TXNDC5在胃癌细胞中相互作用蛋白分子的筛选

目的 筛选并分析硫氧还蛋白5(TXNDC5)在胃癌细胞中的关键相互作用蛋白分子.方法 以pcDNA3.1为基础构建pcDNA3.1-TXNDC5-FLAG真核表达载体,并以此载体瞬时转染人胃癌细胞系SGC7901,RT-PCR法及Western blotting法检测TXNDC5融合蛋白表达.采用串联亲和纯化技术收集胃...     

HCV 多中和抗原表位嵌合病毒样颗粒免疫获得血清内中和抗体评价

目的:纯化的HCV 多中和抗原表位及HCV 包膜蛋白E2 嵌合的HBV S 抗原病毒样颗粒免疫新西兰兔,测定免疫血清内的中和抗体。分析中和抗体对HCVpp 感染Huh7.5 的中和作用。方法:纯化的HCV 多中和抗原表位及包膜蛋白E2 嵌合的HBV S 抗原病毒样颗粒(VLPs-MEpS、VLPs-E2S)10 滋g 皮下接种新西兰兔,间隔2 周共免疫3 次,采集不同时间免疫兔血清,ELISA 方法测定血清内的抗体,PBS 组作为对照;制备1b 型HCVpp,观察血清抗体对HCVpp 感染Huh7.-5 的中和作用,对免疫血清保护性进行初步评价。结果:免疫后血清中产生一定水平的中和抗体,血清中和抗体测定VLPs-MEpS 明显高于VLPs-E2S(P<0.05)。VLPs-MEpS 与VLPs-E2S 组均显著高于对照PBS 组(P<0.01)。对HCVpp 抑制作用,VLPs-MEpS 高于VLPs-E2S 组(P<0.05),最高中和率可达61.49%,二者均高于对照组(P<0.01)。结论:嵌合病毒样颗粒免疫新西兰兔后产生一定水平中和抗体,该中和抗体具有保护作用,为研发中和抗体表位疫苗奠定基础。     

人CD81细胞外区大环原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达和纯化

目的:构建人CD81-LEL基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达. 方法:通过PCR扩增得到CD81-LEL基因编码区片段,与pMD18-T载体连接,经序列测定后,再将该扩增片段亚克隆入原核表达载体pET32a( )中.酶切鉴定正确的表达载体pET32a-CD81-LEL转化表达菌BL21(DE3)进行诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行鉴定,用镍离子亲和层析法纯化融合蛋白. 结果:成功构建了原核表达载体pET32a-CD81-LEL;SDS-PAGE显示目的蛋白大量表达且呈可溶性状态,Western-blot显示目的蛋白正确表达,并用镍离子亲和层析法获得纯化的重组蛋白. 结论:CD81-LEL可以在大肠杆菌中表达,为进一步研究CD81与丙型肝炎病毒(HCV)包膜糖蛋白E2的结合提供了有用的研究资料.     

HLA-G短干扰RNA真核表达载体的构建及其在JEG-3细胞株中抑制HLA-G表达的研究

目的:构建HLA-G短干扰RNA表达质粒及探讨HLA-G的功能。方法:根据siRNA设计的原则,结合pSilencer2.1-U6-neo质粒的特点,针对HLA-G基因设计并合成两对寡聚DNA片段,退火后将其克隆入pSilencer2.1-U6-neo,将重组真核表达质粒pSi-lencer2.1-U6-neo-HLA-G采用脂质体法转染JEG-3绒癌细胞株。应用RT-PCR、W estern-blot等方法检测转染的JEG-3细胞中HLA-G基因的表达水平;MTT法检测转染后JEG-3细胞增殖的变化。结果:RT-PCR和W estern-blot结果均表明瞬时转染重组pSilencer2.1-U6-neo-HLA-G质粒明显抑制了JEG-3细胞中HLA-G基因的表达。实验组JEG-3细胞生长较对照组明显受到抑制。结论:pSilencer2.1-U6-neo-HLA-G质粒构建成功,可下调JEG-3细胞中HLG的表达,抑制绒癌细胞生长。     

融电子教案与传统教案于一体的新型电子教案的制作设计

利用Powerpoint2000的"备注"栏功能,将纸质文件教案的注释和内容等写入备注栏;利用计算机设置功能,把Win-dows桌面扩展到另一台监视器上。结果是教员使用的电脑显示器可以同时显示幻灯和备注内容,而学员观看的投影大屏幕上只显示幻灯内容,隐去备注内容,由此设计出集传统纸质教案与传统电子教案于一体的新型电子教案,极大的方便了教员上课,提高了教学效果,省时省力,具有推广使用前景。     

宿主蛋白LSml-7复合体在登革病毒RNA复制中的作用研究

目的探讨LSml-7复合体在登革病毒（DENV）RNA复制中的作用。方法DENV感染HepG2细胞后．在不同时间点（2、24、36、48h）收集细胞和提取总mRNA,实时定量PCR（RT-qPCR）分析LSml表达水平;将LSml的siRNA和非特异对照siRNA两次转染HepG2细胞后感染DENV-2,24h后收集细胞,提取总mRNA,RT-qPCR分析LSml表达水平与病毒RNA表达水平;利用LSml抗体与dsRNA抗体对DENV感染细胞进行免疫荧光染色,激光共聚焦分析LSml与dsRNA共定位情况。结果与2h比较,随着时间的推移,DENV-2RNA和LSmlRNA水平逐渐升高;与对照组siNC比较,siLSml组LSmlRNA水平明显降低,沉默效率达78．2％;与对照组siNC比较,siLSml组DENVRNA含量降低35．6％：LSml-7复合体在DENV感染HepG2细胞后募集到核周围,与DENVdsRNA共定位。结论LSml-7复合体可能作为DENV复制复合物的组成部分,正调控DENVRNA的复制。     

医学微生物学课堂教学与网络课程的比较研究

高校网络课程的发展给传统课堂教学带来了挑战,同时也是传统课堂教学改革的重要契机。文章对这两种教学模式的优点和不足之处进行了深入分析,提出了网络课程和课堂教学进行优势互补和有效整合的几点意见,希望能够为高校医学微生物学探索出一种高效的适应时代发展的新的教学模式,从而激发学生学习兴趣,提高教学质量。     

针对HLA-G的siRNA的载体构建与表达及效应检测

目的构建针对HLA-G的siRNA的表达载体,研究其对NK细胞杀伤效应的影响。方法构建针对HLA-G的siRNA真核表达质粒pSuppressor-U6-neo-HLA-G,转染JEG-3滋养细胞系。采用RT-PCR、Western blot检测转染的JEG-3细胞中HLA-G的表达水平。将NK-92MI细胞(效应细胞)与滋养细胞(靶细胞)共同培养,以LDH释放法观察不同效靶比例时NK-92MI细胞对靶细胞的杀伤效应。结果NK-92MI细胞对转染针对HLA-G的siRNA的JEG-3细胞的杀伤作用较未转染细胞明显升高(P<0.001)。结论针对HLA-G的SiRNA增加NK细胞对滋养细胞的杀伤,HLA-G具有保护滋养细胞免受NK细胞杀伤的作用。     

HBV截短core基因融合preS1基因在BCG中的表达及其免疫应答

目的:探讨HBV相关抗原在卡介苗(BCG)中的有效表达及其刺激产生的体液和细胞免疫应答效果。方法:将带有HBV截短C基因和preS1基因片段的穿梭载体转化BCG菌株,筛选重组菌,SDS-PAGE和Western blot实验分析其抗原表达特性;分别以生理盐水、BCG、BCG-pDE22、BCG-pDE22-CS1皮下注射BALB/c小鼠,进行连续抗体测定和细胞毒性T细胞杀伤实验。结果:与对照组相比,重组BCG可表达Mr为24000的新生蛋白,与CS1融合蛋白大小相符,Westernblot实验分析显示出良好的抗原结合特性;带有HBVCS1抗原基因的重组BCG免疫组抗体滴度显著升高,特异性杀伤能力更强。结论:BCG可以作为HBV相关抗原的活载体,为研制HBV新型疫苗提供了实验依据。     

以培养创新能力为中心的医学微生物学实验课教学实践

深化高等医学教育，培养学生的科研素质、创新能力，倡导源创精神势在必行。在医学微生物学实验课中。以培养学生创新能力为中心进行教学改革，取得了良好的教学效果。