rhTRAIL对黑色素瘤A-375细胞凋亡的影响

目的：研究重组人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（rhTRAIL）对黑色素瘤A-375细胞生长及诱导细胞凋亡的影响，并探讨其可能机制。方法：将培养的黑色素瘤A-375细胞分为对照组和rhTRAIL低、中、高剂量组（0.25、0.50、1.00 mg•L^-1），经不同剂量rhTRAIL作用后，观察细胞形态；MTT法检测细胞存活分数；TUNEL法检测细胞凋亡率；流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期变化。 结果：对照组细胞呈梭形贴壁或半贴壁生长，rhTRAIL组一部分细胞变圆，贴壁不佳，细胞数低于对照组。与对照组比较，rhTRAIL明显抑制黑色素瘤A-375的生长，1.00 mg•L^-1 组的生长抑制率最高，0.50 mg•L^-1 组次之，0.25 mg•L^-1 组最低，3组间比较差异有显著性（P<0.05 )。流式细胞检测结果显示，rhTRAIL蛋白可诱导A-375细胞凋亡，rhTRAIL低、中、高剂量组细胞凋亡率分别为6.68 %、24.59 % 和28.91 %，且凋亡率随剂量增大而升高，3组间比较差异有显著性（P<0.05 )。rhTRAIL低、中、高剂量组细胞处于G₁期的百分率（45.26%、60.67%和69.10 %）明显高于对照组（37.41 %）（P<0.05 )。结论： rhTRAIL对A-375细胞生长有显著的抑制作用,呈剂量依赖性，其机制可能与细胞周期阻滞、诱导细胞凋亡有关。     

人抑瘤素M在毕赤酵母中的高效分泌表达

目的：在毕赤酵母中高效分泌表达重组人抑瘤素M（rhOSM）。方法：以人胚胎组织DNA为模板通过PCR技术获得hOSM基因,构建毕赤酵母真核表达载体pPICZαC-hOSM,电转化毕赤酵母菌株X-33,PCR法筛选阳性克隆,SDS-PAGE和Western blotting方法筛选能够稳定、高效分泌表达rhOSM的酵母工程菌。结果：经PCR法获得了hOSM基因,培养液上清经SDS-PAGE和Western blotting证实获得了相对分子质量约为28 000的rhOSM,表达量为45　mg•L^-1。结论：毕赤酵母表达系统能够稳定、高效分泌表达rhOSM,摇瓶规模表达量为45 mg•L^-1。     

人α1微球蛋白/bikunin前体cDNA的克隆与鉴定

目的:从人胚胎肝、肾和胰腺组织RNA中钓取α1微球蛋白/bikunin前体(AMBP)cDNA序列,构建其重组克隆载体。方法:采用Trizol法提取人胚胎肝、肾和胰腺组织RNA,以此为模板,应用RT-PCR技术扩增目的基因,构建重组载体pMD18-T-ambp。采用蓝白筛选,经限制性内切酶消化和DNA测序进行鉴定。结果:RT-PCR显示,仅从肝组织RNA中扩增出ambp基因片段,而肾和胰腺组织中均未检测出其 mRNA的转录。构建的重组载体经SalⅠ/EcoRⅠ双酶消化得到1098bp大小的片段,与人AMBP cDNA片段大小一致。序列分析结果显示,克隆到载体中的目的基因与GenBank上登录的人AMBP cDNA序列完全一致。结论:从人胚胎肝组织RNA中成功钓取了AMBP cDNA序列,并正确构建其克隆载体pMD18-T-ambp。     

rhKD/APP对肾脏缺血再灌注损伤大鼠的肾保护作用

目的 观察对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护和治疗.方法 取wistar大鼠60只,根据给药不同随机分为6组,伪手术组,模型组,小、中、大剂量组、对照组.造模24小时后检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(SUN)、尿NAG,并光镜、电镜观察肾脏组织病理变化.结果 各实验组与伪手术组比较Cr、BUN、NAG明显升高(P<0.05),与模型组比较rhKD/APP中、大剂量组、对照组Cr、BUN、NAG明显降低(P<0.01 or P<0.05),小剂量组无明显差异.光镜电镜观察rhKD)/APP中、大剂量组、对照组细胞损害较模型组明显减轻.结论 rhKD/APP对大鼠肾缺血再灌注损伤确实具有器官保护作用.     

溶组织梭菌胶原酶的提取及活性分析

目的　分离获得高产量、高比活性的胶原酶。方法　以溶组织梭菌作为菌种 ,确立最佳培养条件 ;应用胶原悬浮分析法测定胶原酶总活性 ;应用FALGPA胶原酶活性测量法进行比活性分析。结果　获得了高产量、高比活性的胶原酶。结论　通过改良并优化溶组织梭菌培养条件 ,可以获得低成本、高产量、高活性的胶原酶。     

多曲方丝弓配合前牙区垂直牵引下颌牙齿移动趋势的光弹性研究

目的应用三维光弹实验法研究多曲方丝弓配合前牙区垂直牵引下颌牙齿的移动趋势。方法建立与人体物理性能相似的1∶1的全牙光弹模型,对模型进行多曲方丝弓配合前牙区垂直牵引力加载,将加载后的光弹模型进行三维方向冻结切片,利用三维切力差法计算下颌牙弓上牙槽骨各点的应力值,分析单颗牙牙周组织应力分布规律及运动趋势。结果│7 的运动趋势是整体龈向压低,远中移动,冠舌向根颊向转矩,冠向远中旋转。│6的运动趋势是整体远中移动,冠向远中旋转,近中颊向远中舌向扭转。│5 的移动趋势是向伸长,冠向近中根向远中倾斜,冠舌向根颊向转矩,且整体受力较小。│3 的运动趋势是轻度压低,冠唇向根舌向转矩。│2 的运动趋势是向伸长,冠唇向根舌向转矩。结论多曲方丝弓可以在三维方向控制单颗牙齿的移动。     

rhKPI/AβPP对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的保护作用

目的 用四氯化碳致大鼠慢性肝损伤，研究rhKPI／AβPP对大鼠肝损伤保护作用。方法 采用四氯化碳（CCL4）建立大鼠慢性肝损伤和肝纤维化模型，设rhKPI／AβPP高、中、小剂量组并与促肝细胞生长素组作对照。观察大鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天门冬氨酸转氨酶（AST）、总蛋白（TP）、胆碱酯酶（CHE）碱性磷酸酶（肿）、白蛋白（ALB）、白球蛋白比（A／G）、γ谷氨酰转肽酶（γ-GT）、胆红素（T-BIL）、唾液酸（SA）、肝组织羟脯氨酸（Hyp）及肝脏组织病理改变。结果 rhKPI／AβPP可显著降低大鼠血清ALT、AST的活性及肝组织Hyp含量，抑制ALB和（A／G）比值的降低，减轻肝组织病理损伤程度。结论 rhKPI／AβPP对实验性慢性肝损伤具有保护作用和抗纤维化作用。     

大鼠角朊细胞增殖活性的影响因素

目的：探讨大鼠角朊细胞增殖活性的影响因素。方法：将传代培养的第2代大鼠角朊细胞（KCs）,以含有新生牛血清的DMEM-F12培养基进行无滋养层法培养,当细胞培养至对数生长期时,分别改用含有不同浓度表皮生长因子（EGF）、肝细胞生长因子（HGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）、霍乱毒素（CT）、氢化可的松（HVB）、胰岛素（Insulin）、三碘甲腺原氨酸（T₃）的培养液继续培养,以MTT法测定细胞增殖活性。 结果：在一定浓度范围内,EGF(5～25 μg•L^-1)、HGF(0.1～10 μg•L^-1)、FGF(0.05～2.0 μg•L^-1)、CT(2～10 μg•L^-1)、HVB(0.1～0.8 mg•L^-1)、Insulin(0.5～6.0 mg•L^-1)及T₃(0.1～2.0 μg•L^-1)对KCs的增殖均具有不同程度的促进作用。 结论：采用无滋养层法培养大鼠表皮角朊细胞时,在培养液中加入一定浓度的EGF、HGF、FGF、CT、HVB、Insulin及T₃是必要的。     

rhKD/APP对D-氨基半乳糖所致大鼠肝损伤的保护作用

用D-氨基半乳糖致大鼠肝损伤,以研究rhKD／APP对大鼠肝损伤的保护作用。建立D-氨基半乳糖大鼠肝损伤模型,设空白对照组、模型组、rhKD／APP小剂量组、中剂量组、大剂量组、对照药物抑肽酶组。观察大鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天门冬氨酸转氨酶（AST）、总蛋白（TP）、碱性磷酸酶（ALP）、白蛋白（ALB）及肝组织丙二醛（MDA）的含量变化。rhKD／APP可显著降低大鼠血清ALT、AST、ALP的活性及肝组织MDA含量,抑制ALB、TP的降低。rhKD／APP对D-氨基半乳糖所致大鼠肝损伤具有保护作用。     

颌间牵引力作用于单颗牙和弓丝上的比较研究

目的:利用三维光弹应力分析法研究前牙区垂直牵引力作用于尖牙和弓丝的牵引曲上牙弓内各牙齿的受力情况,找出更有利于牙齿移动的牵引力作用点位置。方法:制作上下颌三维光弹模型,对两组模型加载0.016英寸不锈钢圆丝,15°摇椅弓,前牙区垂直牵引力分别作用在尖牙和侧切牙与尖牙之间的牵引圈上,研究单颗牙牙槽骨各点应力值,从而描述两种加载方式下单颗牙牙周组织应力分布规律及运动趋势。结果:两种工况的共同点:■均受整体远中移动,龈向压低,冠颊向倾斜,冠向远中旋转的作用力;■均受整体远中移动,向伸长,冠向远中旋转的作用力;|23均受唇向力及向伸长力。不同点:■在工况2作用下受冠向远中旋转力大于工况1,冠颊向力小于工况1;■在工况1作用下整体颊向移动,在工况2作用下近中颊向远中舌向扭转,且整体受力大于工况1;■在工况2作用下受力稍小于工况1。结论:建议临床上进行垂直牵引以及Ⅱ类、Ⅲ类牵引时将前牙区作用力施加在弓丝上,更有利于牙齿向期望的方向移动,纠正矢状向和垂直向不调。