荧光分光光度法测定人血清中阿霉素含量的方法研究

阿霉素(Doxorubicin,Adriamycin,简称ADM)是一个抗瘤谱广,抗肿瘤活性强,在肿瘤化疗中常用的药物。ADM除具有骨髓抑制、胃肠道反应、脱发等毒性外,长期应用还可以发生剂量依赖性的不可逆的心肌病变,临床表现为充血性心力衰竭。当ADM累积用量达550mg/m~2以上时,约10％的患者出现上述临床症状,     

血清超滤液中游离色氨酸与血清总色氨酸的正常值测定

色氨酸在人体内参与多种代谢途径,其代谢紊乱对发育、智力、造血及神经血管调节等均有重要影响。人血清中色氨酸以游离型和结合型二种形式存在。临床观察和动物试验表明:血中游离色氨酸与脑内5—羟色胺含量关系密切,而后者是重要的抑制性递质,有人认为,其代谢紊乱是某些精神病及肝性脑病的原因之一。因此,准确测定血清游离色氨酸水平将有助于了解脑内5—羟色胺水平及探讨某些精神症状的机制,还可能为临床诊治提供有用的指标。     

非小细胞肺癌放化疗患者血清蛋白质谱分析的初步研究

目的通过对非小细胞肺癌患者放化疗前后及正常对照组血清蛋白质谱的测定,筛选差异蛋白,观察治疗前后血清蛋白质组谱变化。方法应用SELDI-TOF-MS及CM-10芯片对35例正常对照组、35例治疗前非小细胞肺癌患者及26例放化疗后非小细胞肺癌患者采集的血清样品进行蛋白质指纹图谱测定,并应用BioMarker Wizard 3.01及BioMarker Pattern System 5.01分析软件对测得数据进行处理及建立诊断模型。结果非小细胞肺癌组与正常对照组共检测到251个蛋白质峰,筛选出差异蛋白质峰16个,其中肺癌组8个蛋白质峰表达升高,8个蛋白质峰表达降低。以质荷比(M/Z)为2572.1、2885.8、3870.4、4161.4、5739.7和8164.3的6个蛋白质峰为依据组合构建分类决策树模型,原始判别总准确率为87%,敏感性为91%,特异性为83%;交叉验证总准确率为76%,敏感性为80%,特异性为71%。观察16个差异蛋白质峰的表达在放化疗前后的变化,显示均发生了不同程度的变化,趋向健康对照组,其中质荷比为2572.1、2885.8、4664.8、9228.4和9396.4的5个蛋白质峰在治疗前后发生显著变化。结论SELDI-TOF-MS技术对差异蛋白的筛选及治疗疗效的判定可能有一定的意义,需要进一步研究证明。     

荧光分光光度法测定甲氨蝶呤血药浓度的研究

自从1948年甲氨蝶呤(Methotrexate 以下称 MTX)应用于临床以来,使肿瘤疗效获得明显提高。准确掌握血药浓度对于临床工作十分重要。MTX 的动力学分析方法,多用同位素标记,灵敏度高,但方法繁琐。我们根据 MTX 在强酸溶液中有较强荧光性质,研究了 MTX 在三氯乙酸溶液中的荧光分光光度测定法,操作简便,结果稳定。测定条件与方法一、药品仪器:甲氨蝶呤(上海第十二制药厂、本室精制)、甲氨蝶呤钠(上海第十二制药厂)、三氯乙酸(上海试剂三厂)、紫外分析仪(254nm)、荧光分光光度计(RF—510,日本岛津)。二、测定条件:1.荧光产生条件:称取     

川芎炮制原理的探讨

前言中药炮制是我国历代医药学家在长期医疗实践中,逐渐积累发展起来的制药技术,对临床用药起着重要作用。经过一定的炮制方法处理后,会使某些成分发生一定的量变与质变。为了继承和发扬这项传统的制药技术,笔者用现代科学方法,对川芎炮制原理做了实验研究。实验结果表明,酒炙川芎中的波罗林(Perlolyrine)含量增高,从而证明了酒炙川芎能增强疗效。实验一、样品的准备     

IL-12对CIK细胞体外增殖及体内外杀瘤活性影响的实验研究

目的 动态观察IL-12对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)体外增殖,体内外的细胞毒活性的影响.方法 采用三种不同的细胞因子组合扩增CIK细胞,即IL-2组:IFN-γ、CD3单抗、IL-1和IL-2;IL-2加IL-12组:IFN-γ、CD3单抗、IL-1、IL-2和IL-12;IL-12组:IFN-γ、CD3单抗、IL-1和IL-12.流式细胞术分析细胞表型,细胞计数法测定细胞的增殖.MTT法测定CIK体外细胞毒活性,并通过做扫描和透射电镜,对CIK细胞杀伤的肿瘤细胞进行形态学观察.研究CIK细胞对BGC-823荷瘤裸鼠的体内抗肿瘤作用.结果 三种方法均可使细胞增殖能力显著增加,对CD3+CD56+细胞的诱导作用也无明显差异,IL-12与IL-2联合作用组促增殖能力和细胞毒性作用明显强于其他两组(P＜0.05).被CIK细胞杀伤的肿瘤细胞的死亡形式是坏死和凋亡.动物实验证实CIK有较强的体内抗瘤活性,可延长荷瘤鼠的生存期,联合IL-12与IL-2诱导的CIK细胞疗效较好.结论 IL-12同样可以用于CIK细胞的诱导,而联合IL-12与IL-2诱导的CIK细胞其增殖能力和体内外抗肿瘤活性均增强.     

两歧双歧杆菌在荷瘤鼠模型中的靶向定植及对巨噬细胞的免疫激活

目的:证实两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum, B.bifidum KLDS2.9502)在荷瘤裸鼠模型中的靶向定植作用,检测其对腹腔巨噬细胞的免疫刺激作用. 方法:建立人胃癌移植瘤裸鼠模型,尾静脉注射B.bifidum KLDS2.9502,摘取心、肝、脾、肺、肾及瘤体组织,采用石蜡包埋技术和体外厌氧培养的方法,在光学显微镜下观察双歧杆菌在荷瘤裸鼠心、肝、脾、肺、肾和瘤组织中的生存和分布情况.提取腹腔巨噬细胞,在激光共聚焦显微镜下观察巨噬细胞核内DNA和RNA的表达;MTT法和中性红吞噬试验检测荷瘤裸鼠腹腔巨噬细胞的能量代谢能力和吞噬能力;硝酸还原酶法和ELISA法分别检测巨噬细胞分泌NO和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的量. 结果:通过对组织石蜡切片鉴定、组织匀浆体外厌氧培养检测发现B.bifidum KLDS2.9502只存在并生长于瘤体组织中,并能刺激荷瘤鼠腹腔巨噬细胞能量代谢能力和吞噬能力的增强(P＜0.05),显著提高巨噬细胞分泌NO[(103.48±0.26) μmol/L]和TNF-α[(45.32±0.85 )pg/mL]的水平(P均<0.01).结论:两歧双歧杆菌能特异性定植于荷瘤鼠的瘤体中,并免疫激活腹腔巨噬细胞,提高相关肿瘤细胞毒性因子NO和TNF-α分泌水平,提示其可作为一种靶向治疗肿瘤的转基因生物载体.     

IL-2与化疗药物合用对B16黑色素瘤的细胞毒作用

目的研究IL-2与DTIC、DDP不同联合方案对B16黑色素瘤的细胞毒作用,为临床合理应用提供依据.方法采用MTT法检测各实验组的光密度(OD值),计算杀伤率.结果同时加IL-2组及先加IL-2,3小时后加DTIC组对B16抑制率降低,与单药DTIC比较有显著差异(t=3.05,P＜0.05;t=5.51,P＜0.01).同时给DDP和IL-2组或先加IL-2,3小时后再加DDP组对B16抑制率影响不大;与单药DDP比较没有显著差异(t=0.43,P＞0.05;t=0.49,P＞0.05).先加DTIC,3小时后再加IL-2组,与单药DTIC对B16的杀伤率比有所下降,但没有统计学显著差异(t=1.65,P＞0.05).先加DDP,3小时后再加IL-2组与单药DDP对B16的细胞毒作用相比,抑制率有显著提高(t=3.99,P＜0.05).结论IL-2能提高DDP的细胞毒作用,且应在先使用化疗药物的基础上给药.     

TOX3基因单核苷酸多态与中国北方汉族绝经前妇女乳腺癌风险关联的研究

目的:探讨TOX3基因单核苷酸多态与中国北方汉族绝经前妇女乳腺癌风险的关系。方法:采用多重单碱基延伸单核苷酸多态性分型技术(Snapshot)分析方法,检测280例绝经前的乳腺癌患者和287例绝经前的正常对照者TOX3基因rs3803662和rs12443621多态性位点基因型,并比较不同基因型与乳腺癌风险的关系。结果:TOX3基因rs3803662和rs12443621多态性位点基因型频率,在乳腺癌病例组和对照组之间差异无统计学意义,P值分别为0.718和0.340。Logistic回归分析结果显示,对于rs3803662位点,与GG基因型相比,GA、AA和GA+AA基因型与乳腺癌的危险性无关(OR=0.846,95%CI:0.489～1.463,P=0.549;OR=0.802,95%CI:0.470～1.368,P=0.418;OR=0.821,95%CI:0.492～1.368,P=0.449);对于rs12443621位点,与GG基因型相比,GA、AA和GA+AA基因型与乳腺癌的危险性无关(OR=0.755,95%CI:0.518～1.099,P=0.755;OR=0.850,95%CI:0.528～1.368,P=0.504;OR=0.781,95%CI:0.548～1.112,P=0.170)。结论:在目前样本条件下,TOX3基因rs3803662和rs12443621位点多态性与中国北方汉族绝经前妇女乳腺癌易感性之间无明显关联。     

小剂量rh—TNFαD3α协同阿霉素对人肺癌细胞株抑瘤率的影响

目的 研究小剂量重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a(rh-TNFαD3a)对人肺癌低转移表型(AGZY)和高转移表型(Anip973)细胞株的毒性作用及其与阿霉素(ADM)联合的协同效应。方法 采用MTT比色法检测小剂量rh-TNFα D3a及与ADM联合后对AGZY和Anip973细胞株的毒性作用。结果 ADM加TNF后,在两细胞株中均可明显降低ADM的半数致死浓度。在Anip973细胞株中,ADM各浓度组加TNF后,其抑制率均明显增加(P<0.05)。而在AGZY细胞株中只有ADM浓度在2.00μg/ml时其抑制率明显增加(P<0.05),其它浓度组变化不大。结论 小剂量rh-TNFαD3a可降低ADM的半数致死浓度,增加ADM对人肺癌细胞株的抑瘤率。