人脐带间充质干细胞分化为心肌细胞的实验研究

目的 探讨人脐带间充质干细胞(MSCs)在体外向心肌细胞分化的能力及移植后对急性心肌梗死大鼠心功能恢复的影响.方法 胶原酶胰酶消化法分离脐带MSCs.取第4-6代脐带干细胞,采用5-氮胞苷诱导,免疫组织化学和免疫荧光法对诱导后细胞进行鉴定.建立大鼠心肌梗死模型,并按完全随机法将其分为2组(n=10):细胞移植组和空白对照组.将培养脐带MSCs移植到大鼠梗死心肌周围,4周后,免疫荧光法鉴定移植细胞,并超声检测心功能改变.结果 体外诱导后,细胞的形态不断发生变化,诱导后的细胞表达心肌特异性α-肌动蛋白、肌球蛋白和肌钙蛋白T,阳性率在50%以上.细胞移植4周后,脐带MSCs在缺血心肌内存活并分化为心肌样细胞,心功能检测显示脐带MSCs移植组大鼠在移植后4周的左心室射血分数[(68.4±15.2)%]比对照组大鼠明显增加[(53.2±13.4)%,P＜0.05].结论 人脐带MSCs能够在体内外分化为心肌样细胞,并能促进心脏功能的恢复.     

脐带间充质干细胞分化为内皮细胞的实验研究

我们采用酶消化法,成功从脐带组织中分离出间充质干细胞1,2.在本实验中,我们研究在VEGF和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的作用下,脐带间充质干细胞能否向内皮细胞分化,为组织修复和组织工程移植物再血管化提供一个新的细胞来源.     

脐带源间充质干细胞向神经细胞分化的潜能分析

应用免疫组化和RT—PCR方法检测脐带源间充质干细胞（MSC）表达神经细胞标记情况,以分析其向神经细胞分化的潜能。发现脐带源MSC表达多种神经细胞标记,包括神经干细胞标记Nestin、神经元标记Tubulin以及神经胶质细胞标记GFAP,在蛋白和分子水平提示脐带源MSC具有向神经细胞分化的基础。     

大鼠胎盘来源间充质干细胞的生物学特性

背景:研究报道,人间充质干细胞用于实验动物研究的结果不令人满意,所以考虑使用大鼠胎盘来源的间充质干细胞用于动物实验研究,以期获得更好的实验结果。查阅国内外相关文献,目前尚未发现大鼠胎盘来源间充质干细胞的相关报道。目的:建立从大鼠胎盘分离间充质干细胞的方法,观察其基本生物学特性。方法:通过胶原酶消化法从大鼠胎盘分离并得到间充质干细胞。每天用倒置显微镜观察其形态。用MTT法测定其生长动力学并绘制生长曲线。用流式细胞仪检测其表型及细胞周期。通过免疫组化法证实其成脂及成骨分化的潜能。结果与结论:原代细胞培养8h后细胞贴壁,24h内细胞形成集落,第4代细胞大小、形态基本一致,以梭形为主。细胞周期检测提示G0/G1期、S期、G2期的比例分别为83.76%,8.01%,8.23%。免疫表型分析其表达CD29和CD90,不表达CD45。体外诱导实验证实胎盘间充质干细胞具有成脂和成骨分化的潜能。     

血管内皮生长因子基因反义核酸体外抑制K562细胞生长及机理研究

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义核酸抑制K562细胞生长的机理;以及反义药物的量效和时效关系,揭示VEGF基因新的功能。方法:用反义核酸X7,20-mer,全硫代修饰;以脂质体介导进行转染,细胞培养72h,用MTT法计算细胞生长抑制率,采用台盼蓝拒染法每24h观察细胞存活情况并计数,用Giemsa染色观测细胞形态学改变,用流式细胞仪检测细胞凋亡百分数。结果:反义药物对K562细胞生长有明显抑制作用,呈剂量依赖关系,并且下调VEGF蛋白的表达,反义药物对K562细胞的凋亡无影响。结论:VEGF反义药物抑制K562细胞生长的机理是抑制细胞增殖,而不是促进细胞凋亡,内源性VEGF蛋白具有促进K562细胞增殖的功能。     

雷帕霉素对再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞生物学功能的影响

本研究探讨雷帕霉素对再生障碍性贫血（aplasticanemia,AA）患者的骨髓间充质干细胞的生物学功能和自噬现象的影响,为研究雷帕霉素应用于临床再生障碍性贫血的治疗提供资料。不同浓度雷帕霉素（0、10、50、100nmol／L）处理AA患者BM—MSC48h,然后用Westernblot检测自噬相关蛋白LC3B的表达,应用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期的变化,CCK-8法测定细胞增殖情况,以BM—MSC成脂分化诱导2周后油红染色方法检测成脂分化能力,并且用real—timePCR检测成脂相关基因（LPL、CFD和PPART）的表达。结果显示：雷帕霉素引起AA患者的BM—MSC自噬增加,促进其凋亡（P〈0．05）,且呈剂量依赖性地将细胞阻滞于Go／G1期,阻止其进入S期（P〈0．05）;BM-MSC增殖率随雷帕霉素浓度增加而降低,并且雷帕霉素抑制AA患者BM—MSC的成脂分化,且呈剂量依赖性。结论：雷帕霉素诱导AA患者BM—MSC发生自噬和凋亡,明显促进G,期细胞周期阻滞,抑制细胞增殖和降低成脂分化,以上现象的机制可能与雷帕霉素通过抑制mTOR信号通路而激活自噬有关。     

成体干细胞与细胞心肌成形术

目前在心脏外科领域,虽然冠心病的治疗取得很大进展,但由于心肌梗死后无法再生或再生能力有限,心肌梗死及其导致的心力衰竭等心血管疾病仍是危害人类健康的头号疾病。对终末期心力衰竭者,心脏移植可能是唯一的治疗手段,但是,由于供体缺乏大大限制了其的临床应用,且大量免疫抑制剂的应用还可能降低病人生活质量。细胞治疗,又称细胞心肌成形术,即将细胞移植至心肌梗死区,增加或保持心肌细胞数量、促进局部血管新生,恢复局部血液供应,促进损伤心肌的功能恢复,可能成为治疗终末期缺血性心脏病的一种新方法。     

脐血血管内皮祖细胞的分离和诱导分化

目的 从脐血中分离内皮祖细胞，诱导其向内皮细胞分化，研究内皮祖细胞的生物学特性和诱导分化条件。方法 从新鲜脐血中纯化的CD133^ 细胞接种于添加了VEGF、bFGF、IGF—1的M199培养液中，观察梭形贴壁细胞的出现时间和特异性细胞标志。结果 培养3—4d可观察到梭形贴壁细胞，14d左右可形成索条状结构，贴壁细胞表达血管内皮细胞特异性标志VE-cadherin,vWF,UEA-1和VEGFR-2。结论 脐血中含有内皮祖细胞，在一定的条件下，可分化为内皮样细胞。     

血管内皮祖细胞的研究进展

在胚胎发育过程中，血管系统的建立始于两种方式：血管发生和血管新生。传统理论认为血管新生即是出生后血管发生的代名词。然而，近的来发现循环中存在骨髓来源的血管内皮祖细胞，并与出生后血管发生密切相关，具有重要的生理、病理意义。这不仅拓展了干细胞的研究，也为缺血性疾病和肿瘤的治疗提供了新策略。本文简述了血管内皮祖细胞的来源、细胞表面标志、生物学特性、生理病理意义及其临床应用前景。     

干细胞技术与组织器官修复再造

干细胞 (stemcells)对于大多数人来说还是一个陌生的名词 ,由于干细胞功能的阐明及其应用技术的进展使科学家和医生开始真正认识到 ,许多危及生命健康的难治性疾病的治疗需要从生命的源头—干细胞直接入手。1　什么是干细胞 ?干细胞是具有自我复制和多项分化潜能的原始细胞 ,是机体的起源细胞 ,是形成人体各种组织器官的祖宗细胞。从干细胞发育分化过程可以看出 ,精子与卵细胞结合先分化增殖形成若干个子代细胞 ,又称全能细胞 ,后者继续分化增殖形成囊胚。全能胚胎细胞和囊胚内细胞群的细胞统称胚胎干细胞 ,具有形成人体各种组织的全能性。…