非放射性同位素mRNA差异显示技术

mRNA差异显示技术是基因筛选的重要方法 ,经典的方法皆通过同位素来进行 ,非同位素mR NA差异显示技术近年得到了一定的发展。本文对目前所应用的四种非同位素mRNA差异显示法 ,即荧光标记法、银染法、化学发光检测法和地高辛标记法进行了阐述评价。     

树突状细胞在食管癌T细胞抗肿瘤免疫中的作用

目的：了解食管癌组织中树突状细胞（ＤＣｓ）在肿瘤浸润性Ｔ淋巴细胞激活中的作用。方法：采用免疫组化和ＲＴ－ＰＣＲ的方法,对４６例食管癌手术标本中ＤＣｓ（ＣＤ１ａ）、Ｔ细胞亚群（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５）及共刺激因子Ｂ７进行检测。结果：癌组织中的ＤＣｓ与ＣＤ３＾＋、ＣＤ４＾＋Ｔ细胞有相关性,与ＣＤ８＾＋、ＣＤ２５＾＋Ｔ细胞无明显关系,且Ｂ７ｍＲＮＡ表达均为阴性。结论：食管癌中ＤＣｓ不一定能有效     

幽门螺杆菌感染与贲门腺癌发生关系的研究

目的：探讨贲门部幽门螺杆菌（Hp)感染与贲门腺癌发生、发展的关系。方法：用快速尿素酶法，PCR－Hp-DNA，改良Giemsa染色技术检测50例慢性贲门炎，17例贲门肠上皮化生及46例贲门癌的癌灶，癌旁及相应的手术残端黏膜组织中的Hp，以30例正常人胃黏膜为对照，结果：（1）贲门癌癌灶，癌旁、相应手术残端黏膜及贲门炎，肠化生组Hp检出率分别为58．7％，71．7％、63．0％、60．0％和64．7％，比对照组16．7％明显增高，差异具有显性意义（P＜0．001）；（2）癌灶Hp检出率较癌旁及相应胃窦中的Hp感染略低，但差异无显性意义（P＞0．05）；（3）Hp感染与贲门癌组织分型无关。结论：贲门Hp感染与贲门腺癌的发生有相关性。     

hTR反义寡核苷酸对食管癌细胞端粒酶活性、细胞凋亡及凋亡诱导因子表达的影响

目的:探讨封闭端粒酶RNA功能区的反义寡核苷酸(hTR ASODN)对食管癌EC9706细胞端粒酶活性、细胞凋亡及凋亡诱导因子(AIF)表达的影响.方法:应用hTR ASODN 1次/d、连续7 d转染EC9706细胞,以未加ASODN的脂质体对照组为空白对照,分别于转染后1 d、3 d、5 d、7 d采用TRAP-银染法检测EC9706细胞的端粒酶活性,原位末端转移酶标记法及吖啶橙荧光染色法检测EC9706细胞的凋亡及免疫细胞化学法检测AIF蛋白的表达.结果:与空白对照比较,hTR ASODN转染后EC9706细胞端粒酶活性受到抑制,细胞凋亡率及凋亡指数明显升高,AIF蛋白阳性表达率升高(P＜0.05).结论:hTR ASODN可有效抑制EC9706细胞的端粒酶活性,诱导肿瘤细胞凋亡,在此凋亡过程中,AIF可能发挥着重要作用.     

食管鳞癌组织中细胞周期素B1和D1表达的意义

目的:探讨食管鳞癌组织中细胞周期素B1和D1(Cyclin B1, Cyclin D1) mRNA和蛋白的表达及其与食管鳞癌床生物学指标的关系. 方法:应用原位杂交法、免疫组化SP法对62例食管鳞癌组织(组织学Ⅰ级15例,Ⅱ级25例,Ⅲ级22例;有淋巴结转移20例,无淋巴结转移42例;肿瘤浸润深度:浸润至黏膜层、黏膜下层或浅肌层7例,深肌层14例,纤维膜41例)、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管黏膜组织进行Cyclin B1,D1 mRNA和蛋白的检测,分析其阳性表达与食管鳞癌患者临床病理因素的关系. 结果:Cyclin B1,D1的mRNA和蛋白在正常食管黏膜组织中不表达或低表达,在癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中高表达,三者阳性表达率比较差异有统计学意义(P<0.05);食管鳞癌患者癌组织中CyclinB1,D1的mRNA和蛋白的表达与性别、年龄无关;与组织学分级、浸润深度及有无淋巴结转移有关(P<0.05). Cyclin B1,D1 mRNA与蛋白正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中的表达有高度的一致性. 结论:Cyclin B1,D1 mRNA和蛋白的高表达可促进食管鳞癌的发生与发展,在癌前病变期的鳞状上皮不典型增生组织中即出现高表达,是食管鳞癌发生过程中的早期事件.     

死亡受体4和5在颅咽管瘤中的表达

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体(DR)4和DR5在颅咽管瘤细胞中的表达,探讨其临床意义。方法联合采用免疫组织化学和原位杂交方法检测颅咽管瘤28例和正常脑组织25例中DR表达。观察原位杂交前后颅咽管瘤和正常脑组织中DR表达差异性。结果免疫组织化学染色显示,颅咽管瘤28例均大量表达DR4和DR5,而正常脑组织25例中表达DR4 10例(40.0%),表达DR5 8例(32.0%)。颅咽管瘤组织DR蛋白高表达不同于正常脑组织DR蛋白低表达,两者差异有显著性(P<0.01)。原位杂交显示,DR在28例颅咽管瘤组织和大部分正常脑组织中均呈强阳性表达,两者差异无显著性(P>0.05)。结论颅咽管瘤细胞中普遍存在DR高表达,这可能为颅咽管瘤的凋亡诱导治疗提供新靶点。DR蛋白在正常脑组织和颅咽管瘤中的表达差异可能是TRAIL选择性诱导凋亡的机制之一。     

PCR在消减文库构建中的应用

目的 :消减文库构建过程中 ,用PCR技术快速筛选重组阳性克隆。方法 :将白色单菌落加入氨苄抗性LB培养液中 ,37℃摇振培养过夜 ,取细菌悬液作PCR模板。结果和结论 :以PCR方法筛查重组阳性克隆 ,可以简便快速鉴定重组阳性克隆 ,不需提取质粒。筛选重组阳性克隆可直接用细菌悬液作PCR模板 ,在消减文库构建时 ,能大大提高工作效率。     

TIMP-1绿色荧光蛋白真核表达载体的构建和鉴定

目的:构建并鉴定TIMP-1绿色荧光蛋白真核表达载体.方法:提取胃癌组织总RNA,用TIMP-1基因引物进行RT-PCR,将扩增产物克隆至pGEM-T载体,PCR鉴定及测序证实后,BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切pGEM-T-TIMP-1重组体,回收TIMP-1,再将其亚克隆到绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C3中,并对阳性克隆进行酶切鉴定和测序分析.结果:构建的pEGFP-C3-TIMP-1表达载体分别作PCR及双酶切鉴定,证实其中有目的片段完整插入,插入片段测序结果与TIMP-1序列设计完全一致,将其转染人胃癌BGC-823细胞后,TIMP-1的表达定位在细胞胞浆内.结论:成功构建了TIMP-1绿色荧光蛋白真核表达载体,为TIMP-1的肿瘤靶向治疗研究奠定了基础.     

去整合素金属蛋白酶9和血管内皮生长因子蛋白在眼部恶性黑色素瘤中的表达

目的探讨去整合素金属蛋白酶9(A disintegrin and metallo-proteinase9,ADAM9)及血管内皮生长因子蛋白(vascular endothelial growth factor,VEGF)在眼部恶性黑色素瘤组织中的表达及其意义。方法应用免疫组织化学SP法检测49例眼部恶性黑色素瘤和9例正常眼组织中ADAM9与VEGF蛋白的表达,并观察ADAM9和VEGF蛋白表达的相关性。结果 ADAM9蛋白在眼部恶性黑色素瘤中的阳性表达率为77.6%(38/49),而在正常脉络膜组织中完全没有表达(0/9),组间比较差异有统计学意义(P=0.000);VEGF蛋白在眼部恶性黑色素瘤中的阳性表达率为73.5%(36/49),而在正常脉络膜组织中完全没有表达(0/9),组间比较差异有统计学意义(P=0.000)。ADAM9和VEGF蛋白表达均与眼部恶性黑色素瘤组织是否侵犯巩膜密切相关(均为P<0.05),而在不同性别、年龄、肿瘤大小及最大基底径间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。相关性分析表明,ADAM9和VEGF蛋白在眼部恶性黑色素瘤中的表达呈显著正相关(r=0.341,P<0.05)。结论 ADAM9和VEGF蛋白表达与眼部恶性黑色素瘤的发生、发展和转移密切相关,联合检测ADAM9和VEGF蛋白有望成为眼部恶性黑色素瘤早期诊断和判断预后的分子指标之一。