SARS病毒刺突蛋白与TAP标签在Vero细胞内的融合表达研究

目的：探讨SARS冠状病毒（SARS-CoV）刺突蛋白（Spike protein,S蛋白）与钙调蛋白结合肽（calmodulin binding peptide,CBP）-蛋白A串连亲和纯化（tandem affinity purification,TAP）标签在Vero细胞内的融合表达及亚细胞定位,为其细胞结合蛋白的筛选奠定基础。方法：从质粒pGEM-4Z-S中扩增S片段,在5’端加入Kozak序列,并与TAP标签基因共同插入pcDNA3．1（-）中,构建出真核表达栽体pcDNA3．1-S-TAP（C）。将构建好的质粒瞬时转染Vero细胞,并共感染重组痘苗病毒vTF7-3,用间接免疫荧光及Western-blotting技术检测融合蛋白的表达及亚细胞定位。结果：成功构建出真核表达载体pcD-NA3．1-S-TAP（C）,瞬时转染Vero细胞后S-CBP-蛋白A融合蛋白[S-TAP（C）]得到表达,重组痘苗病毒vTF7-3可有效增强该融合蛋白的表达水平,且检测到S-TAP（C）融合蛋白表达于细胞膜上。结论：S蛋白与TAP标签融合蛋白表达于细胞膜上,且vTF7-3的感染有助于靶蛋白表达水平的提高,可用于S蛋白结合蛋白的筛选。     

生物芯片与新药筛选研究

生物芯片是近年来发展起来的一种能平行、快速地检测基因突变及基因表达的技术方法,是药物筛选的有力工具,在药物靶标筛选、药理学、药物基因组学、毒理学、改变药物作用方式以及中药物种的鉴定等方面都有广泛的应用.本文分别从以上几个方面对国内外近年来生物芯片在药物研究中的应用进行了综述.随着人类基因组计划的逐步实施,生物芯片在新药筛选中将有更广阔的前景.     

脑钠素与心血管疾病

脑钠素（B-type natriuretic peptide,BNP）是1988年发现的,是心脏分泌的一种激素,它属于利钠多肽家族的一种。与其它利钠多肽成员相同,对交感神经、肾素-血管紧缩素-醛固酮系统有抑制作用。BNP与心血管疾病的关系一直是研究的焦点.目前,临床上,可以通过检测BNP水平诊断呼吸困难的病人是肺源性还是心源性的。BNP对心血管疾病的诊断、治疗、预后的作用正在进一步研究中。现对脑钠素的分子生物学研究及在心血管疾病中的作用研究进展作一综述。     

星状病毒70 mer探针寡核苷酸芯片制备及杂交条件的优化

目的探讨有利于制备多种病毒长探针平行检测芯片的最佳制备及杂交条件。方法通过引物直接标记方法,对70mer探针寡核苷酸芯片的点样浓度、点样后固定方案、杂交温度、杂交时间进行优化。结果70mer寡核苷酸探针点样浓度在10μmol／L时就可获得较高的的荧光强度,探针点样干燥后在3600mJ条件下紫外交联固定效果最好,在65℃条件下杂交8h能获得最优杂交结果,所用杂交液是5×SSC（0．5％SDS、50％甲酰胺、1％鲑鱼精DNA）。结论本实验优化了70mer探针寡核苷酸芯片制备及杂交条件;此为进一步研制多种海洋环境人致病性病毒检测芯片奠定了基础。     

慢性髓性白血病的反义基因治疗研究进展

利用反义核酸技术治疗慢性髓细胞白血病(CML)是目前该病基因治疗的研究热点。研究发现,bcr/abl嵌合基因的反义DNA对CML细胞的抑制率为60％～80％,反义RNA对CML细胞的抑制率近乎100％,原癌基因c-myb的反义DNA对CML细胞的抑制率为58％～95％。关于反义技术治疗CML的研究已进入临床试用阶段。     

反义技术与肿瘤

反义技术是近年来发展起来的一种分子生物学技术,是研究基因功能及调控的新手段。在肿瘤研究方面,通过反义技术可以特异阻断细胞内单一基因表达而不致影响其他基因的正常功能,从而易于分析基因功能与转化表型的关系,进一步了解肿瘤的发病机理。在肿瘤治疗方面,通过有选择的反义DNA/RNA“封闭”或“修饰”有害的特定基因,使其丧失活力,为根治肿瘤提供了基因治疗手段。     

促进包涵体蛋白复性的几种有效添加剂

利用大肠杆菌高水平表达重组蛋白时,由于缺乏翻译后加工过程,目的蛋白通常以无活性的包涵体的形式产生。在包涵体蛋白复性过程中,溶解的蛋白质容易相互聚集生成沉淀,成为复性技术中最难以克服的问题。目前通常的做法是在复性过程中加入适当的添加剂,使其在最佳反应条件下促进蛋白质重折叠为活性形式。本文旨在介绍几种有效的促进复性的添加剂及其最佳使用条件,为研究者提供一定的借鉴。     

骨形态发生蛋白-7的研究进展

骨形态发生蛋白 7是转化生长因子 β (TGF β)超家族中的一员 ,最初因其能促进造骨细胞的分化和诱导异位骨的形成而得名。随着研究的深入 ,发现BMP 7的生物学功能不仅限于其诱导成骨活性 ,而且涉及全身许多器官的发育和形成 ,在骨、肾、肾上腺、膀胱和脑组织以及某些骨肉瘤细胞中都有表达。在许多肾脏疾病模型中 ,可以阻止肾小管间隙纤维化保护肾脏功能。     

rhBMP-7对小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响

目的:观察重组人骨形成蛋白-7(rhBMP-7)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的影响。方法:采用密度梯度离心法分离骨髓,体外培养扩增,获得小鼠骨髓间充质干细胞,贴壁培养至第3代,向培养液中加入rhBMP-7,培养5 d后进行碱性磷酸酶(ALP)染色,ALP活性与骨钙素(OC)含量检测,并用RT-PCR法分析成骨细胞标志基因骨钙素(OC)与Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)表达情况,Western blot法检测Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)蛋白的分泌量。结果:rhBMP-7诱导组的骨髓间充质干细胞的ALP染色强度、ALP活性及OC含量明显升高,OC与Col-Ⅰ的mRNA表达水平以及Col-Ⅰ的蛋白表达水平均明显提高。结论:rhBMP-7可促进体外培养的小鼠BMSCs向成骨细胞方向分化。