日本脑炎病毒受体74×103分子的分离与初步鉴定

目的 分离和初步鉴定口本脑炎病毒(JEV)易感细胞C6/36和Vere细胞上受体分子.方法 应用免疫共沉淀(Co-IP)技术,从C6/36和Vero细胞分离与JEV结合的受体分子,做质谱分析鉴定和Western blot检测.用激光共聚焦技术(LSCM)观察候选受体分子在细胞膜上的定位及与JEV结合的情况.结果 经过Co-IP反应,从C6/36、Vem细胞上分离出多个与JEV结合的分子条带.质谱分析首次鉴定出一个蛋白,即C6/36细胞上与JEV结合的相对分子质最(Mr)为74×103分子,为HSC70蛋白.进一步用抗HSC70抗体做Western blot,榆测剑从C6/36和Vem细胞膜上Co-IP分离出的74×103蛋白.LSCM观察到JEV吸附在C6/36细胞膜上时,HSCT0蛋白与JEV共定位.结论 C6/36细胞上Mr为74×103的HSC70可能是JEV的受体分子.     

HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA聚合酶抑制剂的临床研究进展

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus.HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶和NSSB RNA依赖的RNA聚合酶是病毒蛋白前体加工成熟和复制过程中十分重要的两个酶,是抗HCV治疗的理想靶点.近年来,关于HCV NS3/4A蛋白酶和NSSBRNA聚合酶抑制剂的研究是抗HCV研究最为活跃的方向,本文综述了他们在临床试验中的最新研究进展.     

HLA-G基因siRNA真核表达质粒的构建及其对转染JEG-3细胞株HLA-G表达的抑制作用

目的:构建针对人类白细胞抗原-G基因(human leukocyte antigen-G,HLA-G)基因siRNA表达质粒,观察其对转染JEG-3细胞的HLA-G基因表达的抑制作用。方法:选择RNA干涉靶序列,体外合成两段互补的寡核苷酸,通过与线性化pSuppressor-U6-neo连接、转化大肠杆菌,扩增、纯化得到所需质粒,通过琼脂糖凝胶电泳及基因测序鉴定其分子量及插入片段的序列。将重组真核表达质粒pSuppressor-U6-neo-HLA-G用脂质体法转染JEG-3绒癌细胞株。应用RT-PCR、Western-blot方法检测转染的JEG-3细胞中HLA-G基因的表达水平。结果:双酶切鉴定及测序图显示,插入的寡核苷酸序列与设计的序列完全相符。RT-PCR和Western-blot结果均表明瞬时转染重组pSuppressor-U6-neo-HLA-G质粒明显抑制了JEG-3细胞中HLA-G基因的表达。结论:本试验成功构建了针对HLA-G基因的siRNAs表达质粒pSuppressor-U6-neo-HLA-G,瞬时转染JEG-3细胞后可以明显抑制HLA-G基因的表达。     

天花粉蛋白突变体TCS_(KR173-174CG)生物活性及免疫原性研究

目的:对中草药成分天花粉蛋白(TCS)进行定点突变,使其免疫原性有所降低而生物活性不受或少受影响。方法:选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点(KR173-174)进行定点突变,并将所构建的突变体(TCSKR173-174CG)基因在大肠杆菌中表达及纯化。随后与野生型TCS(wTCS)比较,分析其DNA酶活性、致核糖体失活活性、免疫原性和急性毒性。结果:初步检测发现,所构建的突变型TCS活性与wTCS活性几乎相当,而免疫原性有所降低。结论:通过该方法改造TCS是可行的,有可能为抗HIV治疗提供一种高效、低毒、廉价的药物。     

特异性免疫牛奶对HBV和HCV的预防感染作用研究

目的观察正常人饮用免疫牛奶预防HBV和HCV感染的作用,同时观察正常人饮用免疫牛奶预防其他病原体感染的作用.方法选用符合条件的人员共164人,不分男女、年龄,随机分为2个组,分别食用免疫牛奶和普通牛奶3个月,检测饮用牛奶前后实验人群的血清HBsAg和抗HCV,记录有无感冒及感冒次数等.结果免疫牛奶组与普通牛奶组相比,有预防HBV感染的作用,但对预防HCV感染无作用;该免疫牛奶对预防流感病毒感染也有一定作用.结论该免疫牛奶可以提高人体抗HBV和感冒病毒的能力.     

用于汉滩病毒固有免疫应答研究的永生化人脐静脉内皮细胞系的建立

目的 通过导入人端粒酶逆转录酶(hTE RT)基因构建永生化人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC-hTERT),探索永生化HUVEC对汉滩病毒(HTNV)感染效率及细胞固有免疫调控的影响,评价HUVEC-hTERT作为研究HTNV细胞模型的潜能.方法 将hTERT基因克隆入慢病毒载体,构建pCDH-CMV-hTERT-EF...