人脂肪基质细胞向胰岛素分泌细胞的分化诱导

目的:体外分离培养人脂肪来源基质细胞（hADSCs）,并定向诱导hADSCs向胰岛样细胞分化,探讨hADSCs分化为胰岛素分泌细胞的潜能。方法:从脂肪抽吸物中分离hADSCs,利用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、上皮细胞生长因子(EGF)、尼克酰胺和exendin-4等因子诱导hADSCs向胰岛样细胞分化。采用RT-PCR检测诱导前后胰岛素、胰十二指肠同源性盒因子(Pdx-1)、葡萄糖转运因子2(Glut-2)和胰高血糖素(glucagon)基因的表达;双硫腙染色鉴定胰岛样细胞团;免疫荧光染色检测诱导后细胞胰岛素和Pdx-1的表达;ELISA检测诱导后细胞在低糖和高糖环境中胰岛素的分泌量。结果:诱导7 d左右细胞由长梭形逐渐变成多边形,并且细胞开始呈岛状聚集,21 d左右形成胰岛样细胞团。双硫腙染色阳性;RT-PCR显示,诱导后细胞表达胰岛素、Pdx-1、Glut-2和glucagon基因;免疫细胞化学显示,诱导后细胞表达胰岛素和Pdx-1;葡萄糖刺激实验显示胰岛素的释放,并且随着葡萄糖浓度增加胰岛素的释放量也增加。结论:体外hADSCs具有分化为胰岛素分泌细胞的潜能,为将来应用于临床移植治疗糖尿病奠定了基础。     

起始识别复合物结合位点对沉默子的辅助作用

背景：沉默子由起始识别复合物结合位点,阻遏活化蛋白RAP1等元件组成,人们对于沉默子的功能及相互关系有较多研究,但对组成沉默子的元件与基因沉默之间关系的研究很少。目的：研究起始识别复合物结合位点对沉默子基因沉默的辅助作用。方法：用右侧带有报告基因URA3的起始识别复合物结合位点,以及不带任何结合位点的序列替代酵母基因组HML区域的HML-I沉默子后,比较URA3基因表达量,并使用DNA拓扑法分析染色质的结构变化。结果与结论：HML-E沉默子单独存在的情况下,酵母无法在FOA平板上生长,但在起始识别复合物结合位点的辅助下,能够在FOA平板上生长,两者之间区域的染色质大多为负超螺旋。因此可知起始识别复合物结合位点能增加HML-E沉默子作用范围,产生这种作用的原因是两者相互作用下形成紧密的染色质结构。     

黏蛋白质手性合成多肽疫苗对BALB/c小鼠CTL的诱导作用

目的：研究由具有局部手性特征的合成多肽D-MUC1和小鼠血清白蛋白(mouse serum albumin,MSA)构成的多肽疫苗对小鼠MUCl特异性CTL的诱导作用．方法：用固相合成法合成含有D-Ser的多肽D-MUC1,纯化后与载体蛋白MSA偶联,分别以细胞因子重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和胸腺肽(TP)为佐剂,免疫BALB／c小鼠,测定淋巴细胞增殖活性、MUCl特异性CTL杀伤活性．结果：合成肽经HPLC纯化后,质谱分析证明目的肽的分子量与理论值相符;D-MUCl多肽疫苗对BALB／c小鼠淋巴细胞增殖有明显的促进作用;D-MUCl多肽疫苗诱导出的特异性CTL杀伤MUCl阳性肿瘤细胞GZ．A5．3H．4．结论：研究结果表明D．MUCl合成肽疫苗可以在小鼠体内诱导出MUC1特异性CTL,为具有局部手性特征的MUCl合成肽疫苗进行肿瘤免疫治疗提供了实验依据。     

软骨组织工程新技术的建立及其应用研究

1.软骨细胞分化调节机制的研究为在实验室条件下由软骨细胞重建软骨组织,先后研究了CDF,CATF,FCF,ConA,IGF-Ⅰ,PTH,TGF-β等八种软骨细胞分化调节因子的分离纯化和它们对软骨分化过程的调节作用。 2.由软骨细胞培养形成软骨组织的研究应用现代软骨细胞生物学和软骨细胞工程     

软骨细胞外基质对生长板软骨构建的影响

观察了各种软骨细胞外基质对骺板软骨体外构建的影响。证实了胶原、蛋白多糖和透明质酸均显著地促进培养软骨细胞的生长,然而各种软骨细胞外基质促进软骨细胞增殖分化的作用并不相同。从组织学可观察到,胶原蛋白明显地促进软骨细胞的肥大化;而蛋白糖和透明质酸抑制成熟期软骨细胞向肥大期转换。     

重组牛胰蛋白酶抑制剂对大鼠急性胰腺炎的治疗作用

目的：观察重组牛胰蛋白酶抑制剂（rBPTI）对大鼠急性坏死性胰腺炎（ANP）的治疗作用。方法：取大鼠60只，随机分成6组：假手术组、模型组、rBPTI的3个剂量组、抑肽酶组。注射牛磺胆酸钠建立大鼠ANP模型，股静脉注射给药48h后，测定专鼠血清和组织淀粉酶和脂肪酶含量，观察胰腺组织病理变化。结果：rBPTI治疗组可明显降低血清和组织淀粉酶、脂肪酶的浓度，与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01），且使胰腺的病理变化减轻。结论：rBPTI对牛磺胆酸钠诱导大鼠ANP具有治疗作用，作用效果同天然BPTI相当。     

起始识别复合物结合位点对沉默子的辅助作用

背景:沉默子由起始识别复合物结合位点,阻遏活化蛋白RAP1等元件组成,人们对于沉默子的功能及相互关系有较多研究,但对组成沉默子的元件与基因沉默之间关系的研究很少。目的:研究起始识别复合物结合位点对沉默子基因沉默的辅助作用。方法:用右侧带有报告基因URA3的起始识别复合物结合位点,以及不带任何结合位点的序列替代酵母基因组HML区域的HML-I沉默子后,比较URA3基因表达量,并使用DNA拓扑法分析染色质的结构变化。结果与结论:HML-E沉默子单独存在的情况下,酵母无法在FOA平板上生长,但在起始识别复合物结合位点的辅助下,能够在FOA平板上生长,两者之间区域的染色质大多为负超螺旋。因此可知起始识别复合物结合位点能增加HML-E沉默子作用范围,产生这种作用的原因是两者相互作用下形成紧密的染色质结构。     

冠心病患者妊娠相关血浆蛋白-A的水平及临床意义

目的：探讨妊娠相关血浆蛋白-A(PAPP-A)与冠心病发生、发展及血脂之间的关系。方法：冠心病组患者75例,包括急性心肌梗塞患者（AMI）32例、不稳定心绞痛（UAP）患者22例、稳定性心绞痛（SAP）患者21例及正常对照组60例。采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验检测PAPP-A,采用双抗体放射免疫法检测IL-6,采用ABC-HRP方法测定IL-10,采用全自动生化分析仪测定血脂。结果：①PAPP-A在急性冠脉综合征（ACS,包括急性心肌梗塞、不稳定心绞痛）患者中浓度较稳定性心绞痛和正常对照组明显偏高(P<0.05)。②PAPP-A与血清总胆固醇（TC）、ApoA1/ApoB的浓度有明显相关性(r=0.348、-0.420,P<0.05)。③IL-6、IL-10浓度冠心病患者较正常对照明显偏高(P<0.05);且在AMI、UAP、SAP组组间比较差异均有显著性（P<0.05）;PAPP-A与IL-6、 IL-10呈正相关（Spearman相关系数分别为0.446、0.523,P<0.05）。结论：PAPP-A与冠心病发生、发展关系密切,可作为冠心病粥样斑块不稳定性的重要标志。     

人Kunitz型蛋白酶抑制剂的研究进展

牛胰蛋白酶抑制剂（Bovine pancreatic trypsin inhibitor,BPTI）是Kunitz家族的丝氨酸蛋白酶抑制剂,并已广泛应用于临床。淀粉样β蛋白前体（amyloid beta-proteinprecursor,APP）包含一段Kunitz型蛋白酶抑制剂结构域（Kunitz protease inhibitor domain,KPI）,是较理想的BPTI替代品。本文复习近年来有关人Kunitz型蛋白酶抑制剂研究进展的国内外文献作如下综述。