薇甘菊内酯衍生物LY19380b对人白血病细胞HEL的作用及机制研究

目的 研究薇甘菊内酯衍生物LY19380b对人白血病细胞HEL的作用及机制。方法 四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测LY19380b对不同的人肿瘤细胞的抗增殖活性,利用流式细胞术测定细胞周期,Annexin V-FITC/PI和Hoechst 33258染色测定细胞凋亡;Western blot分析LY19380b对细胞凋亡及周期相关蛋白的影响。结果 LY19380b对不同的人肿瘤细胞均具有抗增殖活性,对人白血病细胞HEL具有显著的生长抑制作用,可诱导HEL细胞发生凋亡并导致细胞周期阻滞;此外,LY19380b作用于HEL细胞后显著增加P53、BIM、BID、BAD、BAX、FLIP、P21及Cyclin B1蛋白的表达,降低Bcl-2、p-CDC25C、p-AKT、p-STAT3、p-ERK蛋白的表达。结论 LY19380b通过增加促凋亡蛋白BIM、BID、BAD、BAX的表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,诱导人白血病细胞HEL发生凋亡,上调周期蛋白P21、Cyclin B1的表达,从而导致HEL细胞周期阻滞。     

不对称分裂在造血系统中的研究进展

造血干细胞具有自我更新和分化为成熟血细胞的潜能。当机体处于正常状态时,造血干细胞通过对称及不对称分裂使体内的血液系统处于平衡状态。一旦这种平衡被打破,不对称分裂比例减少,对称分裂比例增加,造血干细胞会向恶性转化,导致白血病的发生。本文就造血干细胞不对称分裂的研究进展及其内外调控因素做一综述。     

RhoA和CDC42在急性白血病的表达异常及其意义

目的 检测急性白血病(AL)患者骨髓单个核细胞中RhoA和CDC42蛋白的表达水平,探讨Rho GTP酶相关的骨髓微环境与造血干细胞相互作用异常在白血病细胞恶性行为中的作用.方法 分离并制备54例AL患者及22名正常供者的骨髓单个核细胞的细胞裂解液,应用Western blotting方法,检测其中RhoA和CDC42蛋白的相对表达量,非配对t检验分析RhoA和CDC42蛋白在AL患者和正常供者中表达的差异,Spearman分析患者RhoA和CDC42基因的蛋白表达量与临床资料的相关性.结果 初治AL患者骨髓中RhoA和CDC42的蛋白表达水平显著高于健康人,其中急性髓系白血病M2、M3,及M5亚型患者的RhoA蛋白表达升高尤为显著,M3亚型患者的CDC42蛋白表达量升高最为显著.结论 初治AL患者骨髓中RhoA和CDC42表达显著上调,提示Rho GTP酶介导的白血病细胞迁移活跃导致骨髓微环境相互作用异常在白血病发生中起作用.     

组成活化型Rac1GTP酶通过上调促血小板血成素受体的表达促进白血病细胞的静息

目的:研究Rac1 GTP酶的活化对白血病细胞静息的影响,并探索其机制.方法:构建Rac1组成活化型慢病毒载体,以此感染急性髓系白血病KG-1a细胞,比较感染了组成活化型Rac1的KG-1a (Rac 1-V12-KG-1a)细胞和感染空载体的KG-1a(pCDH-KG-1a)细胞在G0期的比例差异.以Rac1特异性抑制剂NSC23766处理感染后KG-1a细胞,4d后检测两组细胞G0期比例的变化.实时定量PCR检测两组细胞中与细胞周期和细胞静息相关分子的表达.流式细胞术检测小鼠Rac 1GTP酶高度活化的AMLI-ETO9a白血病细胞模型中促血小板生成素受体(myeloproliferative leukemia MPL)-和MPL+细胞群在G0期的比例.结果:感染了组成活化型Rac1的Rac 1-V 12-KG-1a细胞的G0期细胞比例显著高于感染空载体的pCDH-KG-1a细胞的比例[(15.30±0.60)％ vs(11.50±0.17)％,P＜0.05];抑制剂处理KG-1a细胞后,随着抑制剂浓度的增加G0期细胞比例显著下降(P＜0.05).实时定量PCR检测结果显示,周期抑制因子P21、P27、P57的mRNA表达水平在Rac1-V12-KG-1a细胞表达均有不同程度的上调,静息相关调节分子N-Cadherin和MPL mRNA表达水平均显著升高(P＜0.05);流式检测结果显示,MPL+白血病细胞群的比例在G0期显著高于MPL组[(40.3±3.5)％vs (19.05±7.65)％,P＜0.05].结论:白血病细胞中Rac1 GTP酶的活化通过上调MPL等细胞外在调节因子的表达增加休眠期细胞的比例,从而促进白血病细胞维持静息状态.     

七叶皂甙钠治疗咽喉-头颈部炎性疾病临床应用

目的观察七叶皂甙钠治疗咽喉-头颈部炎性病变疗效,探讨其临床使用价值。方法选择58例2009年1月后住院咽喉一头颈部炎性病变患者设为A组,将2000年1-2008年12月住院咽喉-头颈部炎性病变54例患者设为B组,回顾复习B组患者治疗方法,在B组患者治疗方案基础上,调整糖皮质激素用法和用量,加用七叶皂甙钠静脉滴注,对A组患者进行治疗。结果两组中扁桃体病变或颈深部感染患者治疗时间比较,P〉0．05,无统计学差异;两组中急性会厌炎患者治疗时间比较,P〈0．05,差异具有统计学意义。结论七叶皂甙钠具有抗炎、抗渗出、抗氧化等多方面药理作用,能缩短疗程,增加疗效,减少糖皮质激素使用量,减轻副作用,对咽喉-头颈部炎性病变的治疗有独到的优势。     

N-cadherin在维持白血病干细胞特征中的作用

自我更新和抗药性是白血病干细胞的重要特征,为阐明N-cadherin参与维持白血病干细胞特征的分子机制,本研究以CD34病细胞系KG1a为研究模型,确定N-cadherin在维持白血病细胞自我更新和抗药性中的作用。通过流式细胞仪分选出N-cadherin阳性及N-cadherin阴性两群细胞,采用集落培养及化疗药物VP16分别处理两群细胞,比较二者的体外增殖及自我更新能力,以及VP16作用于两群细胞的半数抑制浓度IC50。结果显示:N-cadherin阳性的KG1a细胞的集落形成能力显著高于N-cadherin阴性细胞。VP16作用于N-cadherin阳性细胞的IC50(220μmol/L)显著高于N-cadherin阴性细胞(151μmol/L)(p=0.04);N-cadherin介导的黏附参与了N-cadherin阳性细胞的抗药性。结论:N-cadherin在维持白血病干细胞自我更新和抗药性的特征中起重要作用。     

癌蛋白iASPP对小鼠骨髓细胞增生促进作用研究

 目的　研究iASPP（一个新发现的p53家族抑制性成员）在小鼠骨髓细胞中过表达对细胞增生作用的影响。方法　构建反转录病毒载体,通过基因转导方法,使小鼠骨髓细胞过表达人类iASPP或（和）突变的N-Ras,采用集落形成实验检测细胞体外增生能力的变化。结果　转导iASPP的小鼠骨髓细胞与转导空载体对照组相比集落形成能力显著增强（P＜0.01）,转导突变的N-Ras也能提高小鼠骨髓细胞的体外增生能力,二者差异无统计学意义（P＞0.05）,但iASPP联合突变的N-Ras可使集落的数量显著多于单基因组（P＜0.05）及空载体对照组（P＜0.01）,而且集落体积增大。结论　癌蛋白iASPP可以显著提高小鼠骨髓细胞的体外增生能力,并且与突变的N-Ras具有协同作用,因而iASPP有望成为研究肿瘤及白血病治疗的新靶点。     

抗人iASPP单克隆抗体的制备及研究应用

脾脏内注射iASPP-SV真核表达质粒免疫Ba1b／c小鼠3d后,取小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞（NSl）进行常规融合。应用原核表达的iASPP-SV全长及iASPP-SV片段His-tag融合蛋白进行间接酶联免疫吸附方法筛选阳性克隆,并对亚克隆后的阳性杂交瘤细胞株所制备的腹水进行了初步生物学特性鉴定。结果获得了6株可稳定分泌特异性抗人癌蛋白iASPP单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并可以应用于Western Blot、免疫组织化学等实验。因此,本研究成功制备了抗人癌蛋白iASPP的单克隆抗体。