羧胺三唑乳清酸盐对人胰腺癌细胞系增殖及脂肪酸合成代谢的影响

目的 研究羧胺三唑乳清酸盐(CTO)对人胰腺癌细胞增殖影响及对其脂肪酸合成代谢的调控作用.方法 以人胰腺癌细胞系AsPC-1、AsPC-1/GEM(简称AR)、PANC-1、MiaPaCa-2 为研究对象,用磺酰罗丹明B(SRB)检测细胞存活率,采用qPCR检测胰腺癌细胞系中脂肪酸合成关键基因mRNA水平,用Western blot检测细胞内腺苷单磷酸依赖蛋白激酶(AMPK)和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)通路蛋白表达;利用液相色谱-质谱联用代谢组学技术检测细胞内脂质代谢物质差异.结果 与对照组相比,CTO显著降低AsPC-1、AR、PANC-1、MiaPaCa-2 4 株人胰腺癌细胞活率(P＜0.05);CTO下调细胞内脂肪酸合成关键基因的mRNA水平(P＜0.05);CTO下调细胞中AMPK、ACC及c-Myc蛋白表达(P＜0.05),而增加 p-AMPK、p-ACC 蛋白表达(P＜0.05);CTO 减少 AR 细胞中脂质代谢物含量(P＜0.05).结论 CTO通过抑制癌基因c-Myc蛋白表达及AMPK/ACC通路,下调脂肪酸合成相关基因的表达活性,减弱细胞脂肪酸合成代谢能力,进而抑制人胰腺癌细胞系AsPC-1、AR、PANC-1、MiaPaCa-2的增殖能力.     

羧胺三唑增强小鼠脾脏淋巴细胞促进结肠癌细胞系MC38和C26凋亡

目的 探讨羧胺三唑(CAI)直接或通过小鼠脾脏淋巴细胞间接对小鼠结肠癌细胞系(MC38和C26)存活和凋亡的影响.方法 体外培养结肠癌细胞系MC38和C26细胞,分离小鼠脾脏淋巴细胞,MC38和C26细胞分别与小鼠脾脏淋巴细胞共培养,不同浓度CAI处理细胞.CCK-8法检测细胞存活,流式细胞测量术检测细胞凋亡以及小鼠脾...     

稳定敲除Mcart-1下调RAW264.7巨噬细胞增殖能力和氧化磷酸化水平

目的 基于CRISPR/Cas9原理构建Mcart-1稳定敲除的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞株RAW264.7,检测其细胞增殖能力和能量代谢水平。方法 用Cas9慢病毒和sgRNA慢病毒分两步感染RAW264.7巨噬细胞,并挑选单克隆细胞：qPCR和Western blot检测Cas9表达水平和Mcart-1敲除效果;单细胞测序分析突变位点;细胞能量代谢分析仪Seahorse检测细胞耗氧速率(OCR)和能量代谢表型;试剂盒测定细胞内总ATP含量;细胞计数仪计数和羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色检测细胞增殖。结果 成功构建Mcart-1稳定敲除的RAW264.7细胞株(记为Mcart-1^-/--RAW264.7);该细胞株中Mcart-1发生移码突变;与野生型RAW264.7细胞系(记为RAW264.7)相比,Mcart-1^-/--RAW264.7细胞氧气消耗速率(OCR)下降,胞外酸化速率(ECAR)升高;与RAW264.7细胞相比,Mcart-1^-/--RAW264.7细胞内总ATP含量下降(P<0....