微囊化细胞冻存的研究进展

背景:细胞微囊化为细胞大规模、高活性体外培养及长期存储提供了新的途径,低温保存是目前保存细胞的重要方法,技术日新月异,复苏细胞在临床和基础研究中的应用越来越多.目的:分析近年来微囊化细胞冻存的相关研究,对微囊化细胞冻存技术的发展作一总结.方法:以"微囊,冻存"为检索词,检索中国期刊网(1979/2010)及维普数据库(1989/2010),限定文章语言种类为中文;以"Cryopreservation,Microencapsule"为检索词,检索PubMed数据库(1979/2010),限定文章语言种类为English.纳入含有微囊化细胞冻存的研究,排除其他形式细胞冻存的研究,结果以各种细胞微囊化后进行冻存处理后产生作用为指标,共检索到43篇文献.结果与结论:随着生物人工肝与以及其他细胞移植研究的深入,对微囊化细胞的需要量将显著增加,微囊化细胞的低温保存技术已成为保正其顺利应用的关键技术之一.目前,微囊化细胞的低温保存技术已经开展了不少研究,有多项研究结果表明复苏后微囊化细胞的存活率和生物学功能都能保持较好的水平,但相关机制仍未完全阐清,各种冻存方法还需要优化.     

微载体cytodex 3大量扩增成人骨髓间充质干细胞的初步研究

目的建立一种体外分离、大量扩增培养成人骨髓间充质干细胞(hMSCs)的方法.方法用Percoll梯度离心结合贴壁法分离hMSCs,用微载体cytodex 3培养hMSCs,以普通单层聚苯乙烯(TCPS)培养作对照,用流式细胞仪(FCM)和MTT法对其细胞表型和增殖活性检测.结果①梯度离心结合早期换液是分离hMSCs的较好方法,FCM检测表明hMSCs表面表达CD29、CD44和CD105,而不表达CD14、CD34、CD45、VLA-1和HLA-DR.hMSCs细胞周期分布显示:G 0/G 1期(86.4±3.8)%,S+G 2+M期(13.6±4.2)%;②hMSCs与cytodex 3有良好的相容性, MTT法表明hMSCs在cytodex 3表面悬浮生长时具有比普通单层TCPS培养时更高的数量和增殖活性,FCM分析表明两者的细胞表型和细胞周期分布相同,无显著性差异(P>0.05).结论微载体cytodex 3培养方法是扩增组织工程种子细胞hMSCs的有效方法.     

构建与人肝细胞系L02相容的聚丙烯生物杂化界面

学术背景：具有良好生物相容性的肝细胞/聚合物界面是生物反应器设计和构建的关键因素,然而,目前临床实践中使用的生物反应器并不理想。目的：构建与人肝细胞相容的聚丙烯生物杂化界面,为用聚丙烯中空纤维管构建生物人工肝反应器奠定基础。设计、时间及地点：对比观察,细胞相容性实验,于2003-02/10在上海交通大学完成。材料：聚丙烯利用光化学接枝聚合改性技术,在微孔聚丙烯超滤膜表面通过化学键的形式接枝亲水性丙烯酰胺基团形成接枝改性微孔聚丙烯超滤膜。方法：将人肝细胞系L02接种于聚丙烯膜、接枝改性聚丙烯膜表面,以聚苯乙烯作为正常对照。主要观察指标：聚丙烯膜接枝改性前后的静态水相接触角度;人肝细胞系L02在不同材料表面形态、贴壁率及增殖活性。结果：聚丙烯膜接枝改性后的静态水相接触角小于接枝前（P〈0.05）。人肝细胞L02在改性后聚丙烯膜上的贴壁率为0,细胞成球形聚集体生长,其增殖活性明显高于聚苯乙烯和改性前聚丙烯膜。结论：在聚丙烯表面接枝聚丙烯酰胺可建立良好的人肝细胞系L02与聚丙烯生物杂化界面,并可通过简单的静止培养形成肝细胞球形聚集体。     

微囊胰岛移植的实验研究进展

微囊胰岛细胞移植后能改善糖尿病的糖代谢异常,并实现对血糖的持续监测和调节,且微囊的免疫隔离作用能消除或减轻受体对异体或异种免疫排斥反应,减少或消除对免疫抑制剂的依赖.合适的囊材、合理的工艺、先进的制囊设备和胰岛分离提纯技术、适宜的移植位置能增强微囊胰岛细胞的抗机械强度,提高生物相容性,减少囊周纤维化现象,改善人工胰岛细胞的功能,延长存活时间.     

7例胰腺腺鳞癌的临床诊治

目的：总结胰腺腺鳞癌的诊治经验,以提高对该病的认识和诊治水平。方法：对2001年10月至2006年10月收治的7例胰腺腺鳞癌病人的临床资料进行回顾性分析。结果：7例胰腺腺鳞癌病人的肿瘤位于胰头部者5例,胰体尾部2例;肿瘤的平均直径为（3.57±1.48）cm;行胰十二指肠切除5例,其中1例合并部分肠系膜上静脉切除重建,胰体尾切除2例术后病理示2例伴有淋巴结转移,2例合并有神经侵犯,1例侵犯十二指肠,1例侵犯左侧肾上腺包膜,1例胰腺切缘阳性;获随访的6例,死亡4例,术后生存12.5～55个月,平均26.6个月。结论：胰腺腺鳞癌是一种少见的胰腺恶性肿瘤,组织学上肿瘤由导管腺癌成分和鳞状细胞癌成分混合构成,其临床表现与胰腺导管腺癌相似。通过早期诊断与手术结合放、化疗的综合治疗可提高疗效。     

人肝细胞/微孔聚丙烯杂化界面的生物相容性

背景:生物反应器膜材料不仅具备双向物质交换、良好的理化特性,还要具有良好的生物相容性。目的:评价人肝细胞/微孔聚丙烯杂化界面,即接枝改性微孔聚丙烯超滤膜的生物相容性。设计、时间及地点:动物实验观察,于2005-09/2007-10 在上海交通大学医学院附属瑞金医院器官移植中心(上海消化外科研究所)实验室和浙江大学高分子材料研究所共同完成。材料:选用孔径为 0.2 μm,分子截流量为Mr 50 000~100 000 的微孔聚丙烯超滤平面薄膜为实验模型,利用光化学接枝聚合改性技术,在聚丙烯超滤膜表面通过化学键的形式接枝亲水性丙烯酰胺基团,成功地构建一种人肝细胞/微孔聚丙烯杂化界面,即新型的生物人工肝生物反应器膜——接枝改性微孔聚丙烯超滤膜。方法:参照国际标准化组织 ISO10993-1:1992医疗器械生物学评价标准和要求进行溶血试验、细胞毒性试验、全身急性毒性试验、热原试验、皮肤和皮内刺激试验,评价接枝改性微孔聚丙烯超滤膜的生物相容性。主要观察指标:接枝改性微孔聚丙烯超滤膜浸提液的溶血试验、细胞毒性试验、全身急性毒性试验、热原试验、皮肤和皮内刺激试验结果。结果:接枝改性微孔聚丙烯超滤膜的溶血率为 1.90%< 5%,表明其无致溶血性;其浸提液对 L929 细胞增殖活性无明显的抑制作用;注射接枝改性微孔聚丙烯超滤膜浸提液后24,48,72 h,所有小鼠无死亡,体质量无明显变化,未观察到眼睑下垂、呼吸困难、发绀、腹部刺激症、腹泻、运动减少、震颤等全身急性毒性反应。热原试验中兔体温变化范围-0.2~0.4,符合生物医学材料无热原的评价标准。皮肤刺激实验中仅 1 例有极轻微的红斑,积分 1 分,其原发刺激指数为 0.25 < 0.4,皮内刺激试验结果原发刺激指数为0.2,平均原发刺激指数为 0.068,均< 0.4,无皮肤刺激性。结论:人肝细胞/微孔聚丙烯杂化界面,即接枝改性微孔聚丙烯超滤膜无致溶血性、细胞毒性、致热原性和皮肤刺激致敏性,证实通过光化学接枝丙烯酰胺后具有良好的生物相容性。     

MicroRNA 101对乳腺癌细胞运动和迁移能力的影响

目的:探讨microRNA 101(miR-101)的表达对乳腺癌细胞增殖、运动和迁移能力的影响,并初步分析miR-101影响乳腺癌细胞生物学行为的可能机制。方法:采用实时荧光定量PCR的方法检测miR-101在乳腺癌组织及乳腺癌细胞中的表达情况,再用脂质体介导转染的方法将miR-101模拟物及阴性对照转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,通过细胞增殖实验(CCK8方法 )、划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞的增殖、运动、迁移能力。通过Western印迹方法分析miR-101发挥功能的可能机制。结果:与正常乳腺上皮细胞或癌旁组织相比,miR-101在乳腺癌细胞或乳腺癌组织中表达降低。体外增殖实验显示,过表达miR-101对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖无明显影响,但是能显著抑制细胞的运动和迁移能力(P<0.001)。Western印迹实验显示在外源性过表达miR-101模拟物的MDA-MB-231细胞中,EZH2的表达明显下降,而E-钙黏蛋白的表达升高。结论:miR-101的表达在乳腺癌组织和细胞中发生了下调。miR-101抑制乳腺癌细胞运动和迁移能力可能是通过靶向抑制EZH2,间接上调E-钙黏蛋白来实现。     

采用三维数据分析拍摄角度对保乳手术美容效果评价的影响

目的 采用三维（3D）激光扫描数据研究使用基于二维（2D）图片的乳腺癌保乳手术美容效果客观评价方法时,拍摄图片的角度对评价结果一致性的影响。方法 获取两种不同图源的2D图片: 采用索尼数码单反相机α77拍摄获得接受保乳手术治疗的30位患者乳房区域的2D数码正面照片;同时使用激光扫描仪获取患者乳房的完整3D几何模型和表面纹理,并对沿身体中线旋转后的3D模型进行屏幕截图,生成不同视角的2D图片来模拟不同的拍摄角度。邀请3位专家依据Harris主观标准对两种图源的正面照片进行美容效果评价;并采用客观评价方法来评价所有2D图片;分析拍摄角度对总体客观评价结果及乳房对称性、颜色和瘢痕三个客观评价指标测量值的影响。结果 两种图源的2D图片对主观评价结果的影响差异无统计学意义（P＞0.05）。使用客观评价方法依次评价两种图源的2D图片,也显示出图源对评价的影响差异无统计学意义（P＞0.05）;采用客观评价方法进行美容效果评价,结果表明不同旋转角度对总体评价结果有明显的影响（P＜0.05）,同时乳房对称性、颜色和瘢痕三个特征指标的测量值随拍摄角度的变化发生明显的改变（P＜0.05）。结论 基于2D图片的评价易受拍摄角度的影响,基于3D数据的评价可给出更为客观的评价结果,具有很好的应用前景。     

激素受体和HER-2及Ki-67预NSL腺癌新辅助化疗疗效价值的分析

目的：探讨乳腺癌组织中雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人表皮生长因子受体2（HER-2）及Ki-67的表达状态对新辅助化疗反应的预测作用以及化疗前后其表达差异对疗效的影响。方法：免疫组织化学方法检测新辅助化疗前后118例乳腺癌组织的ER、PR、HER-2及Ki-67的表达情况,并分析其与新辅助化疗疗效的关系。结果：118例新辅助化疗乳腺癌病例中,ER-和PR-组pCR分别为26．1％和27．1％,明显高于ER＋组11．1％和PR＋组6．8％,P-0．003。HER-2和Ki-67的表达对新辅助化疗疗效无显著影响。新辅助化疗前ER、PR与Ki-67的表达呈明显负相关,P〈0．001;新辅助化疗后Ki-67的高表达病例数显著减少,P-0．001。结论：ER-／PR-的患者对新辅助化疗更为敏感,Ki-67在化疗后发生了显著下调,提示新辅助化疗能降低肿瘤的增殖活性。ER、PR及Ki-67可以作为新辅助化疗疗效的预测指标。     

微囊化人胰腺癌细胞建立裸鼠胰腺癌模型研究

目的研究微囊化人胰腺癌细胞建立裸鼠胰腺癌模型效果,以期建立稳定的更为理想的胰腺癌动物模型.方法 分别以人胰腺癌细胞悬液和微囊化人胰腺癌细胞悬液建立皮下移植瘤模型,定期监测皮下肿瘤大小,绘制生长曲线并进行比较.分别以人胰腺癌细胞悬液和微囊化人胰腺癌细胞建立原位移植瘤模型,分别于模型建立后第4周和第8周进行正电子发射计算机...