抑肽酶对实验性急性肝损伤模型小鼠肝组织的保护作用

目的：观察抑肽酶对实验性急性肝损伤小鼠肝组织超微结构改变的影响,探讨其对肝组织的保护作用。方法：建立小鼠急性四氯化碳（CCl₄）肝损伤模型,分为正常对照组、模型组、甘利欣注射液组及抑肽酶小、中、大剂量组。各组小鼠取肝组织做超薄切片,醋酸双氧铀-柠檬酸铅双重染色,透射电镜下观察其肝组织超微结构的改变。结果： 模型组肝细胞呈肿胀状,肝细胞核呈固缩状,胞质内粗面内质网减少、线粒体固缩、基质空化。抑肽酶小剂量组个别细胞呈固缩状,肝细胞胞质内可见少量粗面内质网和溶酶体,胆小管腔内微绒毛消失。抑肽酶中剂量组肝细胞体积稍大,肝细胞核仁明显,胞质内粗面内质网和线粒体,可见大量糖原聚集,胆小管腔内微绒毛较多。抑肽酶大剂量组肝细胞结构接近正常对照组,细胞体积较大,细胞界限清楚,肝细胞核呈圆形,胞质内粗面内质网和线粒体丰富,可见糖原颗粒。甘利欣注射液组肝组织超微结构改变与抑肽酶中剂量组相似。结论： 腹腔注射抑肽酶对实验性小鼠急性肝损伤的肝组织超微结构具有明显的保护作用,随着抑肽酶剂量的增大肝组织超微结构改变明显减轻。     

抑肽酶对实验性慢性肝损伤大鼠肝细胞增殖能力的影响

目的:探讨抑肽酶对实验性慢性肝损伤大鼠肝细胞增殖能力的影响,为抑肽酶对慢性肝损伤的保护作用研究提供理论依据.方法:Wistar大鼠随机分为正常对照组、四氯化碳(CCl4)模型组、抑肽酶小剂量组、抑肽酶中剂量组、抑肽酶大剂量组和促肝细胞生长素组,采用免疫组织化学方法检测各组增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数和形态学表现...     

抑肽酶对实验性慢性肝损伤肝组织纤维化影响的研究

关于肝纤维化机制及防治研究,目前是国内外生物学、医学研究的热点之一[1-6]。本论文利用实验鼠的四氯化碳（CCl4）慢性肝损伤模型,同时利用胶原纤维染色检测方法观察抑肽酶对实验性慢性肝损伤大鼠肝组织纤维化改变的影响,并对其作用机制进行探讨。     

人Kunitz型蛋白酶抑制剂-KD／APP的研究进展

牛胰蛋白酶抑制剂（Bovine pancreatic trypsin inhibitor,BPTI）具用广泛的蛋白酶抑制活性。但BPTI是一种异源性蛋白质,具有抗原性。     

rhKD／APPvar对实验性慢性肝损伤肝组织纤维化影响的研究

目的探讨重组人淀粉样蛋白前体Kunitz型蛋白酶抑制剂结构域变异体（reorganization human Kunitzprotease inhibitor domain of amyloid protein precursor variant,rhKD/APPvar）对实验性慢性肝损伤大鼠肝组织纤维化的影响。方法利用实验鼠的四氯化碳（CCl4）慢性肝损伤模型,采用胶原纤维染色检测方法,观察rhKD/APPvar对慢性肝损伤大鼠肝组织纤维化改变的影响。结果随着rhKD/APPvar剂量的增加,胶原纤维增生减轻。尤其以rhKD/APPvar大剂量组效果最为明显。结论 rhKD/APPvar能够显著抑制大鼠肝脏纤维化。     

老年病与维生素

近年来,维生素的概念发生了新的变化。Folke-rs等认为,维生素是一种有机物,是由外源性摄取,或是在体内内源性生成的最终活性物质,为酶系统的成分之一,以促进机体的代谢反应,是一种极微量的营养素。如维生素D,机体以前维生素D_2或D_3的形式摄取,经紫外线照射在体内转变为维生素D_3,并经肝脏和肾脏羟化形成最终活性物质1,25(OH)_2D_3后才具有维生素的作用。又如,抗糙皮病的烟酸(N-AD)在体内由色氨酸途径合成,但生成量很少,所以在NAD需要量增多时亦出现烟酸缺乏症。前列腺素等在体内也可由必需脂肪酸内源性合成,因此认为也是一种维生素。     

人胚胎关节软骨细胞库的建立

目的：体外建立人胚胎关节软骨细胞冻存、复苏的稳定技术，为软骨组织工程提供大量的、具有软骨细胞生物活性的种子细胞。方法：将传代培养的人胚胎关节软骨细胞用含10%DMSO、50%胎牛血清的IMDM培养液悬浮后，置于-196℃的液氮中长期保存，建立人胚胎关节软骨细胞库。然后将细胞库中的冻存细胞进行复苏培养，观察其生长状况，并测定软骨细胞中DNA及糖醛酸的含量。结果：冻存软骨细胞复苏后仍保持旺盛的增殖与分泌细胞外基质的功能。结论：关节软骨细胞库的建立，可以长期保存培养的软骨细胞。     

家兔肋软骨肥大软骨细胞培养及分化特点

本文从兔肋软骨的生长板软骨分离，培养了肥大软骨细胞并观察了其分化特点。培养的软骨细胞经过增殖，成熟后，细胞形成多层，形态明显肥大化，表现为大的圆形或椭圆形，包埋在大量的细胞外基质中表现出软骨组织的特点。它们能够合成软骨特异的蛋白多糖，Ⅱ型胶原及碱性磷酸酶等，并且在细胞外基质中观察到明显的钙化现象。这些细胞维持了肥大软骨细胞特有的表现型，在形态和代谢方面都表现出高度的分化特点。     

白蛋白信号肽引导天然N-端的rBPTI在毕赤酵母中高效分泌表达

目的：探讨在毕赤酵母(Pichia pastoris)中高效分泌表达具有天然N-端序列的rBPTI。方法：将白蛋白信号肽(hsasp)和bpti基因连接并构建真核表达载体pPICZ/hsasp-bpti，电击转化毕赤酵母菌株X-33，用PCR法、SDS-PAGE和胰蛋白酶抑制活性分析筛选阳性转化菌。结果：转染pPICZ/hsasp-bpti的毕赤酵母X-33工程菌能够高效地分泌表达rBPTI；培养上清中rBPTI含量约200 mg• L^-1；SDS-PAGE和质谱分析结果显示rBPTI相对分子质量分别为6 500和6 508；rBPTI的N-端测序结果表明其N-端15个氨基酸序列与天然BPTI完全一致；胰蛋白酶活性抑制分析结果表明，抑制常数Ki＝（2.6±0.1）×10^-9,与天然BPTI一致。结论：hsasp能够在毕赤酵母中高效地引导分泌表达天然N-端氨基酸序列的rBPTI,其表达量达200 mg• L^-1。