重组人BMP-7真核表达质粒的构建及转染软骨细胞后的表达

[目的]构建重组人骨形成蛋白-7（rhBMP-7）基因真核表达质粒，转染兔关节软骨细胞，探讨外源性人rhBMP-7基因在转染软骨细胞中的表达情况及对细胞生物学性状的影响。[方法]采用PCR技术扩增rhBMP-7基因，将其插入真核表达载体pcDNA3．1中，体外分离培养兔关节软骨细胞，然后用构建的rhBMP-7质粒转染软骨细胞，经G418筛选、免疫组化染色和逆转录PCR检测其表达，同时检测表达产物对维持软骨细胞表型的作用。[结果]经过PCR及酶切鉴定证实获得了BMP-7真核表达质粒pcDNA3．1-rhBMP-7，通过免疫组化染色和逆转录PCR鉴定证实rhBMP-7在转染后的软骨细胞中得到了表达，其表达产物促进软骨细胞表型的维持。[结论]外源性rhBMP-7基因转染软骨细胞可以获得高效表达，并具有一定的维持软骨细胞表型的作用，为软骨组织工程的研究提供了改良的种子细胞。     

反义寡核苷酸对大鼠纤维化肝组织c-myb表达的影响

转录因子c-myb是一种与转录活性有关的核因子,在多种组织纤维化包括肝纤维化的形成过程中起重要作用。本研究中探讨了反义c-myb寡核苷酸对在体肝纤维化肝组织c-myb表达及肝纤维化的影响。     

c-myb反义RNA重组载体构建及其包装细胞株的建立

【目的】构建反义c-myb重组逆转录病毒载体并建立其包装细胞株。【方法】采用RT-PCR方法,获取目的基因,通过TA克隆方法克隆入pUC19,再反向亚克隆入逆转录病毒载体pDOR中。采用DOTAP法将重组逆转录病毒载体转入包装细胞,以NIH3T3细胞为靶细胞测定产病毒滴度。【结果】序列测定结果与GenBank中序列一致。c-myb基因片段已定向克隆入pDOR。细胞转染表明,已形成稳定的包装细胞株PA317/pDOR-myb,产病毒滴度达5.2×104～9.5×104CFU/mL。【结论】成功构建了含有反义c-myb的重组逆转录病毒质粒,并建立其包装细胞株。     

趋化因子RANTES水平与慢性乙型肝炎患者肝脏炎症程度的关系

[目的]了解慢性乙型肝炎患者肝脏组织趋化因子RANTES水平与肝脏炎症程度是否相关.[方法]64例慢性乙型肝炎患者和10例正常人肝组织按照炎症分级标准分为G0～G4,并用免疫组织化学染色定性及图象分析系统定量检测肝组织趋化因子RANTES表达.[结果]慢性乙型肝炎组的肝组织RANTES的表达量较正常对照组显著为高(P＜0.05);G0～G4肝组织RANTES的表达量分别为3.7±1.5,15.0±5.7,21.6±5.9,30.3±8.2和40.9±12.3阳性单位值,随着慢性乙型肝炎患者肝脏组织炎症分级的增加,肝组织RANTES的表达强度逐渐升高且各级之间比较均具有显著的差异(P＜0.05).[结论]趋化因子RANTES在慢性乙型肝炎的发病机制中具有重要的作用.     

骨形态发生蛋白7在慢性HBV感染者肝组织中的表达

 目的]通过对不同慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者肝组织中骨形态发生蛋白7（BMP-7）表达的分析,初步探讨BMP-7在肝脏炎症和肝细胞再生过程中可能发挥的作用。[方法]对56例慢性HBV感染者及5例正常对照肝组织进行常规组织学观察,按病理诊断分组。其中病毒性肝炎乙型慢性轻度12例,中度12例,重度6例,重型8例,乙肝肝硬化10例,肝癌8例。进行BMP-7的免疫组织化学染色,观察光镜下分布特点,取部分标本进行图像分析。取8例肝癌患者癌结节及3例癌旁组织进行实时荧光定量RT-PCR,检测BMP-7mRNA的表达。[结果]BMP-7阳性单位在正常人肝脏（7.27±2.88）、病毒性肝炎（乙型）慢性轻度（8.50±3.22）、中度（10.96±2.88）、重度（13.11±1.26）有逐渐增加趋势,重型肝炎（7.50±1.21）、肝硬化（8.24±1.79）较中度、重度低;进一步比较BMP-7阳性区灰度有相似结果（P值均小于0.01）。BMP-7在肝脏既有胞浆型表达,也有胞膜型表达。在慢性中度、重度患者及肝硬化结节内为弥漫性表达;但在重型肝炎患者,仅呈灶状表达;在癌周组织有弥漫或灶状表达,在癌结节表达极少。[结论]在慢性乙型肝炎患者肝组织中BMP-7表达增多,但是在重型肝炎肝组织及肝癌结节中表达减少,值得进一步研究。     

逆转录病毒介导的反义c—myb对肝星状细胞增殖及I型胶原基因表达的影响

目的：探讨反义c—myb RNA对体外培养的肝星状细胞(HSC)增殖及I型胶原mRNA表达的影响。方法：构建含有反向c—myb基因片段的重组逆转录病毒载体pDOR—myb，将其导入包装细胞PA317中，收获含病毒的培养上清，进一步感染体外培养的大鼠HSC，采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖反应，采用半定量RT—PCR检测c—myL、α1—I型胶原mRNA表达。结果：成功分离培养大鼠HSC，感染pDOR—myb病毒的HSC自身c—myb表达、细胞增殖及α—I型胶原mRNA表达显著受抑。结论：c—myb在HSC激活增殖过程中起重要作用，反义c—myb基因能抑制HSC增殖及I型胶原基因表达，这提示抑制c—myb表达可能是防治肝纤维化的有效途径。     

穗港两地甲型肝炎病毒抗体的流行病学调查

目的：调查目前穗港两地甲型肝炎病毒（HAV）的人群中的感染状况,为预防策略提供依据。方法：的穗港两地区收集社区中不同年龄的健康人群的血清标本,应用酶联免疫法（EIA）检测标本中的HAV的总抗体,统计出不同年龄人群中的感染率。结果：广州地区甲型肝炎总阳性率为57.2%,年龄别标准化阳性率为64.9%,香港地区总阳性率为60.6%,年龄别标准化阳性率为42.6%,广州地区阳性率高于较香港地区阳性率;的香港地区30岁以下人群阳性率低,仅为15.0%,30岁以上人群阳性率为80.9%,广州地区20岁以下人群阳性率为41.4%,年龄大于20岁的人群抗体阳性率为72.7%,广州地区20岁以上人群甲型肝炎病毒抗体阳性率与香港地区30岁以上人群阳性率相似,广州地区1997年人群抗体阳性率与1989年人群抗体阳性率比较无明显差异。结论：穗港两地比较年龄别标准化阳性率广州地区高于香港地区,随着生活水平的提高甲型肝炎的感染的年龄有向后推移的趋势,香港地区30岁以下人群及广州地区20岁以下人群（特别是年龄小于10岁的儿童）是甲肝疫苗接种的适合人群,广州地区甲型肝炎抗体阳性率与1989年比较无明显差异。     

院内感染SARS医护人员特异性IgG抗体水平的影响因子

目的探讨院内感染严重急性呼吸道综合征(SARS)医护人员特异性IgG抗体水平的影响因素。方法回顾性收集20例院内感染SARS医护人员的人口特征、流行病学史、临床表现、实验室检查和主要治疗措施等资料作为研究因素,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测20例SARS患者在发病后第1～36周的血清特异性IgG抗体。分类变量的研究因素比较不同结局患者之间抗体水平采用方差分析;通过一元线性回归、逐步回归分析和偏相关分析数值变量的研究因素与抗体水平之间的关系。结果SARS特异性IgG抗体水平在女性患者高于男性患者,结果有统计学意义(P=0.044);与患者在病程中的最高中性粒细胞计数呈中等程度负相关(偏相关系数=-0.636,P=0.008);与病毒唑治疗的总剂量呈高度正相关(偏相关系数=0.811,P=0.000)。结论SARS特异性IgG抗体水平的影响因素可能与病毒在体内被抑制、病毒血症的持续时间和患者发病后的中性粒细胞反应水平有关,SARS特异性IgG抗体水平与性别的关系值得进一步探讨。     

临检样本中甲型和戊型肝炎病毒IgM抗体检测的比较

目的比较分析临检样本中甲型和戊型肝炎病毒IgM抗体（抗HAV-IgM和抗HEV-IgM）检测状况。方法收集非流行年份成人临床检验样本32600份。采用酶免疫法（EIA）捕捉抗体法检测抗-HAV IgM，EIA间接法检测抗-HEV IgM。结果32600份中送检抗-HAV IgM者为1785份，阳性34例，阳性率为1．9％，送检抗-HEV IgM者1820份，阳性88例，阳性率为4．84％。比较分析显示，抗-HEV IgM阳性率相对较高（x^2=23．668，P〈0．01），且具有季节上相对分散，年龄上以30岁以上为主，性别上男女相差相对较小等特点。结论非流行年份成人临床检验样本中，抗HAV-IgM和抗HEV-IgM检出率相对较低，但相对甲型肝炎来说，戊型肝炎更值得广泛注意。