MCHR2在CHO细胞中的稳定表达及其信号通路分析

目的构建人MCHR2基因真核表达载体,在CHO细胞中进行稳定表达,并分析MCHR2介导的信号转导通路。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,定向插入到真核表达载体pcDNA3·1(+),经酶切和测序鉴定后,脂质体转染法转染CHO细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,经RT-PCR和Western blot鉴定后,通过测定细胞内cAMP、Ca2+浓度的改变分析MCHR2的信号转导通路。结果成功构建了pcDNA3·1-MCHR2真核表达载体并稳定转入CHO细胞,建立了稳定转染细胞系,成功地表达目的基因,MCH作用于MCHR2后不影响细胞内cAMP生成,可促使细胞内钙库释放Ca2+,进而使胞内Ca2+浓度出现明显而短暂的升高,提示MCHR2的信号转导通路主要是与Gq蛋白偶联。结论人MCHR2的稳定表达和信号转导通路分析为进一步体外研究MCHR2的功能提供了良好的实验基础。     

巨大卵巢囊肿扭转1例

患者 8 3岁 ,聋哑人。G8P6 ,绝经 35年。以中、下腹部持续性疼痛阵发性加剧伴恶心、呕吐 4天 ,于 2 0 0 2年 2月 6日急诊住院。 3个月前阴道月经样出血 2次 ,持续 6～ 7天 ,未治自愈。近一周来咳嗽痰多 ,无发烧。妇科检查 :外阴经产型 ,阴道及宫颈均已萎缩 ;子宫附件未能触及。查体 :体温 37.5℃ ,脉搏 10 4次 / m in,呼吸 2 2次 / min,血压 12 8/ 80 mm Hg。轻度贫血 ,全身皮肤无黄染、皮疹及出血点 ,未扪及浅表肿大淋巴结。双肺湿罗音。腹膨隆 ,腹肌尚软。腹部肿物如孕 6个月大小 ,质中 ,边界清 ,压痛及反跳痛 +++。B超示 :腹部见一上至…     

髋臼柱骨折并中心脱位手术治疗11例

应用切开复位改形钢板内治疗髋臼柱粉碎骨折并中心脱位１１例，全部解剖复位，取得牵引不能达到的效果，功能恢复快，随访１年以上７例，无疼痛和跛行，关节活动近似正常。     

某精神病专科医院精神药品应用状况调查

由于精神病人在急性期大多出现兴奋、焦虑、睡眠障碍等症状,因此,临床过程需给患者在治疗精神病的同时合用精神药品。为了进一步了解精神药品在精神病专科医院的应用状况,寻求合理用药,笔者对本院2006年1月～7月份处方进行了调查,现汇报如下。     

某精神病专科医院精神药品应用状况调查

由于精神病人在急性期大多出现兴奋、焦虑、睡眠障碍等症状，因此，临床过程需给患者在治疗精神病的同时合用精神药品。为了进一步了解精神药品在精神病专科医院的应用状况,寻求合理用药。笔者对本院2006年1月～7月份处方进行了调查。现汇报如下。     

采用MS-Fit进行肽质量指纹谱鉴定蛋白质时主要参数的优化

目的:为了优化肽质量指纹谱(Peptide mass fingerprinting,PMF)鉴定蛋白质时采用MS-Fit引擎搜索的分析参数.方法:将2-DE分离后的Carbonic anhydrase-2和BSA进行胶内充分酶解,肽段经过MALDI-TOF-MS分析得到PMF数据.选择Swissprot数据库,以Carbonic anhydrase2为模型优化搜索参数.结果:主要搜索参数的最佳设置为:半胱氨酸修饰为Carbamidomethylation,肽质量容错模型为百分数,在研究中0.1%容错数为最好.结论:本文通过标准蛋白对搜索主要参数的优化,建立了方便、可靠的MS-Fit搜索参数模式.     

仙台病毒复制序列对未成熟树突状细胞蛋白表达的影响

目的 研究仙台病毒载体复制序列对未成熟树突状细胞(dendritic cells,DC)蛋白质表达的影响,为联合运用二者进行基因治疗提供依据.方法 提取去除仙台病毒复制序列载体(Sev/△F)、完全序列载体(SeV)转染未成熟DC的总蛋白,定量.双向凝胶电泳分离蛋白质组分,胶体银染显色,PDQuest进行图像分析后选取差异点,胶内酶解后MALDI-TOF MS进行肽指纹图谱鉴定.结果 图像分析结果显示,Sev/△F感染后的DC明显比SeV感染后的DC表达蛋白点多,其中有不少蛋白表达量也明显上调.结论 仙台病毒载体感染未成熟DC后引起蛋白表达的减少,这与SeV的复制序列有关.     

精子蛋白质组学研究进展

迄今蛋白质组学技术已被广泛应用于生理与病理状态下差异蛋白表达的研究,在人类精子蛋白质组学研究方面,许多研究应用该技术对生理与病理状态下精子差异蛋白表达进行了探索,从蛋白质组水平揭示了精子不同生理与病理条件下的蛋白质表达谱的变化规律,为全面理解精子生理与病理的分子机制提供了可靠的理论依据.     

显微超声技术在疑难根管治疗中的临床应用

目的:研究牙科显微镜结合超声技术处理疑难根管中的治疗效果。方法:临床上诊断为根管钙化、塑化、根管内器械折断的根管,共168个,在显微镜下采用超声工作器械进行根管再治疗,统计根管的再治疗成功率。结果:显微镜下结合超声技术,共168个根管,再治疗成功136例,成功率80.95%。其中,钙化根管再治疗成功率为82.35%;塑化根管成功率为77.42%;根管内折断器械取出率为84.21%。结论:显微镜超声技术在处理疑难根管病例中取得了良好的治疗效果,但对于磨牙根尖1/3,尤其是狭窄弯曲根管,治疗有一定局限性。     

人MCHR2真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立

目的:构建人MCHR2真核表达载体,转染HEK293细胞,建立稳定转染细胞系. 方法:采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1( ),经酶切和PCR鉴定后,脂质体转染法转染HEK293细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,RT-PCR,Western Blot及免疫荧光法检测MCHR2的表达. 结果:成功构建了pcDNA3.1-MCHR2真核表达载体并已稳定转入HEK293细胞,建立了稳定转染细胞系,成功地表达目的基因. 结论:稳定转染细胞系的建立和基因表达为进一步研究MCHR2的功能提供了良好的实验基础.