自身免疫性疾病抗体检测微阵列制备条件的优化和初步应用

目的优化制备蛋白质微阵列的几个关键因素,初步建立自身免疫性疾病抗体检测微阵列,以期用于自身免疫性疾病的诊断。方法选择与制备蛋白质微阵列有关的4个因素,即温育时间、封闭剂、封闭时间和与二抗结合时间,进行正交优化,得出制备蛋白质微阵列的最优化条件,并根据该条件,进一步确定6种自身抗原适合的点样浓度及血清的最佳稀释度。根据优化条件,制备出同时检测6种自身抗体的微阵列,并初步应用,与间接免疫荧光(IIF)法和酶联免疫吸附试验(ELISA)法加以比较,对结果进行评价。结果制备蛋白质微阵列的最佳优化条件是温育2h,封闭剂采用含有1%小牛血清白蛋白和2．5%蔗糖的PBST,封闭时间为30min,与二抗反应30min,6种自身抗原适合点样浓度从100μg/ml到300μg/ml不等,最佳血清稀释浓度是1∶2。微阵列法对抗核抗体(ANA)的检测与IIF法相比,灵敏度是88．6%,特异度是83．3%,微阵列法对其他5种自身抗体的检测与ELISA法相比,灵敏度在80．0%～88．2%之间,特异度在90．2%～98．6%之间。结论上述优化条件适合于制备自身免疫性疾病抗体检测微阵列,微阵列检测结果与现有常规方法检测结果比较一致,值得推广应用。     

PCR-SSCP-银染法检测异烟肼耐药结核杆菌katG基因突变

异烟肼(INH)是抗痨治疗方案中最主要的药物之一,但结核杆菌(TB)对其耐药现象日趋严重。传统的TB耐药检测方法为生长依赖性药敏检测法,需4～8周的时间,即使使用了昂贵的BACTEC460TB系统快速培养法(下称Bactec法),完成这一检测也需要2～3周。我们采用PCR-SSCP-银染技术(下称...     

Deoxyribozymes的研究进展

具有 RNA裂解活性的 DNA分子称为脱氧核酶。它是经过体外选择技术经多次筛选获得的。脱氧核酶在切割与其互补的 RNA底物分子时具有极高的特异性和切割效率 ,有望成为新的 RNA灭活工具     

2010年骨分子生物学研究进展

2010年骨相关细胞生物学、骨组织矿化、骨发育、骨构塑与重建领域均有不同程度的研究进展.已知骨相关组织细胞分化及功能调控因子的作用机制得到深入研究并发现新的重要调节因子,其中再生蛋白(neogenin)在软骨细胞肥厚分化中的作用尤其引人关注,首次发现微小RNA(microRNA)在破骨细胞分化中的作用.软骨内成骨和骨组...     

重组人骨形态发生蛋白-7抗体的制备及鉴定

目的利用重组人骨形态发生蛋白-7（rhBMP-7）制备抗体,为BMP-7临床应用奠定基础。方法采用皮内多点注射法将rhBMP-7免疫新西兰大白兔4次,每次间隔2周。免疫后颈动脉插管取血。ELISA法测定抗血清效价,蛋白免疫印迹技术确定抗血清特异性、最佳稀释度、灵敏度。结果抗血清效价为1：640000;通过从小鼠骨组织及肾脏组织中提取的BMP-7证实抗体有很好的特异性,抗血清的最佳稀释度为1：5000-1：50000,灵敏度为1～100ng。结论成功制备了rhBMP-7抗体,该抗体具有很高的特异性及灵敏度。