角膜缘干细胞缺乏动物病理模型的建立

目的：研究角膜缘干细胞缺乏动物模型建立的方法，为组织工程角膜上皮的损伤移植研究奠定动物病理模型基础。方法： 利用角膜缘上皮全周板层手术将实验动物兔右眼角膜缘后5 mm，环绕角膜缘全周将球结膜剪开，将全板层角膜及角膜缘外5 mm的球结膜组织一同剪去，用刮刀刮去角膜上皮层。术后7、14、28 d做裂隙灯检测、荧光素染色检查、PAS检测、照相，观察角膜上皮的混浊及血管化程度以确定动物模型是否成功。结果：手术1 d后实验兔右眼结膜红肿，眼睑轻度肿胀；3 d后生成红色肉芽组织，并伴随细小血管增生。7 d后荧光素染色阳性，角膜缘全周细小血管向角膜中央逐渐长入。14 d后长入角膜的结膜组织覆盖角膜。28 d后细胞印迹学检查核/浆体积比为1∶4～1∶5 ，PAS染色呈阳性,成功建立角膜缘干细胞完全缺失的病理模型。结论:可通过手术法代替化学法建立角膜缘干细胞缺乏动物病理模型，本研究为角膜病的治疗奠定了实验学基础。     

巴斯德毕赤酵母表达的人抑瘤素M发酵条件及发酵产物分析

目的：研究巴斯德毕赤酵母表达的人抑瘤素M（hOSM）大规模发酵条件。方法：利用hOSM毕赤酵母高表达菌株,于试管水平进行发酵pH条件的摸索,以补料分批培养方式在 80 L发酵罐中对hOSM工程菌进行3个批次的高密度发酵,控制和优化各种发酵条件,通过SDS-PAGE对发酵产物进行分析。结果：最终确定在pH 5.0的FM21培养基中扩增菌体,待菌体密度达190 g/L 时添加甲醇诱导,在发酵液pH 5.5的条件下,发酵温度稳定在28℃,通入空气的流量为2 vvm, 转速为650 r/min,罐内压力为10 P,溶解氧保持在25%左右,甲醇流加速度在9.3 mL/h/L 初始发酵液体积,诱导36 h时结束发酵,hOSM占分泌总蛋白的28%,产量达到280 mg?L-1。结论：应用hOSM工程菌能够进行稳定的发酵,为进行下一步生物学功能测定提供充足的物质基础。     

人分泌型Klotho蛋白在CHO细胞中的稳定表达

目的 在CHO细胞中稳定表达人分泌型Klotho（hsKL）蛋白，制备具有天然结构的重组hsKL（rhsKL）蛋白。方法 用PCR法自克隆载体pBS—hsk1中克隆hsKL DNA，构建真核表达载体pcDNA3．1／Zeo（＋）-hskl。经核酸测序确证后，阳离子聚合物转染CHO细胞。用PCR法筛选具有Zeocin抗性的阳性细胞克隆，SDS—PAGE（银染色）法确定CHO细胞分泌蛋白的分子量，Western印记法鉴定CHO细胞的培养上清液中的rhsKL蛋白，确定稳定转染细胞株CHO—hsKL。结果 经PCR法克隆的序列与Gene Bank登录的bskl mRNA序列一致。将hsKL DNA定向插入pcDNA3．1／Zeo（＋），构建pcDNA3．1／Zeo（＋）．hsk1真核表达载体并通过阳离子聚合物转染CHO细胞获得Zeocin抗性的转染阳性克隆。SDS—PAGE和Western blot分析显示，转染的CHO培养上清中含有分子量约为66kDa的rhsKL蛋白。结论 首次实现天然结构的hsKL蛋白的重组表达——获得稳定表达细胞株CHO—hsKL。     

应用肌红蛋白酶免疫固相微量测定法诊断急性心肌梗死

目的 :探讨用酶免疫固相微量法诊断急性心肌梗死的方法。方法 :用肌红蛋白 ( Mb)酶免疫方法测定血清中 Mb的含量。结果 :心肌梗死患者血清 Mb含量有不同程度的增高 ,其增高幅度与心肌梗死面积及受损时间有密切关系。结论 :血清 Mb的水平与心肌梗死程度和时间的关系是平行的 ,心肌梗死面积越大、发生时间越早则血清 Mb水平越高。     

重组人碱性成纤维细胞生长因子在大豆毛状根中的表达

目的 利用基因重组技术在大豆毛状根中表达hbFGF.方法 将hbFGF基因克隆到pCambia1301载体,以大豆子叶节和下胚轴为外植体,通过发根农杆菌C58C1介导转入到大豆中.经潮霉素抗性筛选,PCR法检测hbFGF基因的整合.用Western blot印迹分析hbFGF的表达.结果 阳性毛状根中整合并表达了hbFGF基因.结论 克隆hbFGF基因并转染到大豆的毛状根中,在毛状根中表达.     

肝纤维化发生的机制

各种致病因子作用于肝组织后,可直接导致肝细胞不同程度的损害,引起肝细胞的损伤、再生及肝纤维化等,最终导致肝功能不全,晚期则发展为肝功能衰竭。关于肝纤维化机制及对其防治的研究,近年来已成为国内外生物学、医学研究的热点之一。本文综述了肝纤维化发生的机制,并对其作用机制进行探讨。     

应用自体软骨细胞移植物修复关节软骨缺损

目的 通过体外扩增关节软骨细胞，构建软骨组织工程移植物，观察移植物对自体关节软骨损伤的修复作用。方法 由8周龄成年兔髌骨外侧缘获取关节软骨，分离软骨细胞，体外扩增后，与牛Ⅰ型胶原、人血冻干纤维蛋白原、凝血酶按一定比例混合，制成软骨培养物，体外培养4d。用于对成兔自体关节软骨损伤的移植修复。结果 成年家兔关节软骨细胞体外单层培养至第2代时开始出现去分化现象，可利用生长因子抑制去分化；该移植物的移植修复效果良好，修复后12周移植物与周边正常组织结合紧密、齐高，细胞趋于柱状排列，已形成透明软骨组织。结论 利用体外扩增的方法能获得足够量表型良好的关节软骨细胞，当应用胶原-纤维蛋白为载体制备出软骨组织工程培养物后，能较好地修复自体关节软骨损伤。     

牛心肌线粒体肌酸激酶的提纯和鉴定

肌酸激酶(CreatineKinase,EC2.7.3.2,CK)是生物能量代谢中的关键酶,具有4种CK同工酶亚基,即:肌型CK(M—CK),脑型CK(B—CK),脑型线粒体CK(Mia—CK),肌型线粒体CK(Mib—CK)。M—CK和B—CK以MM、MB、BBCK的形式存在于细胞浆中;而Mia—CK,Mib—CK以二聚体和八聚体的形式存在于线粒体内膜,参与能量的转运和储存过程。在克山病等心肌病时,线粒体的能量代谢受到明显的影响。因此,建立心肌线粒体CK的提纯方法,研究其分子特性可为克山病等心肌病发病机制提供有用的方法。     

白细胞介素——1促进肥大软骨细胞PG的分解代谢

本文了白细胞介素－１和硫代腺苷蛋氨酸对培养的肥大软骨细胞蛋白多糖分解代谢及其质金属蛋白水解酶活性的影响。ＩＬ－１β能够明显促进培养的肥大软骨ＰＧ分解，释放到培养液中的ＰＧ其分子量明显降低，缺乏透明质酸结合区。     

过量钼对家兔软骨蛋白多糖的影响

钼是人体必需微量元素之一,其含量的异常可以导致各种病理生化紊乱。用含过量钼饲料饲养实验动物,可以引起动物体重减轻、软骨组织变性坏死和基质形成不良等多种病理性变化。这些软骨损害的机制尚不十分清楚。我们用含过量钼的饲料喂养家兔,观察了过量钼对软骨蛋白多糖的影响,并对其机制进行了讨论。1 材料和方法1.1 动物饲养:取体重1.5～2.0kg的新西兰大白兔,随机分为5组,分别饲以常规饲料并加以不同剂量的钼酸铵(0、15、50、100、150mg/kg/d)。饲