抗纤灵方对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1-Smad通路的影响

目的： 研究中药复方抗纤灵对单侧输尿管梗阻（UUO）所致肾纤维化大鼠TGF-β₁-Smad通路的影响，借以初步探讨其发挥疗效的作用机制。方法: 雄性SD大鼠18只随机分为3组，假手术组、模型组、中药治疗组。用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型，抗纤灵治疗两周后检测梗阻肾羟脯氨酸含量；HE染色和电镜观察肾组织病变；采用RT-PCR检测肾组织TGF-β₁ mRNA水平；蛋白免疫印迹法检测肾组织转化生长因子I型受体（TβRI）、转化生长因子II型受体（TβRII）、Smad2蛋白表达及磷酸化变化。结果: 与假手术组比较，模型组大鼠梗阻肾羟脯氨酸含量明显增多；病理观察可见肾小球毛细血管基底膜明显增厚，间质成纤维细胞和胶原沉积明显增多；肾组织TGF-β₁ mRNA及TβRI、TβRII蛋白表达显著增多，Smad2蛋白磷酸化及总蛋白表达水平均显著增多。与模型组比较，中药干预组大鼠梗阻肾羟脯氨酸含量明显减少；肾小球和肾小管基底膜仅见轻度增厚，间质成纤维细胞和胶原沉积较模型组减轻；肾组织TβRI、TβRII蛋白表达明显下调，Smad2蛋白磷酸化及总蛋白表达水平均明显下调。结论: 抗纤灵可抑制单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β₁-Smad通路，抑制梗阻肾TβRI、TβRII、Smad2蛋白表达及Smad2蛋白磷酸化，从而改善梗阻性大鼠的肾间质纤维化，减少纤维化肾脏中胶原蛋白含量。     

20(S)-PPD促内质网应激诱导人脐静脉内皮细胞凋亡

目的:观察原人参二醇(protopanaxadiol,PPD)中20(S)-PPD对人脐静脉内皮细胞凋亡的作用并探讨其作用机制。方法:20(S)-PPD处理人脐静脉内皮细胞,MTT法检测细胞增殖,DAPI染色检测细胞核形态变化,Calpain活性检测试剂盒检测胞质Calpain活性,内质网荧光探针3,3-二己基恶羰花青碘化物染色检测细胞内质网形态变化,实时定量PCR检测拼接XBP-1以及CHOP mRNA水平,Western blot检测Caspase-3、Caspase-8、bax、bcl-2、ATF-6、磷酸化IRE1、磷酸化PERK、ATF-4以及CHOP蛋白水平。结果:20(S)-PPD 10μmol/L以上处理人脐静脉内皮细胞6 h或5μmol/L以上处理24 h均能显著抑制其细胞活力。20(S)-PPD 10μmol/L处理人脐静脉内皮细胞6 h后,DAPI染色发现细胞出现明显染色质固缩及核碎片;内质网荧光探针3,3-二己基恶羰花青碘化物染色显示内质网形态发生显著变化,出现内质网碎片并且在核周聚集成颗粒;胞质Calpain活性未见显著改变;Western blot检测到凋亡相关蛋白Caspase-3活性片段,Caspase-8表达水平无显著变化且未检出其活性片段,bax表达未见显著改变,而bcl-2表达显著下调,ATF-6表达未见显著改变,磷酸化IRE1显著增加;实时定量PCR结果显示拼接XBP-1s mRNA显著增加,磷酸化PERK及ATF-4显著增加,CHOP mRNA及蛋白水平显著增加。结论:20(S)-PPD通过内质网应激激活IRE1与PERK途径,进一步下调bcl-2而导致人脐静脉内皮细胞凋亡。     

营养学专业教学实验更新的探讨

实验教学是营养学专业整个教学过程中的重要环节,实验教学在其教学中占据重要地位.结合目前上海中医药大学营养学专业实验教学开展的实际情况,探讨通过对该专业教学实验内容、实验方法和技术等的更新,激发学生学习兴趣,以培养营养学专业的创新型高素质人才.     

补肾益气方对老年大鼠内源性皮质酮分泌及IL-2基因表达的影响

目的:观察补肾益气方对自然衰老大鼠皮质酮及IL-2基因表达的影响。方法:将20月龄老年大鼠随机分为对照组与补肾组,各10只。另设3月龄青年组。其中老年补肾组自分组日起以饮料方式饲喂补肾益气方药液,连续3个月,其余两组予正常饮水和饲料。于干预3月结束时,取腹主动脉血和脾脏。采用ELISA法检测大鼠血清IL-2含量;EIA法检测大鼠血清皮质酮含量;qRT-PCR法检测大鼠脾淋巴细胞中IL-2、糖皮质激素受体(GR)mRNA的表达;Western blotting法检测大鼠脾淋巴细胞GR蛋白表达。结果:与青年组相比,老年对照组大鼠血清皮质酮含量明显升高(P0.05),血清IL-2含量明显降低(P0.05),脾淋巴细胞IL-2 mRNA、GR mRNA和蛋白表达明显下降(P0.05);与老年对照组比较,老年补肾组血清IL-2水平明显升高(P0.05),GR mRNA和蛋白表达明显升高(P0.05)。结论:补肾益气方可通过调节老年大鼠异常的皮质酮/糖皮质激素受体通路,改善IL-2基因表达的增龄性衰退。     

六味地黄丸对2型糖尿病大鼠胰岛形态的影响

目的:研究六味地黄丸对高糖高脂饲料喂养联合低剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)注射的2型糖尿病大鼠胰岛形态的影响。方法:高糖高脂饲料喂养5周后腹腔注射低剂量的STZ(40mg/kg)制备大鼠2型糖尿病模型。予六味地黄丸水煎剂治疗3周,动态观察治疗后的饮食量、体重、空腹血糖(FBG)变化,3周末检测血清游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、血清胰岛素(INS)水平,计算胰岛素敏感性指数(ISI),并在光镜和透射电子显微镜下观察胰腺形态学变化。结果:与模型组比较,六味地黄丸组在用药2周末饮水量明显减少,3周末进食量减少,FBG出现降低的趋势,FFA降低,ISI显著升高,形态学显示胰岛β细胞数量增多,细胞内分泌颗粒丰富,胰岛周边部导管上皮样细胞增多,并向胰岛中央移行。结论:六味地黄丸对高糖高脂饲料喂养联合低剂量STZ注射的2型糖尿病大鼠胰岛结构具有保护作用。     

在中医药院校开展生物化学课程双语教学的体会

双语教学是促进中医药现代化发展和创新人才培养的重要教学改革内容之一。在开展生物化学课双语教学过程中,结合中医院校学生的特点与培养目标,通过调研及论证,不断优化课程内容,积极培训师资,丰富教学形式,开设实验课程,取得了良好的教学效果,为中医院校基础课的双语教学积累了一定的经验。     

寒热体质大鼠TRPV1通道表达的研究

目的:研究寒、热体质大鼠大脑皮质辣椒素受体(TRPV1)通道表达及热痛阈的差异。方法:以两后掌表面皮肤温度为主要指标,结合自主活动及一般情况,从自然群体大鼠中筛选出常体、寒体及热体大鼠,通过光照热痛照射仪测定各组大鼠热痛甩尾潜伏期,比较不同体质大鼠的热痛阈差异。取大鼠大脑皮质,用实时荧光RT-PCR(SYBR GreenⅠ)检测TRPV1通道mRNA表达;蛋白质印迹法(Western Blot)检测TRPV1通道蛋白表达。结果:热体组大鼠热痛甩尾潜伏期时间显著低于常体组和寒体组(P0.01);热体组大鼠大脑皮质TRPV1通道mRNA相对表达量显著高于常体和寒体组(P0.01);热体组大鼠大脑皮质TRPV1通道蛋白相对表达量高于寒体组(P0.05)。结论:寒、热体质大鼠大脑皮质中TRPV1通道mRNA、蛋白表达及热痛阈均存在差异。     

黄芪黄酮对低渗造成的血管内皮细胞单层通透性增高的改善作用

新生牛主动脉分离获得单个内皮细胞培养于微孔滤膜上直至形成致密单层。通过灌流含5g/L白蛋白的Hanks液后, 测定经低渗溶液处理（将M199溶液中含的20％血清改成2％血清）或经低渗溶液加10^-4g/ml黄芪总黄酮或10^－4g/ml黄芪毛蕊异黄酮处理的液体滤过系数（Kf）、液体滤过流量（Jv）和蛋白质渗透压反射系数（σ）。内皮单层低渗溶液处理后,Kf和Jv降低,σ升高;而总黄酮和毛蕊异黄酮能抑制因低参造成的Kf和Jv的降低及σ升高。形态学分析表明总黄酮、毛蕊异黄酮能够 抑制因低渗造成细胞肿胀和细胞间距离的增宽。结果表明低渗能够 引起血管内单层通透性的增加,而黄芪黄酮能够减轻低渗造成的内皮单层通透性的增加。     

生肌化瘀方及其拆方对大鼠创面成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响

目的:探讨生肌化瘀方及其拆方促进创面修复(呈皮肤修复)的作用机理.方法:采用体外培养创面肉芽组织成纤维细胞,以乳鼠皮肤成纤维细胞作对照,分别加入生肌方、化瘀方及生肌化瘀方大、小剂量药物血清,运用细胞化学ABC法检测成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量.结果:生肌方能够提高创面成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原含量,且均高于模型组(P＜0.01);化瘀方能够降低创面成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原含量,且低于模型组(P＜0.01);生肌化瘀方大、小剂量组Ⅰ、Ⅲ型胶原含量与正常组比较差异均无显著性(P＞0.05).结论:生肌化瘀方能够促进创面修复,其可能的作用机理是通过调节Ⅰ、Ⅲ型胶原的比值来调控Ⅰ、Ⅲ型胶原代谢.     

医学实验室基本技能操作课程的探索与实践

<正>上海中医药大学教学实验中心成立于2003年,实现了人员、实验教学设施和场地的整合,并承担了学校全部实验教学任务。"医学实验室基本技能操作"是本中心自2005年起开设的一门课程,以机能综合实验室、免疫学与病原微生物学实验室、形态学实验室、生物化学与分子生物学实验室为实验场所,将以上实验室中常用的实验技术手段对中医专业学生进行教学和训练。