医学微生物学发现史在教学中应用的思考

医学微生物学具有内容多、不系统、推理少、易混淆的特点,如何提高学生的学习兴趣、变被动学习为主动学习是提高教学质量的关键。通过在课堂教学中引入重要病原微生物的发现史,让学生了解科学探索的思维过程、方法及社会历史背景等,激发了学生学习的兴趣,加深了学生理解微生物学的意义,起到了良好的教学效果。     

特异性免疫牛奶对乙型肝炎的辅助治疗研究

目的:观察免疫牛奶对乙型肝炎患者的辅助治疗作用。方法:选择乙型肝炎患者86例并分为两组,分别食用免疫牛奶和普通牛奶3个月,观察和记录患者食用前后症状(疲乏、纳差、失眠、黄疸、腹胀和便溏)与化验指标(ALT、AST、总蛋白、白蛋白和HBV-DNA)的改善情况,用秩和检验进行统计学处理。结果:免疫牛奶组与普通牛奶组患者在症状和肝功能改善方面差异有显著性,免疫牛奶有改善乙型肝炎患者症状和肝功能的作用,对乙型肝炎病毒增殖有一定的抑制作用。结论:该免疫牛奶可以用于乙型肝炎患者的辅助治疗。     

HCV多中和抗原表位嵌合病毒样颗粒免疫获得血清内中和抗体评价北大核心CSCD

目的:纯化的HCV多中和抗原表位及HCV包膜蛋白E2嵌合的HBV S抗原病毒样颗粒免疫新西兰兔,测定免疫血清内的中和抗体。分析中和抗体对HCVpp感染Huh7.5的中和作用。方法:纯化的HCV多中和抗原表位及包膜蛋白E2嵌合的HBV S抗原病毒样颗粒(VLPs-MEp S、VLPs-E2S)10μg皮下接种新西兰兔,间隔2周共免疫3次,采集不同时间免疫兔血清,ELISA方法测定血清内的抗体,PBS组作为对照;制备1b型HCVpp,观察血清抗体对HCVpp感染Huh7.5的中和作用,对免疫血清保护性进行初步评价。结果:免疫后血清中产生一定水平的中和抗体,血清中和抗体测定VLPs-MEp S明显高于VLPs-E2S(P<0.05)。VLPs-MEp S与VLPs-E2S组均显著高于对照PBS组(P<0.01)。对HCVpp抑制作用,VLPs-MEp S高于VLPs-E2S组(P<0.05),最高中和率可达61.49%,二者均高于对照组(P<0.01)。结论:嵌合病毒样颗粒免疫新西兰兔后产生一定水平中和抗体,该中和抗体具有保护作用,为研发中和抗体表位疫苗奠定基础。     

让医学微生物学实验课贴近于临床检验探讨

医学微生物学实验课是医学微生物学的重要组成部分,在促进基础研究与临床应用相互转化中起着重要作用.应从加强基本实验技能训练,围绕病例开展实验设计,建立开放性实验室,增加先进仪器的讲解和培训这几方面着手,让医学微生物学实验课更贴近于临床检验,使学生深入掌握检验工作的理论知识和操作要点,促进学生多方面综合素质的提高,推动医学教育事业的进步.     

宿主蛋白LSm1-7复合体在登革病毒RNA复制中的作用研究

目的 探讨LSm1-7复合体在登革病毒(DENV)RNA复制中的作用.方法 DENV感染HepG2细胞后,在不同时间点(2、24、36、48 h)收集细胞和提取总mRNA,实时定量PCR (RT-qPCR)分析LSm1表达水平;将LSm1的siRNA和非特异对照siRNA两次转染HepG2细胞后感染DENV-2,24h后收集细胞,提取总mRNA,RT-qPCR分析LSm1表达水平与病毒RNA表达水平;利用LSm1抗体与dsRNA抗体对DENV感染细胞进行免疫荧光染色,激光共聚焦分析LSm1与dsRNA共定位情况.结果 与2h比较,随着时间的推移,DENV-2 RNA和LSm1 RNA水平逐渐升高;与对照组siNC比较,siLSm1组LSm1 RNA水平明显降低,沉默效率达78.2％;与对照组siNC比较,siLSm1组DENV RNA含量降低35.6％;LSm1-7复合体在DENV感染HepG2细胞后募集到核周围,与DENV dsRNA共定位.结论 LSm1-7复合体可能作为DENV复制复合物的组成部分,正调控DENV RNA的复制.     

汉坦病毒病毒吸附蛋白表位的研究

目的　研究并确定汉坦病毒 (HTNV)病毒吸附蛋白 (VAP)相关表位的序列特征。方法　淘筛噬菌体肽库 ,将阳性克隆携带的外源肽与HTNV囊膜糖蛋白G2做同源性分析。应用IFA及ELISA法鉴定阳性噬菌体的特性。合成短肽 ,结合激光扫描共聚焦显微 (LSCM)技术观察该短肽与宿主细胞膜的结合情况。结果　保守性序列模式PX( 1 2 ) HX( 0 2 ) H与HTNVG2上96 YPWHTAKCHY1 0 5序列相似 ,合成的阳性短肽可以与病毒敏感细胞膜相结合。结论　保守基因序列PX( 1 2 ) HX( 0 2 ) H及与之对应的HTNVG2上96 YPWHTAKCHY1 0 5序列在病毒与宿主细胞结合中可能起作用 ,且是VAP的相关表位     

SARS冠状病毒核衣壳蛋白的重组表达及其单克隆抗体的制备

目的: 表达SARS冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白),并以表达产物为免疫原制备特异性单克隆抗体 (mAb)。方法: 采用RT- PCR方法, 从灭活的病毒抗原标本中扩增编码N蛋白的基因。测序确认后, 再亚克隆至原核表达载体中。从SDS -PAGE凝胶中回收原核表达产物后免疫BALB/c小鼠, 经融合、筛选制备特异性mAb。结果: 从标本中扩增出 1 269bp的DNA, 测序结果证实为N蛋白基因。将该基因克隆至原核表达载体中后, 在大肠杆菌中获得了较好的表达。表达产物经SDS- PAGE后, 在Mr约为 43 000处可见 1条明显的诱导表达带。Westernblot的结果表明, 该电泳带与SARS患者的恢复期血清呈特异的免疫反应。从SDS- PAGE凝胶中回收表达产物并免疫BALB/c小鼠, 制备出 3株抗N蛋白的mAb。这些mAb与SDS- PAGE凝胶上Mr约为 43 000的蛋白带也呈现很强的免疫反应。结论: 所获的重组N蛋白及特异性mAb, 将为进一步建立SARS病毒感染早期诊断的方法奠定了基础。     

RNA干扰技术抑制JEG-3细胞中HLA-G的表达

目的:以人类白细胞抗原G基因(HLA-G)为靶基因,采用RNA干扰(RNAi)技术特异性地抑制JEG-3细胞中HLA-G的表达。方法:针对HLA-G基因设计一段小干扰RNA(siRNA),由Ambion公司化学合成,用脂质体lipofectamine2000将该siRNA转染JEG-3细胞,采用RT-PCR、流式细胞术和Westernblot分别从mRNA和蛋白质水平检测该siRNA对HLA-G表达的影响。结果:针对HLA-G的siRNA能够明显下调JEG-3细胞中HLA-G的表达水平,并具有良好的特异性。结论:在JEG-3细胞系中采用RNAi技术特异性下调了HLA-G基因的表达,为进一步研究HLA-G在人类的母胎免疫耐受、正常妊娠的维持及助孕技术应用等方面的作用奠定了实验基础。     

乙肝病毒preS1基因与截短C基因真核表达载体构建及表达

目的建立乙型肝炎病毒（HCV）preS1基因与截短C基因真核表达载体，并在CHO细胞中瞬时表达。方法PCR方法扩增HBV核心区羧基端部分缺失的基因片段和preS1全基因，克隆入真核表达载体pcDNA3．1（-）后测序鉴定，并通过脂质体瞬时转染CHO细胞。结果构建了真核表达载体pcDNA3．1（-）-Ct-preS1，成功转染CHO细胞，间接免疫荧光和RT—PCR证实pcDNA3．1（-）-Ct-preS1在CHO中表达截短的核心基因和preS1基因融合蛋白。结论成功构建preS1基因与截短C基因真核表达载体，可在CHO细胞中瞬时表达，为深入研究HBV基因免疫奠定了基础。     

人羧肽酶A1活性中心的毕赤酵母可溶表达

目的:应用毕赤酵母表达系统表达人羧肽酶A1(carboxypeptidase A1,CPA1)活性中心蛋白.方法:从pGEX-CPA1重组质粒中扩增出CPA1活性中心基因,亚克隆入酵母表达载体pPIC9K,酵母重组表达载体pPIC9K-CPA1active center电转化入毕赤酵母SMD1168,并进行营养缺陷筛选和G418抗性筛选,对高拷贝整合的重组酵母表达菌株诱导表达.结果:构建得到酵母融合重组表达载体pPIC9K-CPA1active center,经G418浓度梯度筛选得到串联整合16个重组表达载体的重组酵母表达菌株,诱导表达后得到CPA1活性中心蛋白.结论:在毕赤酵母中成功表达了CPA1活性中心,为进一步研究CPA1活性中心在抗体导向酶-前体药物疗法中的应用打下了基础.