活性成分,并阐明其结构特征。方法:采用多种层析法进行C-3509抗肿瘤活性成分的分离纯化;通过紫外扫描、高分辨电喷雾质谱和核磁共振氢谱揭示其结构特征;利用DNA断裂法检测其抗肿瘤活性。结果:通过对C-3609菌株发酵和活性检测,分离、纯化得到了抗肿瘤活性成分C-3509B;进一步对C-3509B组分进行初步光谱分析与结构鉴定,结果显示该组分结构特征与抗肿瘤抗生素calicheamicinγ1I一致。结论:C-3509B可能是十元环烯二炔calicheamicins的γ1I组分。     

前列腺分泌蛋白94基因的克隆及序列测定

目的:作为构建前列腺分泌蛋白94(PSP94)分泌型表达质粒的基础。方法:从正常前列腺组织中钓取PSP94 cDNA,构建重组质粒pUC19－PSP94,转化后提取目的基因并进行测序。结果:(1)构建了pUC19－PSP94的重组克隆质粒;(2)PCR扩增获得了280bp的PSP94成熟蛋白基因;(3)测定了PSP94的基因序列。结论:所构建的pUC19－PSP94重组质粒可成功地克隆PSP94蛋白基因。